Коронавирусы КРС впервые выделены в США. У неонатальных телят коронавирусы вызывают диарею. Заболевание мало изучено.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. В естественных условиях болеют телята в возрасте 8—9 дней. Болезнь продолжается 2—3 недели, тогда как реоинфекция чаще проявляется в возрасте до 5 дней. В США при вспышках диареи у телят в возрасте 3 недель чаще выделяли рео-, коронавирус, оба вируса вместе.
При заражении коронавирусами у телят per os развивается диарея. До появления диареи у зараженного теленка наблюдается депрессия и анарексия. Диарея продолжается 4—5 дней. Без лечения теленок через 7 дней обычно погибает от обезвоживания. У телят коронавирусы поражают прямую кишку, вызывают поражение ворсинок и увеличение мезентериальных лимфоузлов (в препаратах из них обнаруживают специфический АГ).
Особенность инфекции состоит в том, что коронавирус размножается как в кишечнике, так и в респираторном тракте телят, хотя вызывает диарею. Вирус преимущественно размножается вдистальной части тонкого и толстом кишечнике, эпителиальных клетках слизистой оболочки носовой полости, трахеи и легких. Однако, несмотря на размножение в респираторном пути, коронавирус КРС сам по себе не может вызвать респираторные заболевания телят.
Морфология и химический состав. Морфологически они сходны с вирусом трансмиссивного гастроэнтерита и в культуре клеток вызывают образование синцития. Основные структурные белки коронавирусов — нуклеокапсидный белок (N), мембранный гликопротеид (М, Е1) и спайковый (отростчатый) гликопротеид (S, E2). Кроме них, присущих всем коронавирусам, у коронавирусов человека и КРС обнаружен дополнительный гликопротеид (gp 65), который не связан ни с S-, ни с N - полипептидами. Инфекционность вируса in vitro нейтрализуют только монАТ к белкам S и N, но не к М.
Антигенная вариабельность и родство. Коронавирусы крупного рогатого скота не имеют антигенного родства с ГВЭС, ВИГС, ВИБП. В перекрестной РН установлено, что кишечные и респираторные изоляты коронавируса КРС принадлежат к одному серотипу независимо от источника выделения. Коронавирусы КРС имеют тесную антигенную связь с кишечными коронавирусами индеек, четырьмя главными (S, НЕ, М и N) коронавируса кошек, перекрестно реагируют с четырьмя гомологичными белками кишечного коронавируса КРС — белками N-M и белком N ВИБП. В настоящее время привлекает внимание исследователей изучение антигенных взаимоотношений между коронавирусами человека и животных. Все известные коронавирусы с учетом их антигенной структуры объединены в четыре группы. Первые две группы составили антигенно различные коронавирусы млекопитающих. В одну из групп вошли коронавирусы человека во главе с прототипным шт. 229 Е, коронавирус ТГС и коронавирус собак. Во вторую группу объединены коронавирусы человека с прототипным шт. ОС-43, коронавирус КРС, коронавирус мышей и крыс. Третью и четвертую группы составили коронавирусы птиц, которые по морфологическим и антигенным свойствам значительно отличаются от коронавирусов млекопитающих. Использовали различные антигены бычьего коронавируса, включая свежевыделенный природный штамм бычьего респираторного коронавируса 97TXSF-Zn 15—2, природный энтеро-вирусный бычий коронавирус (БЭКВ) штамм Lyl38—3 и адаптированный к культуре клеток эталонный штамм L9—81 БЭКВ, для изучения выработки сывороточных антител при респираторных коронавирусных инфекциях крупного рогатого скота в РН и РГА. Пробы сыворотки собирали в начале заболевания и в течение 5 недель с недельным интервалом. Наиболее высокие титры антител обнаружены против БРКВ штамма 97TXSF-Zn 15—2, чем против обоих БЭКВ. Различие между первыми и вторыми было достоверно, между двумя кишечными штаммами — недостоверно. Наименьшие титры были обнаружены против штамма L9—81 БЭКВ.
Шт. ОС-43 коронавируса человека обнаружил антигенное родство с коронавирусом, вызывающим диарею новорожденных телят. Наличие общих антигенных детерминант установлено в РН, РСК и РТГА и подтверждено обнаружением сероконверсии у людей с коронавирусной инфекцией.
Сравнительное изучение четырех главных структурных белков (gp 190, gp 140, gp 52 и gp 26) шт. ОС-43 человека и шт. Mebus KPC показало их идентичность. При оли-гонуклеотидном анализе шт. ОС-43 человека и бычьего коронавируса обнаружено, что 55 % РНК обоих вирусов выявляется в виде фермента. Уровень гомологии их РНК составляет более 96 %. Значение коронавирусов КРС, как причины заболеваний человека в настоящее время точно не определено, но потенциальная опасность этих вирусов для людей имеет важное эпидемиологическое значение, особенно в сельской местности. Подавляющее большинство сообщений свидетельствует о широких антигенных и биологических взаимосвязях между коронавирусами человека и животных некоторых видов (КРС, обезьян, мышей). Изучены различия в реактивности с моно-клональными антителами против белка НЕ и изменения аминокислотного состава белков НЕ, S и ns 4, 9 у коронавирусов крупного рогатого скота, вызывающих кишечные и респираторные заболевания в стадах молочного крупного рогатого скота. С помощью ПЦР И последующего секвенирования вариабельной области НЕ гена показана возможность индикации и штаммовой дифференциации коронавируса КРС. Определены нуклеотидные последовательности три штаммов и выявленных на территории Российской Федерации восьми полевых изолятов вируса. На основе полученных и ранее опубликованных нуклеотидных последовательностей вируса проведен анализ вариабельной области НЕ гена коронавируса КРС.
Экспериментальная инфекция. У телят, не получающих молозива, или у гнотобио-тов, диарея развивается через 18—24 ч после заражения. Поражение эпителиальных клеток тонкого кишечника и в последующем замена их незрелыми клетками приводят к нарушению всасывания, диарее и смерти от потери ионов, бикарбонатов и сывороточных белков от ацидоза и обезвоживания. Интраназальное и интратрахеальное заражение телят сопровождается лишь незначительными респираторными нарушениями.
Культивирование. Ронавирусы размножаются (после предварительной адаптации) в культуре клеток почки КРС. Кроме того, их культивируют в организме телят 6-не-дельного возраста, не получающих молозива (телят кормят пастеризованным молоком). Система культивирования влияет на полипептидный состав вируса. Разработаны методы суспензионного культивирования коронавирусов, в том числе коронавируса крупного рогатого скота, в клетках яичников китайских хомячков.
Клонирована область генома бычьего коронавируса (БКВ), функционирующая как сигнал упаковки. Эта область длиной 291 н. на 72 % гомологична области гена 1М вируса гепатита мышей (ВГМ), содержащей сигнал упаковки. При прикреплении клонированной области БКВ к некоронавирусной РНК транскрипты РНК упаковываются в вирионы БКВ и ВГМ. Таким образом, геном БКВ содержит сигнал упаковки, консервативный на уровне последовательности и функции.
Установлены АГ свойства с гликопротеином 140 кД, состоящим из двух молекул 65 кД, соединенных дисульфидным мостиком. Вирус обладает агглютинирующей адсорбирующей активностью в отношении эритроцитов хомяка, мыши и крысы. ГА неотделим от вирусной частицы. В градиенте сахарозы он имеет плотность 1,18 г/см3. Белок НЕ (47 кД) ответственен за ГА. Коронавирусы КРС могут обусловливать латентную инфекцию. Клинически здоровый КРС может быть хроническим носителем вируса, выделяя его с фекалиями в течение 3 месяцев,
В Швеции описаны вспышки среди взрослого поголовья молочных стад: в 9 стадах обнаружены AT к коронавирусу КРС, а в одном — к коронавирусу и вирусу диареи КРС. AT к коронавирусу КРС выявлены через год после перенесенной болезни, передавались потомству и обнаруживались в сыворотке телят до 4—6 - месячного возраста. Антитела к KB КРС выявлены среди большей части шведских стад молочных коров, что соответствует распространенности в стране так называемой зимней диареи КРС. При инфицировании коронавирусом КРС существует вероятность увеличения риска развития заболеваний респираторного тракта и поражения легких. Соответствующий контроль может снизить возможность заболеваний органов дыхательной системы.
Иммунитет и специфическая профилактика. У животных-реконвалесцентов установлены специфические гамма-глобулины классов IgM и IgA, которые нейтрализовали коронавирусы в разведении 1:32. Это можно рассматривать как оценочный тест иммунной защиты организма. Наиболее эффективным методом борьбы с вирусной диареей новорожденных телят является оральная вакцинация живой вакциной, полученной из аттенуированных штаммов рота-коронавирусов. В экспериментальных условиях она защищает всех телят, а в полевых — снижает число заболевших. Инак-тивированные вакцины пригодны для вакцинации коров и создания молозивного иммунитета. Получена комбинированная вакцина против рота - и коронавирусной инфекции.
Аттенуация вируса наступала быстро. Для изготовления вакцины использовали вирус с активностью 5—6, lg ТЦДэд/мл - В инактивированной вакцине использовали культуральный вирус, который инактивировали формалином. АГ сорбировали на ГОА. Живую вакцину вводили подкожно стельным коровам (1—5 мл) за 30—90 дней до отела, инактивированную — применяли телятам орально (1,0—5 мл). В России разработана и внедряется в ветеринарную практику инактивированная ГОА вакцина против коронавирусного энтерита телят, которая предназначена для двукратной вакцинации глубокостельных коров. Испытание вакцины показало, что иммунный ответ у коров на введение препарата зависел от исходного уровня AT Вакцинация животных с низким уровнем AT (6 log2 и ниже) в крови индуцировала иммунный ответ с увеличением титра AT в 4—16 раз. Выпаивание телятам молозива вакцинированных коров, содержащего AT в титре 7 log2 и выше, снижало заболеваемость телят в 4—7 раз и предотвращало их гибель.
Разработка новых технологических схем лечения и средств специфической профилактики гастроэнтеритов инфекционной этиологии (колибактериоз, рота - и коро-навирусные диареи) в настоящее время особенно актуальна. Опыт сотрудников Бел-НИЭВ показывает, что применение комплексной схемы вакцинации стельных коров за 1,5—2 месяца до отела, а также применение специфических иммуноглобулинов, полученных из молозива, на 1-, 3- и 5-й дни жизни внутримышечно или подкожно независимо от клинического состояния, дает выраженный эффект. Проведен подбор лабораторных животных, наиболее подходящих для индикации антигенной активности коронавируса, оценена антигенная активность коронавирусной вакцины, приготовленной с использованием разных инактиваторов и адъювантов. Определены дозы, кратность, методы и сроки введения препарата.