Коронавирусная инфекция других видов животных

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 4.50 (1 Голос)

Коронавирусы собак описаны Такеуши, А. Бинн, Джервес и др. (1976). Вспышка двойной инфекции собак аденовирусом собак типа 1 и коронавируса собак охватила в приюте 200 взрослых животных и 30 щенят. 20 щенят погибли через 7—8 дней от начала заболеваний. У некоторых животных выявлены специфические антитела. Основные гистологические поражения проявлялись в ворсинках тонкого кишечника, лимфоидным истощением, гепатитом и бронхопневмонией. Методом ПЦР выявлена персистенция КВС, которая тестироваласьв фекалиях и сохранялась дольше, чем было описано ранее.

Вирус хорошо культивируется в культуре клеток почки собак. При экспериментальном заражении вызывает у щенков диарею, характеризующуюся атрофией ворсинок и потерей эпителиальных клеток. Коронавирус собак имеет антигенное родство с вирусом трансмиссивного гастроэнтерита, респираторной коронавирусной инфекцией свиней и вирусом ИПК.

Анализ последовательности 9,6 тыс. нуклеотидов З'-конца геномной РНК коронавирусной инфекции собак привел к заключению о высокой степени близости между указанными коронавирусами. Очищенный ПЦР-продукт одного из штаммов метили изотопом 32Р для получения нуклеотидного зонда. Сконструированный зонд был способен выявлять ОТ-продукты трех штаммов КВС, последовательности которых обладали 99,1—99,9 % гомологией с другими штаммами КВС. Полученные результаты свидетельствуют о консервативном характере последовательностей зонда, который можно использовать в исследованиях по молекулярной эпидемиологии КВС-инфекции у собак.

Разработан метод получения вакцины против коронавирусной инфекции собак. Шт. 1-171 (АТСС VR-809), TN-449 (ATCC VR-2068) или другие коронавирусы собак культивировали в перевиваемой линии почечных клеток кошек (CRFK, FC) или собак (ДК, МДСК) и др. и инактивировали бетапропиолактоном (0,2—0,5 %) или бинарным этиленимином (0,5—4 % от/об). В качестве адъюванта использовали этилен-малеиновый ангидрид в сочетании с NEOCRYL А-640 (кополимер стирена со смесью акриловой и метакриловой кислот) и др. Вакцина вызывала у собак образование AT и устойчивость к заражению вирулентным штаммом вируса.

Помимо инактивированной вакцины, в США применяется вакцина из модифицированного живого коронавируса собак, который полностью адаптирован к культуре клеток и избирательно инфицирует кишечный эпителий собак. Запатентована технология изготовления и применения вакцины. Клонирован и секвенирован ген S коронавируса собак, кодирующий белок шипов длиной 1452 остатка. Конструкции с S геном могут использоваться для профилактики, лечения и диагностики коронавирусной инфекции собак. При естественной и экспериментальной инфекции у животных поялялись высокие уровни фекальных IgA. У собак, инокулированных ороназальным путем ML CCV вакциной развились более высокие уровни фекальных IgA, чем у животных, инокулированных той же вакциной, но внутримышечно или инактивированной вакциной. Таким образом, было выявлено взаимоотношение между уровнем фекальных IgA, типом вакцины против CCV и степенью защиты от инфекции. Предложен метод защиты собак от коронавирусной инфекции, основанный на использовании живой или инактивированной вакцины, приготовленной из вируса ТГЭ. Для культивирования вируса использовались культуры клеток кошек или свиней.

Коронавирусный гепатит мышей, по-видимому, не представляет серьезной инфекционной патологии. Вирус является прекрасной лабораторной моделью изучения молекулярно-генетических характеристик. Примером этого является изучение влияния хозяйских факторов в репликации бычьего коронавируса и вируса гепатита мышей. Методом сдвига электрофоретической подвижности обнаружено взаимодействие специфических хозяйских белков с З'-нетранслируемой областью и хвостом поли (А) БКВ. Конкуренция с З'-нетранслируемой областью длиной 301 н. и хвостом поли (А) вируса гепатита мышей показала, что взаимодействия консервативны у БКВ и ВГМ. УФ-сшивка обнаружила белки с мол. м. 99 кД, 95 кД и 73 кД, а также менее интенсивно метящиеся белки с мол. м. 40—50 и 30 кД. Дефектные геномы БКВ с укороченным ХПА из 5 или 10 остатков реплицируются после трансфекции в клетках, зараженных вирусом-помошником.

Вирус гепатита мышей А59 вызывает в культурах мышиных глиальных клеток C57BL продуктивную, но не литическую инфекцию без межклеточного слияния. В перевиваемых линиях клеток ВГМ-А59 вызывает литическую инфекцию с экстенсивным образованием синцитиев. При заражении ВГМ-А59 гепатоцитов с задержанной кинетикой образуется немного синцитиев. Отсутствие образования синцитиев коррелирует с отсутствием протеина слияния — белка шипов S. Расщепление этого белка удалось обнаружить методом Вестерн-блота в зараженных гепатоцитах и глиальных клетках. S-белок не расщеплялся в гомогенатах печени мышей. Эти данные показали, что S-белок несущественен для вхождения и распространения ВГМ-А59 in vivo и для репликации in vitro.

Репликация вируса гепатита мышей (MHV) в активно растущих клетках DBT и 17CI-1 приводит к подавлению синтеза хозяйской ДНК и накоплению клеток в фазе Go/Gi клеточного цикла. Репликацию MHV подавляет гиперфосфорилирование белка ретинобластомы (pRb), которое необходимо для прогрессии клеточного цикла через позднюю фазу Gi в S-фазу. Содержание в клетках ингибиторов клеточных цик-линзависимых киназ (Cdk)p21ciP\/>77r/ и pl61NK4a при заражении MHV не меняется. Содержание циклинов фазы G1 (циклины Dl. D2. D3 и Е) снижается в клетках DBT и 17CI-1, a Cdk6 — в клетках 17CI-1. В обоих типах клеток при инфекции снижается также активность Cdk2. Полагают, что снижение количества комплексов циклины-Cdk в клетках, зараженных MHV, приводит к снижению активности Cdk и недостаточному гиперфосфорилированию pRb, что вызывает остановку клеточного цикла в фазе Go/Gi.

Методом нацеленной рекомбинации РНК сконструирован мутант вируса гепатита мышей (ВГМ), у которого эктодомен гликопротеина шипов S заменен на высокодивергентный эктодомен шипов S вируса инспекционного перитонита кошек. Полученный химерный вирус f-ВГМ приобрел способность заражать кошачьи клетки и одновременно утратил способность заражать мышиные клетки в культуре. Такое переключение видовой специфичности подтвердило, что узкий круг хозяев коронави-русов определяется на уровне взаимодействия эктодомена шипов S вируса с клеточным рецептором. Выделение f-ВГМ позволило картировать область, ответственную за включение эктодомена шипов S вируса в вирионы, как 64 С-концевых остатка эктодомена шипов S вируса общей длиной 1324 остатка. f-ВГМ является идеальным родительским вирусом для обратной генетики ВГМ с использованием нацеленной рекомбинации РНК, так как он дает возможность отбирать рекомбинанты, у которых восстановилась способность реплицироваться в мышиных клетках.

Для изучения взаимодействия белка матрикса М и белка шипов S (II) вируса гепатита мышей (ВГМ) использована коэкспрессия их генов в эукариотических клетках. Показано, что: 1) не требуется N-концевой домен белка матрикса М длиной 25 остатков, расположенный в просвете, для взаимодействия с белком шипов S; 2) деления 15 остатков, включение метки (гис)б и замена эктодомена белка матрикса М ВГМ на эктодомен белка матрикса М другого коронавируса не влияет на способность белка матрикса М ассоциироваться с белком шипов S; 3) делеции первых 2 или последних 2 трансмембранных доменов, не влияющих на топологию белка матрикса М, уменьшают, но не устраняют образование комплекса белка матрикса М-белка шипов S; 4) делеция хвоста на самом С-конце белка матрикса М не мешает связыванию с белком шипов S; 5) делении в амфипатической области белка матрикса М, расположенной на цитоплазматической стороне мембраны, значительно уменьшают образование комплекса белка матрикса М-белка шипов S. Таким образом, структурные требования для образования комплексов белка матрикса М-белка шипов S, не совпадают с требованиями, предъявляемыми к белку матрикса М во время сборки вирионов Вгм.


Коронавирусная инфекция других видов животных - 4.0 out of 5 based on 1 vote

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить