[Eguine West encephalomielitis (EEE) (англ.); Seuchenhafte Hinruckenmarkentzundung der Pferde, Amerikanische Hinruckenmarkentzundung (нем.)]
Восточный американский энцефаломиелит лошадей (ВАЭЛ) — болезнь однокопытных животных, характеризующаяся поражением преимущественно ЦНС, жел-тушностью слизистых оболочек и атонией ЖКТ. Вирус выделили в 1933 г. Тен Брук и Меррилом. Позже его выделяли от больных людей, а также от птиц и комаров некоторых видов. Болезнь распространена в центральных районах США, в Бразилии, Канаде, странах бассейна Карибского моря и восточных районах Южной Америки. Вирус выделен на Филиппинах. В штате Джорджия (США) ВАЭЛ регистрируют в виде эпизоотии. В США ВНА к вирусу обнаружены у 18—26 % Диких и домашних свиней. Однако клинических признаков инфекции у них не наблюдалось. В 1971 г. от Culiseta morsitans в окрестностях Нью-Йорка выделен вирус ВАЭЛ. В связи с этим, в 1977—1979 гг. изучали биологию этого вида насекомых и оценивали векторный потенциал в трех областях эндемического очага — в 40 км от Сиракуз (Нью-Йорк), в центре и периметре болот и возле селений. Показано, что Culistera. morsitans размножается 1 раз в год, продолжительность жизни его 8—12 недель, он строго орнитофилен. Популяции насекомых различаются в размерах и наблюдаются от середины мая до начала сентября. Потенциальный вектор Culistera. morsitans, такой же как у Culistera melanura. Насекомые локализуются в очагах ВАЭЛ в период распространения вируса.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У инфицированных лошадей наблюдается лихорадка и виремия, затем появляются симптомы поражения ЦНС: возбуждение, изменение поведения, сонливость и паралич. Погибает до 20 % заболевших. При патологоанатомическом исследовании отмечают деструкцию серого вещества головного мозга.
Морфология и химический состав. Размеры вирионов варьируют от 20 до 58 нм, частицы сферической формы.
Вирус инактивируется в течение 10 мин при 60 °С, а также при замораживании и оттаивании и обработке СОг, эфиром и дезоксихолатом, сохраняется при -20 и -70 °С. Воздействием азотистой кислотой на инфекционную РНК. удавалось получать мелко-бляшечные мутанты, которые отличались от исходного вируса. Воздействие гидроксиламина в условиях рН 6,1 ведет к более быстрой, чем при рН 9,1, инактивации вируса. Вирус ВАЭЛ удается концентрировать центрифугированием в градиенте плотности сахарозы (45 %) В течение 2,5 ч при 27 000 мин-', а затем в 30—50 %-ном растворе сахарозы за 20 ч при 24 000 мин-1. Данный метод позволяет сохранять 90 % Инфекционное™ вируса.
Антигенная структура. Известно, что белок оболочки вируса ВАЭЛ угнетает иммунный ответ здоровых мышей (СВАхС57В1) F на гетеро АГ при внутривенном введении за 24 ч до иммунизации эритроцитами барана (I). Определена топология АГ детерминант, ответственных за проявление ГА активности в генах вируса ВАЭЛ. С помощью панели с 17 образцами монАТ анти-ГА идентифицирован высококонсервативный С домен, распознаваемый группоспецифическими монАТ, в гене белка Е2 обоих вирусов. Эти монАТ ингибировали агглютинацию следующих альфавирусов: ЗАЭЛ, лесов Семлики, Чикунгунья, Аура, Гета, Синдбис и Пиксина. Определено, что доминанта С-региона ассоциирована с аминокислотными остатками порядковых номеров 59 и 232, что было продемонстрировано при определении нуклеотидной последовательности гена белка Е2 трех выделенных вариантов венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ).
Антигенная активность, антигенная вариабельность и родство. В сыворотке крови переболевших лошадей и людей имеются AT, участвующие в РСК, РН и РЗГА, сравнительная динамика которых не изучена. В антигенном отношении вирус ВАЭЛ выше, чем вирус ЗАЭЛ. В течение 1971 г. наблюдали вспышку энцефалита лошадей в США, при которой из 1982 проб (кровь, мозг, селезенка и др. ткани) от 1551 лошади выделено 76 изолятов вируса ВАЭЛ. Большинство (51,6—76,1 %) Инфицированных лошадей были из юго-восточных штатов. Изоляты идентифицировали в РН и РСК. 58 из 76 изолятов выделены из мозга и селезенки, 18 из сыворотки или крови. У 40 не вакцинированных лошадей был изолирован вирус ВАЭЛ и 26 из них (65 %) имели моноспецифические AT к вирусу ВАЭЛ, 4 имели более высокий титр к вирусу ВАЭЛ, чем к вирусу ЗАЭЛ; 5 имели ВНА к обоим вирусам. Одна сыворотка имела моноспецифические AT к вирусу ЗАЭЛ в РН и 4 сыворотки не имели AT Из 67 инфицированных вирусом ВАЭЛ лошадей 54 (80,6 %) погибли и 4 (6 %) выжили после болезни. Во время эпизоотии 1971 г. 30 % изолятов (76/67) отнесены к вирусу ВАЭЛ, 34 % (87/80) к ЗАЭЛ (эпизоотический штамм) и 36 % (93/80) к вакцинному штамму вируса ЗАЭЛ. Из 652 обследованных сывороток 119 (18,3 %) имели ВНА к вирусу ВАЭЛ (5).
Штаммы вируса ВАЭЛ, выделенные в отдаленных геофизических районах, в АГ отношении различны. Так, восемь штаммов этого вируса, полученных в США, на Ямайке, в Доминиканской Республике, отнесены к североамериканскому подтипу; другие восемь, выделенные в Панаме, Гвинее, Бразилии, Аргентине и на о. Тринидад, — к центрально-южно-американскому подтипу.
Выявлено четыре серотипа вируса ВАЭЛ. 1-й тип включает пять подтипов: 1 А, 1 В, 1С, ID и IE. В АГ-отношении вирус ВАЭЛ отличается от вирусов WEE и VEE в РСК, РН на мышах и в культуре клеток. Однако в РЗГА установлено родство его с другими альфавирусами. При пассировании и последующем клонировании вируса в культуре клеток КЭ можно получить АГ различные варианты вируса ВАЭЛ (шт. Агу-В). В этой же системе удалось получить два варианта (М и D) вируса, различных по патогенности для мышей и по антигенности в РН на мышах. По иммуногенным свойствам вирус ВАЭЛ больше близок к вирусу ВЭЛ, чем к другим альфавирусам.
Для реакции более пригодны эритроциты только что вылупившихся цыплят и утят. Эмбриональный вирус, обработанный сахарозой и ацетоном, повышает ГА активность. Вирус содержит гемолизин, а также интерферирует со многими вирусами, включая альфа-, флави-, миксо - и пикорнавирусы. Используется в качестве индикатора на присутствие интерферона.
У больных лошадей вирус выделяется с секретом носовой полости, мочой, молоком. У лошадей виремия невысокая, и они, вероятно, являются, так же, как и люди, тупиком инфекции.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на белых мышах, крысах, морских свинках, кроликах, обезьянах, белках, хлопковых крысах, оленях, козах, овцах, коровах, голубях и цыплятах при интрацеребральной инокуляции вируса. Наиболее чувствительны мышата и 4-5-недельные сирийские хомячки. Белые крысы, морские свинки и кролики невосприимчивы к вирусу при периферическом заражении. У мышей болезнь протекает как энцефалит. Инкубационный период 2—3 дня, поражается ЦНС. Для мышей вирус ВАЭЛ более вирулентен, чем вирусы ЗАЭЛ и ВЭЛ. Вирус высоко патогенен для КЭ. У фазанов и мелких птиц из отряда воробьиных развивается летальное заболевание. Свежевылупившиеся цыплята (до 12-часового возраста) пригодны для пассирования вируса в лабораторных условиях.
Для изучения выживаемости самок комаров Ае. albopictus, An. quadrimaculatus и С. pertuTbans кормили на цыплятах, зараженных вирусом восточного лошадиного энцефаломиелита (ВВЛЭ), и в разные сроки после заражения определяли выживаемость комаров. Контролем служили самки, которых кормили на цыплятах, не зараженных ВВЛЭ. В других опытах самок An. quadrimaculatus и С. perturbans заражали ВВЛЭ внутриторакально. Установлено, что при заражении Ае. albopictus. An. quadrimaculatus (перорально и интраторакально) и интраторакальном заражении С. perturbans ВВЛЭ не оказывал никакого влияния на выживаемость самок. Однако при пероральном заражении самок С. perturbans выживаемость их сильно сокращалась.
Культивирование. Вирус ВАЭЛ размножается в КЭ, в культуре клеток ФЭК, эмбриона мыши, хомяка, обезьяны, морской свинки, а также в клетках Hela, индуцируя цитопатические изменения. Из первично трипсинизированных тканей наиболее пригодна почка хомяка 20—25-дневного возраста. Культуру клеток выращивают на среде Игла с добавлением 2 % сыворотки хомяка. ЦПД вируса проявляется через 24 ч. В культуре ФЭК он образует бляшки. В некоторых линиях человеческих и куриных клеток при 31 °С может развиваться хроническая инфекция. Вирус ВАЭЛ размножается в организме экспериментально зараженных комаров и клещей. Имеются сведения о культивировании вируса в эмбрионах рыб и тканевой культуре измельченных личинок комара Aedes egypti.
Реализация генетической информации тогавирусов происходит в цитоплазме клетки в тесной ассоциации с клеточными мембранами. После инфекции и депротеинизации родительская РНК прикрепляется к мембране, с мембранами ассоциированы также вирусная РНК-полимераза и вирусспецифические полирибосомы. Репликация РНК тогавирусов идет по обычному для РНК-содержащих вирусов типу и проходит стадию репликативной промежуточной формы. Вирионная РНК, распадаясь после депротеинизации вириона на более мелкие фрагменты, обеспечивает трансляцию вирусспецифических белков. Предполагается, что эти же фрагменты РНК служат и матрицей для репликации. Репликация вирионной 42—49S РНК происходит в особом репликативном комплексе, хотя неясно, что является матрицей для репликации такой РНК. Синтез более мелких молекул РНК (15—26—33S), обладающих матричной активностью, происходит, видимо, в другом репликативном комплексе. Полипептиды вириона (или часть) образуются расщеплением более крупных белков предшественников. Ассоциация РНК с белком нуклеокапсида и образование нукле-окапсида происходят на внутрицитоплазматических мембранах.
Сформировавшиеся нуклеокапсиды мигрируют к модифицированным участкам наружной мембраны клетки, в которой клеточные белки заменены вирусспецифиче-скими гликопротеинами. Ассоциация нуклеокапсида с модифицированной мембраной и «одевание» нуклеокапсида происходят в процессе выхода вириона из клетки путем отпочковывания. По-видимому, некоторые структурные полипептиды модифицируются (расщепляются, дегликозилируются) уже на стадии вириона.
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные животные. Инфекция передается комарами. В распространении вируса могут участвовать более 20 видов комаров Culicinae, однако основной переносчик пока не установлен. В распространении вируса в естественных условиях, по-видимому, участвуют дикие птицы. Переносчиком вируса среди птиц является Culiseta melanura. Птицам (скворцам и белогорлым воробьям) вирус, очевидно, передается Cuiiseta morsitons. Переносчик вируса лошадям и людям неизвестен. Среди фазанов болезнь может распространяться при отсутствии членистоногого переносчика. Среди лошадей возможно контактное заражение. Распространению инфекции среди мышей может способствовать каннибализм. Исследовали наличие вирусов ВАЭЛ и HJ в сперме индюков, зараженных данными вирусами, и возможность их передачи при искусственном осеменении. Через 1—2 дня после заражения индюков внутримышечно дозой 2000 БОЕ/0,1 мл того или иного вируса наблюдали слабую депрессию, потерю аппетита, виремию. Через 1—5 дней вирусы обнаруживали в сперме и, по мнению авторов, она является одним из векторов передачи вирусов.
В естественных условиях вирус ВАЭЛ вызывает эпизоотии среди лошадей, фазанов и эпидемии среди людей. Клинически у человека болезнь протекает в виде энцефалита с большим процентом летальности или тяжелых последствий в виде умственной слабости. Возможна инаппарантная инфекция. В природе вирус выделяют из комаров Mousonta, Anopheles, Culiseta разных видов Culicoides. Он обнаружен в организме птичьих клещей Dermanyssus gallinae и блох Eomenacanthus stramineus и Menopon pallidum. В США наиболее часто его выделяли из комаров Culiseta melanura.
Иммунитет и специфическая профилактика. Переболевшие животные приобретают иммунитет, продолжительность которого не изучена. В сыворотке крови лоша-дей-реконвалесцентов обнаруживаются ВНА, КСА и анти-ГА. Для профилактики применяют живые и инактивированные вакцины. В качестве живой вакцины используют вирус, аттенуированный пассажами на голубях. Помимо того, получен вариант К-40 вируса ВАЭЛ. Он полностью утратил нейровирулентность, но индуцировал иммунитет, защищающий чувствительных животных (белые мыши, золотистые хомячки) от заражения высоковирулентным штаммом. Вирус, выращенный в суспензии свежеизолированных клеток КЭ обрабатывают формалином, (З-пропиолактоном и подвергают температурному воздействию. Наибольшим защитным эффектом для морских свинок обладала fj-пропиолактоновая вакцина. Для инактивиро-ванной вакцины берут культуральный вирус. В США применяют инактивированную вакцину из вируса, выращенного в культуре клеток КЭ. Кроме лошадей, инактивированной вакциной прививают лабораторных работников, контактировавших с вирусом. Есть сообщения о применении против ВАЭЛ и ЗАЭЛ бивалентной тканевой культуральной вакцины.