Техника получения крови и костного мозга

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 0.00 (0 Голоса)

Получение крови. Небольшое количество крови можно получить из кровеносных сосудов внутренней поверхности ушной раковины, а также из краевой вены наружной поверхности. Более значительное количество крови для постановки реакции оседания эритроцитов и химического анализа лучше всего получать у лошадей, крупного рогатого скота и овец из яремной вены; у свиней из крупных сосудов уха или из хвоста, кончик которого надрезают, а у плотоядных—из вены конечности.

У кур малое количество крови добывается из гребня или сережек, у уток и гусей—из мякоти ступни ног. Несколько капель крови из этих мест можно получить и без выдавливания. Значительное количество лучше всего получать из вены внутренней поверхности крыльев.

Перед взятием крови, волосяной покров на месте взятия, коротко выстригается или выбривается. Затем кожа протирается спиртом, а потом эфиром. Эфир высушивает кожу и вызывает реактивное расширение сосудов после их первоначального сужения. Если кожа грязная, ее вначале необходимо вымыть теплой водой с мылом, а затем хорошо просушить ватой и обезжирить эфиром.

Для получения малого количества крови из кровеносных сосудов лучше всего пользоваться оспопрививательным пером и инъекционной иглой. У птиц из гребня кровь берется иглой Франка, хотя можно пользоваться также и оспопрививательным пером.

При уколе в кровеносный сосуд уха необходимо, с противоположной стороны, поддерживать ухо пальцем с целью создания твердой основы. Между пальцем и ухом должен быть положен небольшой ватный шарик, чтобы избежать поранения пальца.

Кровеносный сосуд должен пересекаться иглой поперек. При продольном проколе стенки сосуда быстро сходятся и кровь не выходит в ранку. Укол делается умеренной глубины, с таким расчетом, чтобы не проколоть противоположной, второй стенки сосуда. Если ранка небольшая, кровь выделяется самопроизвольно небольшими каплями. Большие капли или вытекание крови струйкой нежелательны, особенно при приготовлении мазков. В случаях, когда кровь вытекает слабо или перестает выделяться, ухо можно слегка подавить или похлопать на противоположной стороне. Первые капли крови для гематологического исследования не используются и их удаляют ватным тампоном.

Взятие крови из крупных кровеносных сосудов у всех животных производится обычно инъекционной иглой. При взятии крови из сосуда последний сдавливают ниже места укола рукой или резиновым жгутом. Прокол окружающих тканей и кровеносного сосуда нужно стремиться сделать в один прием. Инструментарий, а также цилиндры для взятия крови должны быть простерили-зованы.

Кровь для бактериологических исследований насасывается стерильным шприцом и вводится в закрытый цилиндр через резиновую трубку или специальную иглу, которой прокалывается пергаментная бумага, закрывающая цилиндр. Это делается для предотвращения засорения крови микроорганизмами из воздуха, с шерсти и рук.

 

Рис.  Иглы для взятия крови.

Иглы для взятия крови

Для получения плазмы крови, необходимо в пробу крови добавить лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 0,002). После отстаивания или центрифугирования форменные элементы оседают на дно, а плазма отсасывается пипеткой. Получение сыворотки крови отличается в принципе только тем, что в кровь не добавляют цитрата. После некоторого стояния при комнатной температуре кровь свертывается и через некоторое время сыворотка отделяется от кровяного сгустка и отсасывается. Сыворотку можно получить также дефиб-ринируя кровь встряхиванием сосуда, в котором находятся стеклянные бусинки.

Взятие крови для клинических целей и при проведении экспериментальных работ необходимо проводить по возможности в одни часы и однообразной методикой. Если у животного кровь берется из уха многократно, то необходимо уши чередовать и стараться брать вначале у кончика уха, а затем все ближе к основанию. Это необходимо для устранения влияния местной реакции на показания крови.

Принудительной фиксации лучше избегать, если же в этом встречается необходимость, то при всех исследованиях нужно фиксировать животное одним и тем же методом, так как различные методы фиксации сказываются не только на количественных показателях, но даже и на формуле крови.

Прижизненное получение костного мозга. Прижизненное получение костного мозга производится с целью определения функциональной способности кроветворных органов. В настоящее время методика получения костного мозга разработана для всех животных. В основу положен принцип стернальной пункции по М. И. Аринкину (1927), разработанный им для получения костного мозга у человека. Для получения костного мозга у крупного рогатого скота и овец А. М. Колесов (1933) использовал троакар. После прокола грудины стилет извлекался и костный мозг получали через инъекционную иглу, вставляемую в гильзу троакара. А. В. Васильев (1939) костный мозг у лошади получал с помощью стернального прокола иглой Вира. А. И. Федотов (1941) для получения костного мозга у лошади использовал обычную инъекционную иглу, укрепленную другой иглой большего диаметра. С. А. Хрусталев (1939) и С. И. Ламкин (1940) разработали методику получения костного мозга у коз, С. И. Смирнов (1943)—у свиней, М. С. Шкаева (1943)—у кур и т. д. Все они использовали для получения костного мозга инъекционные иглы, внося в них те или иные конструктивные усовершенствования, придающие игле прочность и предотвращающие скольжение по ней пальцев во время прокола.

Стернальная пункция у крупных животных производится в стоячем положении, а у коз, овец и свиней в боковом или спинном положении. При проведении стернальной пункции требуется соответствующая фиксация животных. Пункция производится без анестезии. Шерсть в области грудины выстригается или выбривается безопасной бритвой. Грязная кожа вымывается водой с мылом, а чистая протирается спиртом, а затем смазывается йодной настойкой. Место пункции определяется по гребню грудины и ребрам. Прокол делается кпереди от мечевидного отростка и в сторону от гребня грудины. Первые 3—4 сегмента грудины от мечевидного отростка прокалываются иглой сравнительно легко. Передние сегменты иглой не прокалываются.

Прокол кожи, мышц и надкостницы вызывает незначительную болезненность и беспокойство животного. Костная пластинка грудины прокалывается с некоторым усилием, а затем, когда игла проникает в губчатую ткань, напряжение уменьшается, но ощущения полости нет. У мелких животных проникновение иглы в губчатую ткань ощущается совершенно ясно. Прокол грудины у молодняка производится очень легко, а у старых животных требует некоторого усилия.

Когда игла войдет в спонгиозную часть, мандрен из иглы вынимается и с помощью шприца производится насасывание костного мозга. По окончании получения костного мозга, игла вместе со шприцем извлекается и кожа дезинфицируется настойкой иода. Стернальная пункция должна проводиться строго асептично.

Большинство исследователей, дозировало костный мозг с помощью шприца. С. И. Смирнов предложил для дозирования специальную трубочку, с помощью которой костный мозг набирается в количестве 1 мм3. А. С. Калинин и М. И. Маточкин дозируют костный мозг иглой. В последнем случае костномозгового вещества получается меньше, чем у С. И. Смирнова, и мазки получаются более насыщенными клеточными элементами.

Костномозговой пунктат представляет собой густую, вязкую красную жидкость, в которой находится не чистый костный мозг, а его элементы, частично смешанные с форменными элементами циркулирующей крови. Чем меньшее количество получается пунктата, тем меньше бывает примеси циркулирующей крови, хотя прямая зависимость получается не во всех случаях. Все зависит от места, из которого получается пунктат.

Для предотвращения свертывания пунктата необходимо иглу и шприц предварительно овлажнить 2,1% раствора лимоннокислого натрия.

Первые 2—3 капли пунктата могут быть использованы для посева на питательные среды. Остальная часть идет для приготовления мазков и подсчета форменных элементов. Мазки из костномозгового пунктата фиксируются и окрашиваются так же, как и мазки циркулирующей крови.