Эфемерная лихорадка крупного рогатого скота
[Bovine ephemeral fever, Three day sickness, Stiff sickness (англ.); Fievre de trois joursdu boeuf (франц.), Dreitagekrankheit des Rindes (нем.)]
Эфемерная лихорадка - трехдневная лихорадка, болезнь неподвижности, эпизоотическая лихорадка КРС - острая, быстропротекаюшая, лихорадочная болезнь КРС.
Эфемерную лихорадку (ЭЛ) в течение многих лет диагностируют в Южной Африке и Австралии. Вспышки остропротекающей фибрильной болезни КРС, так называемой "инфлюэнцы скота", регистрировали в Японии с 1949 по 1951 гг. В Австралии первая большая эпизоотия болезни началась в 1936 г. и до 1971 г. повторялась там неоднократно. Болезнь распространялась, в основном, потоком ветра. Наиболее вероятным переносчиком ее считают москитов Culex annulirostris и Anopheles annulipes. Болезнь широко распространена на Африканском, Европейско-Азиатском и Австралийском континентах, регистрируют ее и в сопредельных бывшему СССР странах. В 1976 г. отмечали эпизоотию ЭЛ, охватившую поголовье КРС северо-западных провинций Индии, северо-восточных провинций Китая и южные районы Монголии. Спорадические случаи болезни КРС наблюдали в 1946 и 1952 гг., в южных приграничных районах Таджикистана и Узбекистана (поймы рек Амударьи, Пяндж и Вахш). При этом, на основании эпизоотологических данных и клинических наблюдений за животными, вначале поставили диагноз - грипп, а затем - трехдневная болезнь КРС. Однако окончательный диагноз на ЭЛ не был установлен. Распространение болезни в 1988 г. на фермы характеризовалось распределением Пуассона и соответствовало эпидемической кривой модели Рида Фроста с вероятностью соответствующего контакта в 0,0226. Если популяция КРС на ферме составляет менее 5 голов, вероятность первоочередной вспышки практически равна нулю.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь характеризуется внезапным повышением температуры тела до 41-42 "С. Через 1-2 дня она понижается до нормальной. В это время отмечается быстропроходящий лейкоцитоз и лейкопения, учащенное дыхание, что сопровождается появлением эмфиземы. Иногда вследствие удушья наступает смерть. У некоторых больных животных развивается подкожная эмфизема в задней части шеи, в передней части грудной клетки или в области лопатки. У отдельных животных отмечают насморк, слезо - и слюнотечение, одышку, болезненность в суставах, мышечный тремор и параличи конечностей. Наблюдается сухость передней части морды, общее недомогание, анорексия, прекращение жвачки, снижение (иногда полное прекращение) удоя, хромота, неспособность стоять из-за артрагии. При снижении температуры до нормальной эти симптомы исчезают. При гематологическом исследовании характерно наличие своеобразной формы ядер у лейкоцитов.
Патологоанатомические изменения чаще локализуются в легких; там находят кровоизлияния в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, носовой полости, глотке, гортани, трахеи. В редких случаях легкие становятся похожими на большие воздушные шары, эмфизема распространяется на диафрагму, на внутримышечные и подкожные участки шеи и брюшной полости. В паренхеме легких нечетко выражены участки гепатизации. Типичными патологоанатомическими изменениями является серофибриоз, множественный артикулопериостит, периартрит, лимфаденит. У многоплодных коров, отелившихся нормально, изменялись показатели картины крови, макро - и микроминеральные изменения, а резкое снижение уровня Са в плазме крови часто сопровождалось внезапным параличом и другими признаками, характерными для острой формы ЭЛ.
Морфология и химический состав. Вирус открыт впервые японскими исследователями Цубаки и др. в 1951 г. Вирионы пулевидной формы, размер 140-70 нм, имеют полый осевой канал и сходны с вирусами везикулярного стоматита, фландерс, бешенства и Керн Каньон, относящихся к семейству рабдовирусов. В отличие от них вирус ЭЛ не имеет поперечной полосатости. Длина вириона 176 нм, диаметр у основания 88 нм. Вирионы южноазиатского штамма вируса конусовидной формы, австралийского и японского штаммов - пулевидной. На всех этапах развития вирионы имеют усеченные Т-частицы. Несмотря на определенное сходство вируса ЭЛ с другими рабдовирусами, он отличается от них тем, что внутренняя структура вирусной частицы представляет 6-гранную белковую массу, а нуклеиновая кислота 2-нитевая. Плавучая плотность 1,196 г/см3, вирионы устойчивы к РНК-зе. При ультрацентрифугировании в течение 2 ч при 4 град.С большая часть вируса осаждается при 73000 g.
Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату и трипсину. Частично инактивируется при рН 7,4 или 8,0, инактивация наступает при рН 6,1 (60 мин) и рН 9,1 (90 мин), полностью инактивируется при рН 3. Нагревание при 56 град.С в течение 20 мин ведет к полной инактивации. В условиях 34 и 37 град.С происходит постепенное снижение инфекционности, а при 30 град.С она не снижается в течение 24 ч. При дальнейшем нагревании в тех же условиях инфекционность вируса понижается приблизительно на 10 град..7 ТЦД50 B сутки. Вируссодержащая кровь при +2 -2 град.С не снижает инфекционности 48 ч. Лиофилизированная вируссодержащая кровь при -40 град.С остается патогенной даже после 958 дней хранения. Вируссодержащая культуральная жидкость (при выращивании в культуре ВНК-21) в условиях -80 град.С сохраняла патогенность через 278 дней, а при -20 град.С уже на 73-й день наблюдалось значительное снижение титра инфекционности. При 4 град.С вируссодержащий материал можно сохранять не более 40 дней. Многократное замораживание и оттаивание не влияют на инфекционный титр вируссодержащего материала.
Антигенная структура. АГ структура не изучена, обнаружен лишь растворимый КС АГ. У крыс, зараженных в мозг, появляются ВНА. У зараженных кроликов, свиней и овец AT не обнаружены. КС АГ в более высоком титре накапливается в культуре клеток ВНК-21 к 5-му дню культивирования при 30 "С, далее титр его постепенно снижается.
ВНА у КРС появляются на 2-й, а КСА - на 3-й неделе после заражения. ВНА у животных-реконвалесцентов достигают своего пика через 2 месяца после заражения и сохраняются более 400 дней. Затем титр их резко снижается. Между наличием AT и восприимчивостью к инфекции имеется прямая связь. Материнские AT у телят обнаруживаются до 6-7-месячного возраста. Стандартным штаммом вируса ЭЛ является ВВ7721. Большинство исследователей считает, что этот вирус в АГ-отношении идентичен. Однако в литературе появились данные, указывающие на то, что в Австралии существует несколько серотипов вируса.
Гемагглютинирующие свойства не изучены. Локализация вируса, вирусоноситель-ство и вирусовыделение не изучены. Известно лишь, что самая высокая инфекцион-ность эритроцитов у больного животного совпадает с периодом виремии.
Экспериментальная инфекция. Вирус размножается в мозге мышей, хомячков и крысят-сосунов. Экспериментально болезнь можно воспроизвести у телят при внутривенном заражении кровью естественно больных животных. У молодняка КРС (1,5-2-летнего возраста) заболевание наблюдали на 4-й день; температурная реакция регистрировалась на протяжении 3 дней. Мышат-сосунов заражают интрацеребраль-но фракцией лейкоцитов крови больных животных. У зараженных мышат через 1-3 дня наблюдали недомогание, а на 10-й день и позже появлялись симптомы паралича задних конечностей. Исход летальный. Интрацеребральное заражение мышат-сосунов в 3-дневном возрасте и старше не вызывало их гибели. Мыши не являются адекватной моделью для изучения ЭЛ.
Вирус можно выделять на хомячках и однодневных крысятах-сосунах. После 3-х последовательных пассажей на мышатах-сосунах вирус удается адаптировать к мозгу крысят-сосунов и к культурам клеток. Однако он обычно утрачивает патоген-ность и АГ-активность в отношении КРС. Вирус ЭЛ шт. Юмагучи оказался более вирулентным для суточных мышей, тогда как шт. Ml976 КРС5 проявил низкую патоген-ность для этих животных. Односуточные морские свинки, взрослые нелинейные белые мыши, хомячки и крысы оказались нечувствительными к интрацеребральному заражению вирусом ЭЛ шт. Ml976 КРС5 и Юмагучи.
Культивирование. Кроме мозга мышат, крысят и хомячков-сосунов, вирус культивируется в клетках ВНК-21, Т, перевиваемой линии опухолевых клеток хомячка, индуцированных саркомой Рауса (шт. Шмидт-Руппин), в первичной культуре клеток почки хомячка, в перевиваемой линии клеток ВЕК-1, полученных из почки эмбриона КРС и прошедших в течение четырех лет 103 пассажа. В первичных культурах клеток эмбриона хомячка, почек и эмбриона крысы, почек и семенников телят вирус размножается, не вызывая ЦПИ. Вирус не размножается и не вызывает ЦПИ В культурах клеток почки и эмбриона мышей, почки морской свинки, цыплят, лейкоцитов, костного мозга, щитовидной, вилочковой железы и надпочечника телят. Различные штаммы после серийного пассирования в мозге мышат-сосунов или в клетках ВНК-21 сравнительно быстро теряют патогенность для КРС. Для выделения вируса используют культуру клеток Vero, где титр вируса достигает 10-3-4 ТЦД5о/мл.
Изучены оптимальные условия бляшкообразования в культуре этих клеток. Отмечен феномен аутоинтерференции, связанный с присутствием дефектных интерферирующих частиц в культуре клеток. Для культивирования вируса оптимальная температура 30-34 град.С. Повышению титра инфекционности вируса способствует добавление в инфицированную культуру клеток кортизона. Вирус размножался в организме москитов Culex annulirostris при внутригрудной инъекции. Развитие вируса связано с клеточными мембранами. Характер размножения его в клетках ВНК-21 сходен с размножением вирусов везикулярного стоматита, Фландерс, Керн Каньон.
Источники и пути передачи инфекции. ЭЛ - трансмиссивная болезнь. Переносчиками вируса служат москиты Culex annulirostris и, вероятно, также Anopheles annulipes. Болезнь проявляется в теплое влажное время года, в период биологической активности кровососущих насекомых и протекает в виде энзоотии и эпизоотии. Инфекция наносит значительный экономический ущерб из-за больших потерь массы, молочной продуктивности, абортов, временного бесплодия и гибели тяжелобольных животных.
Вирус монопатогенен, в естественных условиях поражается только КРС. Овцы, козы, свиньи и лошади невосприимчивы.
Иммунитет и специфическая профилактика. Иммунитет не изучен. В Японии удовлетворительные результаты получены при применении аттенуированной вакцины. Оптимальный интервал между введениями составлял 1-5 недель. Из вируссодержа-щей крови, обработанной кристаллвиолетом, удалось получить инактивированную вакцину, которую вводят двухкратно подкожно по 10 мл с интервалом 3-7 дней. В крови привитых животных образуются ВНА, Выявляемые более 2 лет. Кроме того, предложена ГОА-формолвакцина с использованием вируса, репродуцированного в культуре HmLu-1. При 4 град.С вакцина сохраняет активность в течение 9 месяцев. Она безвредна для стельных коров. Рекомендуется двукратная иммунизация с последующей ревакцинацией через год поздней осенью или ранней весной. Для получения гипериммунной сыворотки КРС иммунизируют вируссодержашей дефибринирован-ной кровью, суспензией селезенки и лимфоузлов, взятых во время лихорадки. Гипериммунная сыворотка в дозе 250 мл предохраняет животное от прямого заражения. Перспективна и живая вакцина, но это связано с большими трудностями, так как в гетерогенной биологической системе вирус быстро теряет свою патогенность и иммунизирующие свойства.
Серийное пассирование вируса ЭЛ в линии клеток HmLu-1 ведет к быстрой аттенуации его в отношении КРС. Аттенуированный вирус не вызывает у животных образования ВНА. Однако максимальное накопление их и устойчивость к заражению у КРС происходит после подкожного введения аттенуированного вируса (около 105 ТЦД 5о/мл) и затем через 2-4 недели после внутримышечной инъекции фор-молвакцины. Иммунизация КРС по такой схеме безвредна даже для стельных коров.
В 1982-1984 гг. в Клинсвенде проведена оценка иммунных реакций 24 стад КРС после различных схем вакцинации против ЭЛ. Использовали вакцину, приготовленную на основе шт. 919, аттенуированного на телятах и клетках Vero, в сочетании с адъювантом QuilA и гелем ГОА. Две последовательных инокуляции вакцины, смешанной непосредственно перед введением с адъювантом QuilA, индуцировали самый высокий титр ВНА и обеспечивали высокую защиту от естественного контрольного заражения вирулентным вирусом, по крайней мере, в течение 12 месяцев. В то же время, после однократного введения вакцины с этим адъювантом и двухкратного введения титр AT был значительный, но не обеспечивал напряженной защиты от вирулентного вируса. Отмечена четкая взаимосвязь титра ВНА и уровня иммунозащиты. При перемежающемся пассировании культуры клеток ВНК-21 получен аттенуированный вариант вируса ЭЛ, который утратил вирулентность для КРС, но сохранил иммуногенные свойства. Минимальная иммунизирующая доза равна 100 ТЦД50, а прививочная - 10000 ТЦД 5о. После однократной подкожной вакцинации иммунитету КРС наступает через 21 день и длится не менее 6 месяцев.
