Герпесвирусная инфекция крупного рогатого скота
[Bovine herpesvirus infections]
Помимо вирусов инфекционного ринотрахеита, маммиллита и злокачественной катаральной лихорадки КРС из трахеи, заглоточных лимфоузлов и других органов животных этого вида удавалось выделить герпесвирусы КРС, не имеющие четкого таксономического положения. Идентичные герпесподобные вирусы были выделены от коров, больных лимфосаркомой, однако этиологическая роль их в появлении лим-фосарком и герпетического маммиллита не выяснена. В 1969 г. Боулинг, Гудхерд и Пламмер выделили шесть герпесподобных вирусов из ротовой полости и гениталий КРС, идентичных между собой в АГ отношении. Предполагают, что генитальный вирус герпеса вызывает рак шейки матки у коров. В 1971 г. Лутер и другие выделили из спонтанно дегенерировавшей почки клинически здорового теленка вирус, характерный для группы герпетических вирусов. Бычьи вирусы герпеса (BHV-1) иммунологи-чески отличны от герпесвируса коз, который является новым членом рода герпесвирусов.
Болезни КРС, вызываемые малоизученными герпесвирусами, проявляются довольно разнообразно, однако чаще характеризуются поражением органов дыхания.
По физико-химическим свойствам и ультраструктуре "латентные" герпесвирусы не отличаются от вируса ИРТ. Разница в ультраструктуре этих вирусов и вируса ИРТ состоит в том, что у первых встречается мало частиц с суперкапсидными оболочками (около 9 на 100), а у вируса ИРТ Это соотношение составляет 1:1. Нет особых различий и в локализации вирусного АГ в зараженных культурах клеток, хотя в динамике его образования различия заметны. Среди вирусов герпеса КРС обнаружены вирусные частицы четырех типов: полные и пустые оболочечные, полные и пустые безобо-лочечные.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям различных вирусов герпеса КРС не изучена. Все они чувствительны к нагреванию, хлороформу, эфиру, трипсину, дезоксихолату натрия и к кислой среде (рН 3).
Секвенирован ген гликопротеина gH (I) бычьего герпесвируса типа 5 (БГВ-5). Ген гликопротеина gH БГВ-5 на 84 % идентичен 1таковому БГВ-1. мРНК гена гликопротеина gH длиной 3,1 т. н. обнаружена через 2 ч после заражения БГВ-5. 12 из 21 МКА к гликопротеину gH БГВ-1 иммунопреципитируют гликопротеин gH БГВ-5 с мол. м. 108-110 кД. Синтез и внутриклеточный лроцессинг гена гликопротеина gH БГВ-5 изучены в клетках MDCK с использованием перекрестно реагирующих МКА экс-прессируется как белок класса Зу и обнаруживается через 3 ч после заражения. Показано, что ген гликопротеина gH содержит N-связанные углеводы, которые существенны для узнавания МКА Это позволило предположить, что N-связанные гликаны участвуют в сворачивании гена гликопротеина gH или являются мишенями для МКА. Изучение нейтрализации показало, что по меньшей мере один антигенный домен гена гликопротеина gH БГВ-1 отсутствует у гена гликопротеина gH БГВ-5.
АГ структура не изучена. В организме КРС, кроликов и морских свинок вирус герпеса КРС образует ВНА. Однако имеется сообщение, что телята, зараженные экспериментально, не дают положительных серологических реакций. Попытки получить антисыворотки к lht. DN-599 на кроликах, цыплятах и крысах оказались безуспешными даже при использовании концентрированного вируса с адъювантом.
В АГ отношении вирусы герпеса КРС (что установлено в перекрестной РН) идентичны, но не родственны вирусам герпеса простого, ринотрахеита, маммиллита - Allerton, болезни Ауески, шт. Мовар 33/63, ЗКЛ, герпеса собак, лошадей и птиц. В перекрестной РН установлено родство шт. СТ-66 с вирусами бычьего герпеса Мовар 33/63, Оксфорд, ТК, ТНЛ и Ну/67, однако все они не имели родства с вирусом ИРТ. Два штамма-изолята ГВ КРС, выделенные в 1972 г. Смитом и др., а также lut. DN 599, FTC и SS, АГ родственные между собой в серологических реакциях, отличались от вируса ИРТ. Штамм, выделенный Луге ром и др. (1971 г.), родственен шт. Reims (возбудителю ЗКЛ КРС).
Несмотря на то, что штаммы ГВ КРС могут различаться по тропизму (оральные, респираторные, генитальные), они идентичны в АГ отношении, по плотности ДНК И характеру ЦПД. Поэтому их нельзя разделить на типы 1 и 2, что принято для вирусов герпеса человека. Высказано предположение о родстве вируса герпеса коров к вирусу герпеса типа Allerton - возбудителю кожной бугорчатки КРС в Африке. В других сообщениях это отрицается.
ГА активностью вирусы герпеса КРС не обладают. У больных животных вирус выделяется с истечениями из носа в течение 10 дней, в смывах из глаз - 3 дней, из легких, бронхов и трахеи - в различные сроки. ГВ КРС (шт. СТ-66) реизолируют из суспензии лейкоцитов крови, носоглоточной слизи, бронхиальных и средостенных лимфоузлов.
Заболевание воспроизводится у однодневных хомячков, крыс и мышей, у которых в течение 10 дней после внутрибрюшинного заражения развивается кахексия, появляются кожные поражения, и животные гибнут. Все другие штаммы вируса герпеса КРС патогенны для новорожденных крыс. При экспериментальном заражении телят шт. СТ-66 в нос, трахею и внутривенно наблюдают повышение температуры тела, выделения из носа, кашель, одышку. Клинические признаки болезни появляются на 5-й дн после заражения и остаются заметными в течение 10 дней. Данный штамм патогенен для телят при внутрикожном заражении в область морды. Большие заражающие дозы вызывают генерализированные поражения кожи. При заражении в слизистую оболочку рта образуются язвы, а в язык - эритема.
Два штамма герпеса КРС, выделенные в 1972 г. Смитом и другими, при введении телятам вызывали острый некротизирующий лимфоцитарный фарингит и трахеит. У телят, зараженных интраназально или в трахею герпесвирусом КРС (штамм ДН-599, выделенный Махонти и др., 1972 г.), появлялись признаки поражения респираторного тракта, у 50 % больных животных отмечался конъюнктивит, 43 % телят тяжело болели и погибли. Шт. Лутера оказался апатогенным. Бычий вирус герпеса типа 5 (БВГ-5) обладает нейровирулентностью, а БВГ-1 - не обладает ею. Отвечающий за нейровирулентность гликопротеин Е (гЕ) идентичен в двух вирусах на 72 %. Сконструировали рекомбинанты двух вирусов, содержащие или не содержащие гЕ. Вводили кроликам интраназально БВГ-5, лишенный гЕ, либо БВГ-5 с гЕ БВГ-1. Неврологические нарушения выявили только у 10 % кроликов. БВГ-1 с гЕ типа 5 не проникал в ЦНС. Природный БВГ-5 или ревертант вызывали тяжелые неврологические поражения в 70 % случаев. Заключают, что гЕ определяет нейровирулентность БВГ-5, но не влияет на его проникновение в обонятельные пути.
Многие выделенные от КРС штаммы бычьего герпеса размножаются в культуре клеток тестикул и почек телят, овец, кроликов, щитовидной железы телят. В пораженных клетках формируются ДНК-содержащие включения. В культуре клеток эмбрионов коров они вызывают характерные однотипные ЦПИ и многочисленные внутриядерные включения типа А Коудри. Через 3 дня после заражения в инфицированном монослое обычно обнаруживают округлые бляшки с неровными краями диаметром 1-3 мм. В 1969 г. герпесподобные вирусы выделены от коров, больных лимфосарко-мой. В культуре клеток селезенки эмбриона коров они индуцировали образование синцития. Линия клеток RD-4 рабдомиосаркомы человека, зараженная бычьим герпесвирусом типа 4 (БГВ-4), продуцирует в небольшом количествеве ранние и поздние вирусные РНК и инфекционный вирус, но не проявляет цитопатический эффект. С использованием рекомбинантного БГВ-4, несущего ген устойчивости к неомицину (1), получены варианты линии клеток RD-4, персистентно инфицированные БГВ-4. В этих клетках геном БГВ-4 находится преимущественно в кольцевой форме, и все клетки окрашиваются специфической антисывороткой к БГВ-4. Следовательно, эти линии клеток не являются культурами-носителями. На всех изученных пассажах эти клетки продуцируют инфекционный БГВ-4. Хотя клетки поддерживаются при концентрации неомицина в 2,5 раза большей, чем та, которая убивает незараженные клетки RD-4. Персистентно инфицированные клетки содержат один геном БГВ-4 на диплоидный клеточный геном и растут медленнее, чем незараженные клетки, даже в отсутствие неомицина. Медленный рост этих клеток позволил предположить, что любое ростовое преимущество, которое придается множественными копиями БГВ-4 с геном устойчивости к неомицину, преодолевается вредными эффектами экспрессии вирусных генов. Поэтому БГВ-4 отличается от других гаммагерпесвирусов, способных трансформировать клетки к усиленному росту.
Клетки MDBK, экспрессирующие гликопротеин gD (I) бычьего герпесвируса типа 1 (БГВ-1), устойчивы к заражению БГВ-1, вирусом псевдобешенства и вирусом простого герпеса типа 1 (ВПГ-1), но не БГВ-5. Клетки MDBK, экспрессирующие укороченный gD, секретируют растворимый gD и полностью чувствительны к заражению всеми четырьмя вирусами, если клетки подвергаются промывке до заражения. При обработке клеток MDBK или MDBKlgD до заражения средой, содержащей укороченный gD, они приобретают частичную устойчивость к БГВ-1, ВПБ и ВПГ-1, но не к БГВ-2. БГВ-1 и БГВ-5 образуют бляшки нормального размера на клетках MDBKlgD, т. е. способны к межклеточному распространению. Таким образом, присутствие gD на поверхности клеток в момент заражения требуется для блокирования заражения БГВ-1, ВПБ и ВПГ-1, т. е. gD этих вирусов взаимодействуют с общим ко-рецептором.
Помимо прямого контакта больных и здоровых животных в передаче инфекции принимают участие мухи.
Штаммы герпесподобных вирусов, выделенные в 1969 г. от коров, больных лимфосаркомой, непатогенны для морских свинок, кроликов, мышей, хомячков и телят. Патогенность шт. СТ-66 изучена на телятах. Вирулентный шт. Neethling, выращенный в культуре клеток почек ягнят и телят, патогенен для жирафов и антилоп и непатогенен для буйволов и черных антилоп гну. Вспышку болезни со значительным летальным исходом среди буйволов наблюдали в декабре 1969 г. в Национальном парке Танзании и в прилегающих районах Кении. От заболевших животных при заражении культуры клеток почки и тестикул теленка выделили шт. ВА вируса типа Allerton. При исследовании 17 видов диких животных в Танзании, Кении, Уганде обнаружили AT у всех буйволов старше 2 лет, у многих жирафов, гиппопотамов, сернобыков, у нескольких антилоп канна, чернопятнистых и лесных гну. В некоторых районах этих стран инфицированность домашнего КРС старше 2 лет достигала 85-95 %; титры AT были ниже, чем у буйволов. Клинически болезнь у домашних животных не проявлялась. У овец и коз AT встречаются редко. Очевидно, вирус Allerton широко распространен среди буйволов, но инфекция протекает легко. Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана.
