[Influenza suis (лат.), Swine Influenza, swine flu, hog flu, pig flu (англ.); Schwieneinfluenza, Shope's Schwiene grippe (нем.)]
Гриппл свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая бронхопневмония) — высоко контагиозная, остро протекающая болезнь, возникающая в холодное время года и характеризующаяся внезапным началом, резко выраженной лихорадкой, обшей слабостью и поражением органов дыхания. Вирус гриппа свиней (ВГС) может вызвать заболевание людей и, наоборот, возможно заражение свиней вирусом гриппа человека.
Болезнь впервые диагностирована в США в 1918 г. вовремя пандемии гриппа людей.
Вирус впервые выделили и идентифицировали Шоуп и Левине в 1931 г. Он был обозначен как А/Айова/15/31. Аналогичные штаммы ВГС были выделены в ряде государств Европы и США. К 1980 г. среди всех вирусов гриппа А было идентифицировано 13 типов ГА и 9 типов нейраминидаз. Большинство случаев гриппа свиней обусловлены вирусом H1N1; вирус гриппа H3N2 как этиологический агент встречается значительно реже.
Встречается во многих странах Европы и Америки, зарегистрирована и в бывшем СССР. В отдельных хозяйствах причиняет большой экономический ущерб. Описана вспышка гриппа среди 115 свиноматок, вызванная «новым типом» вируса гриппа H3N2, который появился в Дании в 1990 г. Степень опоросов сократилась с 90 до 43 % — через 14 дней после появления заболевания. Снизилось количество новорожденных поросят.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный период длится от 1 до 6—7 дней. Болезнь протекает остро, подостро, типично и атипично. Наиболее восприимчивы поросята-отъемыши. Ведущим патоморфологическим синдромом инфекции является развитие множественных очагов некроза бронхиального эпителия. Начинается болезнь с повышения температуры тела до 41—42 "С, сопровождается вялостью, отказом от корма, конъюнктивитом, слизистым истечением из носовой полости, чиханием и кашлем. В области пятачка образуются струпьевидные корки. Дыхание становится сопящим вследствие набухания слизистой оболочки носа и сужения воздухопроводящих путей. Больные животные чаще лежат, зарывшись в подстилку, не реагируют на окружающее, во время подъема у них возникает болезненный кашель.
При типичном течении болезни развивается воспаление легких — затрудненное дыхание брюшного типа. Из-за ослабления сердечной деятельности кожа в области живота приобретает синюшный оттенок. Иногда поражаются мышцы и суставы. При хороших условиях содержания свиней болезнь продолжается 7—10 дней. При типичном течении летальность не превышает 1— 4 %. Порося та-сосуны и отъемыши переболевают гриппом тяжело. У них наблюдается поражение легких, плевриты, перикардиты, истощение. На вскрытии находят изменения в верхних дыхательных путях и легких; на слизистой оболочке носовой полости — пенистая слизь красноватого цвета; в просвете бронхов — слизистые пробки; в легких — пневмонические очаги катарального характера, увеличение, гиперемия и отечность бронхеальных и средостенных лимфоузлов. Иногда развиваются односторонние или двусторонние плевриты. В качестве атипичной формы гриппа свиней описана пролифирирующая некротическая пневмония, которая наряду с РРСС представляет новую угрозу свиноводству.
Brown и другие описали легочную гипоплазию эмбрионов свиней, зараженных ВГС H1N1 на 55-й день супоросности. В течение 3-7 дней наблюдались некрозы в бронхиолах и слабая дифференцировка главных бронхов. Через 28 дней после инокуляции легкие составляли не более половины нормальной величины. Патогистоло-гически наблюдается распространенная дегенерация и некрозы эпителия бронхов и бронхиол. Просвет бронхов, бронхиол и альвеол заполнен экссудатом, содержащим десквамированные клетки и нейтрофилы, позднее, главным образом, моноциты. Наблюдается различной степени гиперемия с инфильтрацией альвеолярной ткани лимфоцитами, гистиоцитами, плазматическими клетками. Ателектаз альвеол, интерстициальная пневмония, эмфизема; периваскулярная и перибронхиальная клеточная инфильтрация сопровождает эти поражения.
Возбудитель гриппа свиней сравнительно малоустойчив к факторам физического и химического воздействия. Нагревание до 60 °С в течение 20 мин его полностью инактивирует. При -20—70 °С он сохраняется несколько месяцев, в лиофилизированном виде под вакуумом — в течение 3,5 — 4 лет. Оптимальный рН для хранения вируса 7,0—7,2. Антигенная структура типична для миксовирусов.
Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ родство между вирусами А(свинья)Айова/15/31 и вирусом ГП А/цыпленок/Шотландия/59. Считают, что свиньи могут являться резервуаром для человеческих пандемических штаммов. Во время вспышек гриппа свиней в Европе зимой 1990—1991 гг., кроме классического серотипа HI N1, был выделен серотип H3N2. Клонированы гены ГА вируса гриппа А свиней (H1N1), изолированные в плазмидных векторах, определен их нуклеотидный состав. Сконструировано филогенетическое дерево генов свиных и человеческих вирусов гриппа А. Установлено, что дивергенция между свиными и человеческими вирусами гриппа произошла в период 1905 г. Определены нуклеотидные последовательности кодирующей НА1 части гена ГА трех вирусов гриппа свиней. Гены ГА двух европейских штаммов ВГС (SW38, SW39) (А/свинья/29/37) и N176 (A/New-Jersey/I 1/76) произошли скорее от какого-то другого эволюционного предка HI нежели от ГА классического штамма ВГС. С помощью набора монАТ к АГ вируса гриппа, выделенным от птиц и лошадей, показан широкий спектр родства между ВГС и этих животных.
В 1997 и 1998 гг. генетически различные вирусы гриппа H3N2 свиней были выделены в Северной Америке. Большинство изолятов содержали гены гемагглютинина, нейраминидазы и белка РВ1, сходные с генами вирусов гриппа человека, гены белков NP, М и HS, сходные с генами вирусов гриппа свиней, а гены белков РА и РВ — с вирусом гриппа птиц. Вирус гриппа H3N2, полностью сходный с вирусом гриппа человека, был выделен от поросенка в Канаде, но не распространялся в популяции свиней. При интраназальном заражении поросят «человеческий» вирус плохо размножался в организме поросят в отличие от реассортных изолятов свиных вирусов гриппа, которые вызывали также серьезные патологические и гистологические изменения в легких.
Из анализа случаев одновременного распространения гриппа среди свиней и людей, вызванных одними и теми же этиологическими агентами, считают, что назрела необходимость систематической вакцинации свиней против гриппа, чтобы исключить этот резервуар вируса в природе. Недавно сравнение ВГС H1N1 показало, что ГА ВГС H1N1 не изменялся интенсивно по крайней мере последние 50 лет в противоположность активному АГ дрейфу штаммов ВГ человека. Это, по-видимому, связано с менее выраженным иммунным прессингом на свиньях, как коротко живущих, и их вирус быстро передается на чувствительных животных. Изучено 24 изолята вируса гриппа A/H1N2, выделенных от свиней в 1999—2000 гг. в США. Все изоляты были ре-ассортантами и содержали гены классического вируса гриппа свиней A/H1N2 и гены вируса гриппа человека, а также вируса гриппа птиц. 15 изолятов были филогенетически сходны с первыми изолятами A/H1N2, 9 — с геном, кодирующим нейраминидазу вируса гриппа свиней HIM, PB1 ген двух изолятов происходил от вируса гриппа птиц.
В период острого течения болезни вирус в высоких концентрациях содержится в экссудате трахеи, слизи носовой полости, бронхах и легочной ткани. Свиноматки-реконвалесценты являются вирусоносителями и служат резервуаром инфекции. ВГС независимо от типа способен эффективно преодолевать плацентарный барьер, заражать и приводить к гибели зараженные эмбрионы.
У животных-реконвалесцентов формируются AT, выявляемые в РН, РЗГА и РСК. Специфические сыворотки в условиях лаборатории получают на кроликах, морских свинках и белых крысах. Не всегда отмечают корреляцию между уровнем AT и тяжестью проявления болезни.
Экспериментальная инфекция. Из лабораторных животных к ВГС чувствительны белые мыши, крысы, хорьки и хомяки. Уже через 24—48 ч после интраназального заражения у мышей проявляются симптомы болезни. Обычно они гибнут через 3—8 суток после заражения. Смертность зависит от вирулентности штамма, которая по мере серийного пассирования вируса возрастает для мышей и снижается для свиней. В легких павших мышей видны темно-красные участки, влажные на поверхности разреза, гепатизация. Мыши не чувствительны к подкожному, интраперитонеальному и внутримозговому заражению. Исключение составляют хорьки, у них легко возникает контактное заражение. Установлена высокая восприимчивость к ВГС серых крыс (пасюков), которые рассматриваются как резервуар вируса в природе. Кролики и щенки к данному вирусу не восприимчивы. Свиньи восприимчивы к различным подтипам вируса гриппа А и, возможно, вместе с водоплавающей птицей являются главным резервуаром вируса гриппа в природе. Помимо мелких лабораторных животных, экспериментальная инфекция легко воспроизводится на поросятах, заражаемых интраназально. Через 6 ч после заражения вирус обнаруживали в трахее и разных частях легких; максимальное содержание его выявлялось уже через сутки и удерживалось на одном уровне до 5-го дня после заражения. Через 6 ч титр вируса составлял 103 ИД50 в 1 г ткани.
С 9-го дня после экспериментального заражения активная репродукция вируса прекращается. Скрытое вирусоносительство может продолжаться до трех месяцев. Вирус гриппа человека H3N2 легко передается свиньям, а вирус гриппа H1N1 представляет большую опасность для человека. Подтверждена также возможность передачи ВГС телятам.
Культивирование. Вирус репродуцируется в КЭ, не вызывая их гибели, мышах, хорьках и культуре клеток. Адаптированные к КЭ штаммы вызывают появление на ХАО беловатых точечных фокусов. При заражении КЭ в аллантоисную полость на теле зародышей появляются геморрагии. Для культивирования используют 10—11-дней КЭ. Максимальное накопление вируса происходит в течение 48—72 ч, титр его в аллантоисной или амниотической жидкости обычно достигает 107—10s ЭИД50 /мл. Присутствие вируса в экстраэмбриональных жидкостях устанавливают с помощью РГА. ВГС можно адаптировать к организму белых мышей или хорьков и непрерывно вести интраназальные пассажи. Возможна репродукция вируса в культуре клеток почки теленка, обезьяны, хомяка, мыши, поросенка и легких эмбриона свиньи. Вирус приобретает цитопатогенные и ГА-свойства и накапливается в высоких титрах 105—10& ЭИД50/МЛ и 10б ТЦД50/МЛ. При одновременном инфицировании культуры фибробластов КЭ вирусами чумы птиц FPVh гриппа свиней SW размножается только FPV, так как размножение SW ингибируется, причем интерференция происходит не на стадии адсорбции, а на более поздней стадии вирусной репликации. В естественной популяции ВГС A/N1/11/ 76 обнаружены варианты Z и Н, имеющие мутации ГА и различающиеся по степени репродукции в КЭ, организме свиней и клетках МДСК.
ВГС агглютинирует эритроциты кур морской свинки, человека (0-группы), утки, галки, хорька, крысы, собаки, ежа, но в более низких разведениях, чем вирус гриппа человека типов А и В. При выращивании в КЭ при 35—37 °С вирус имел титр ГА 1:10-1:80, однако после серийных пассажей при 38 "С титр ГА возрос до 1:2048. Отмечена корреляция титра ГА и инфекционности вируса для КЭ.
ГАд свойства воспроизводятся общепринятым методом в культуре фибробластов КЭ с эритроцитами курицы, морской свинки или 0-группы человека.
Источники и пути передачи инфекции. Грипп свиней подобно гриппу человека — воздушно-капельная инфекция. ВГС могут долгое время существовать в организме свиней, возможно, в географически ограниченных районах. Отличные друг от друга штаммы ВГС циркулировали в Южном и Центральном Квебеке (Канада), по крайней мере, до 1993 г. В природе вирус поддерживается необычным биологическим механизмом, например легочными гельминтами свиней (Metagastrongilus elangatus, Chaerostrongilus puderdorectus), инфицированные яйца которых попадают во внешнюю среду и захватываются дождевыми червями. При поедании последних свиньями создаются условия для возникновения энзоотии. В дождевых червях вирус может сохранятся до 19 месяцев. Однако появились данные о наличии хронической или латентной инфекции у отдельных животных, свободных от легочных гельминтов. Так, в частности, появились данные о трансплацентарной передаче ВГС. Он участвует в пролиферативной и некротической пневмонии свиней.
Впервые межвидовую передачу между вирусами гриппа человека и животных описал ветеринарный врач Косен в 1919 г. Основываясь на изучении изолятов ВГС с 1980 г. сделан вывод о том, что последние вспышки гриппа свиней обусловлены вирусом H1N1, тесно связанным с птичьим вирусом гриппа H1N1. Это показывает, что птичьи штаммы вируса гриппа способны инфицировать и вызывать заболевание у свиней. Штаммы ВГС Н1N1 обусловили 84 вспышки заболевания у индюков с сильными респираторными поражениями и снижением яичной продуктивности. Циркуляция вирусов H1N1 имеет место среди следующих видов: утки, индюки, человек. Свиньи могут заражаться от птиц и людей, что позволяет говорить о свином вирусе «как о сосуде смеси» вирусов птичьего и человеческого происхождения. В последнее время, однако, многократно выделялся H2N2 от больных свиней в европейских странах; в США это редчайшее явление.
Иммунитет и специфическая профилактика. Продолжительность иммунитета у свиней-реконвалесцентов не изучена. Анти-ГА и ВНА в крови выявляются до 8—10 месяцев. Для профилактики ГС в ряде стран используются инактивированные вакцины, обеспечивающие достаточно напряженный иммунитет. Свиньи, привитые дважды вакциной Suvaxyn Flu-3, приобретают полную устойчивость к экспериментальному заражению. В организме вакцинированных свиней гомологичный вирус не размножался. В случае возникновения заболевания проводят поголовную вакцинацию свиней. Разработка и испытание инактивированных вакцин для профилактики ГС продолжаются. Живой, температурочувствительный штамм ВГС обеспечивал некоторую защиту свиней.
Gourean и другие описали инактивированную адъювант-вакцину против ГС (H1N1), которая превосходит жидкую инактивированную вакцину. AT не ее введение выявлялись через 15 дней и сохранялись до 2 месяцев после вакцинации. При 2-й инокуляции (бустериммунизации) AT сохранялись до 8 месяцев. При инфекции свиней свиным вирусом гриппа H1N1, а затем H3N2 у свиней не наблюдалось повышение температуры тела и вирус выделялся в меньших титрах, чем при заражении только вирусом H3N2. Наблюдалось повышение IgG антител в сыворотке к домену экстраклеточного вирусного белка М2, но не NP, что свидетельствует о роли первого белка в иммунитете более широкого спектра. Наблюдалось также увеличение СД8+Т клеток в легких и лимфопролиферативный ответ в крови, что также свидетельствует о роли СД8+Т клеток в гетеротипичном иммунитете.
Вакцина против гриппа свиней представляет собой аттенуированный рекомбинантный вирус осповакцины, в геном которого встроены гены, кодирующие гемагглютинин и нейраминидазу вируса гриппа. Эффективная вакцинация против гриппа свиней уменьшает экономические потери в индустрии свиней и возможность возникновения новых пандемических вирусов, поскольку свиньи являются промежуточными хозяевами, генерирующими пересортировку вирусов среди птиц и млекопитающих. Интраназальная иммунизация свиней вакциной, инактивированной формалином, или эфиррасщепленной, вызывает образование вирусопецифических антител: IgG. IgM и IgA в назальных секретах и сыворотке, давая полную защиту от вируса. У иммунизированных свиней не наблюдалось реакции образования антител при разрешающем заражении, что свидетельствовало о подавлении репликации вируса в первичных мишенях — респираторных эпителиальных клетках. Результаты указывают на эффективность контроля гриппа свиней инактивированными вакцинами и обеспечивают хорошую модель, подобно мышиной модели, для оценки интраназального применения гриппозной вакцины для человека. Разработан мультиплексный метод обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) для идентификации подтипов генов гемагтлютининов (Н) 1 и 3 вируса гриппа свиней. Результаты ОТ-ПЦР сравнили с данными субтипирования с использованием теста ин-гибирования гемагглютинации. Проведен анализ 235 образцов, полученных от свиней с ОРВИ и выявили 26 и 13 образцов позитивных по HI и НЗ соотвественно. Сделан вывод, что мультиплексная ОТ-ПЦР может быть использована для выявления и субтипирования вируса гриппа свиней.