Коронавирусная инфекция индеек
Коронавирусной инфекцией индеек заболевает, как правило, молодняк. Возможны различные сочетания коронавирусной инфекции с бактериальными. Так, 7-дневных индюшат заражали коронавирусом индеек (КВИ) R98/5 и энтеропатогенной E. coli. От указанного изолята падеж индюшат составлял 79 % и выявлено заметное отставание в росте. У индюшат, зараженных указанным изолятом (R98/5), развивалось поражение кишечника и типичные для колибактериоза скопление бактериальных микроколоний на эндотелии кишечника с последующей дегенерацией и некрозом слизистой оболочки в местах прикрепления бактерий. Двойная инфекция индюшат (E. coli и КВИ) индуцировала у них клинические признаки, очень сходные с синдромом энтерита и высокой смертности.
По-видимому, заболевание приобретает все большую актуальность в промышленном индейководстве. В связи с этим, начаты активные исследования этиологических и эпизоотологических особенностей данного заболевания. Описаны методы очистки коронавируса индеек (КВИ) из эмбрионов зараженных индюшек использовали гель-хроматографию на Сефакриле S-100. КВИ культивировали в 22-дневных эмбрионах индюшек. Собирали кишечник и его содержимое и гомогенизировали. После центрифугирования на малой скорости концентрировали надосадочную жидкость с помощью ультрацентрифугирования в градиенте 30-60 % сахарозы или осаждением сульфатом аммония. Затем материал подвергали гельхроматографии на Сефакриле S-1000. Оптимальной была очистка в градиенте плотности сахарозы при ультрацентрифугировании с последующей хроматографией. Чистоту препарата определяли при электрофорезе в геле полиакриламида с додецилсульфатом натрия. При простой очистке методом хроматографии вирусные частицы содержали электронно-микроскопи-чески больше шипов. Взаимодействие с антителами при иммуноферментном анализе было более выражено после очистки вируса хроматографически.
Проведены генетические и иммунологические исследования коронавируса индеек с целью определения нозологической самостоятельности его. Ген нуклеокапсида КВИ был амплифицирован вревертазной ПЦР (Р-ПЦР), клонирован и экспрессиро-ван в бакуловирусе. Рекомбинантный ген КВИ выявлен с помощью вестерн-имму-ноблот-анализа. Экспрессированные в бакуловирусе белки нуклеопротеида использовали в качестве антигена в непрямой EL1SA для обнаружения специфических антител к КВИ. В ELISA найдены антитела, специфичные КВИ и близкородственному вирусу инфекционного бронхита, но не выявленыантитела к другим вирусам птиц (вирусу гриппа, парамиксовирусу-3, аденовирусу-1 и вирусу нькжаслской болезни). Полученные данные показали, что бакуловирус, экспрессирующий Н-белок КВИ, оказался пригодным в качестве антигена для ELISA-теста с целью обнаружения специфических антител у индеек. Секвенированы З'-конец генома (1740 н.), включающий З'-нетранслируемую область (З'-НТО) и ген белка нуклеокапсида N коро-навируса индюков и сравнены с опубликованными последовательностями других ко-ронавирусов птиц и млекопитающих. Нуклеокапсид N I КВИ имеет длину 409 остатков (мол. м. 45 кД) и более чем на 90 % Идентичен таковому ВИБ, но менее чем на 21 % идентичен таковому бычьего коронавируса и вируса инфекционного гастроэнтерита. У трех штаммов КВИ обнаружена вариация З'-НТО. У штаммов Миннесота и Индиана З'-НТО содержит сегмент длиной 153 н., отсутствующий у штамма NC93. Идентичность З'-НТО КВИ и ВИБ превышает 78 %. Эти данные подтвердили, что КВИ и ВИБ являются близкородственными.
