Гепатит Утят
[Duck viral hepatitis (англ.), Virushepatitis der Ente (нем.), Ganeton I hepatite virale (франц.)]
Вирусный гепатит утят - контагиозная, сравнительно малоизученная болезнь, поражающая утят, в основном до 4-недельного возраста. Она протекает остро и хронически с преимущественным поражением печени. В некоторых хозяйствах погибает до 95 % утят. В настоящее время вирусный гепатит утят регистрируют в США, Великобритании, ОАР, ГДР, ФРГ, Италии, Бельгии, Голландии и в бывшем СССР. Большинство вспышек в различных странах обусловлено вирусом типа I.
Вирус открыт в 1949 г. Левиным и Фабрикантом.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Острое течение болезни характеризуется бурным проявлением и высокой смертностью утят в возрасте от трех дней до трех недель. Утята могут погибать в течение 1 ч после появления симптомов. Клинически болезнь проявляется вялостью, отказом от корма, нервными явлениями. Утята падают на бок или на спину и с явлениями судорог погибают в характерной позе "запрокинутой головы". Сезонности в проявлении болезни не наблюдается. Однако при переводе цыплят из теплых помещений в холодные и влажные число заболевших и павших быстро возрастает. При вскрытии павших обнаруживают геморрагии, некроз печени и отек. Печень обычно увеличена, дряблой консистенции; паренхима легко рвется, глинистого или желтовато-охряного цвета с множеством кровоизлияний на поверхности. Желчный пузырь переполнен желчью, селезенка иногда увеличена. При гистологических исследованиях наблюдают некроз печени, пролиферацию желчных протоков с клеточной инфильтрацией, гиперемию сосудов и межбалочных капилляров. Печеночные клетки сдавлены, протоплазма их сильно вакуолизирована. Ядро в состоянии пикноза и кариорексиса. В центральной нервной системе можно наблюдать периваскулярное скопление лейкоцитов. При электронной микроскопии клеток печени от зараженных утят установлено, что через 1 ч в единичных клетках печени появляется гликоген, а к 24 ч - дегенеративные изменения. Вирусные частицы обнаруживали через 1 ч, а также через 18 и 24 ч после заражения. Тяжесть течения болезни зависит не только от возраста утят, но и от патогенности вируса и состояния клеток печени в момент заражения.
Морфология и химический состав. Вирус сферической формы. Диаметр вирионов 20-40 нм. Они проходят через фильтры Зейтца ЕК и Беркельфельда.
Короткие вставки на N-конце сердцевинного белка С вируса гепатита В уток не нарушают образование компетентных к репликации нуклеокапсидов. Однако элонгация ДНК ВГУ становится неполной. Увеличение числа дополнительных аминокислотных остатков вызывает дальнейшее уменьшение размера зрелой вирусной ДНК. Мутантные вставки на N - конце сердцевинного белка С не ингибируют полимеразу ВГУ. Синтез вирусной ДНК дестабилизирует мутантные нуклеокапсиды и делает зрелую вирусную ДНК избирательно чувствительной к действию нуклеаз. Аналогичный механизм объясняет/фенотип 2 полученных ранее мутантов с делециями на С-конце. Эти данные позволили предположить, что: 1) N - и С-концевые области сердцевинного белка С играют критическую роль в стабилизации нуклеокапсида; 2) полимераза может осуществлять частичный синтез второй нити ДНК в отсутствие целых вирусных нуклеокапсидов. Вирус гепатита уток с /-шпилькой на 5'-конце прегеномной РНК индуцирует физическое изменение полимеразы, необходимое для появления ее функциональной активности.
Во-первых, показано, что необычная ДНК-полимеразная активность, использующая экзогенную РНК в трансположении и обнаруженная у рекомбинантной полиме-разы, экспрессированной в Saccharomyces cerevisiae, является аутентичным свойством вирусной полимеразы. Трансреакция является зависящей от матрицы обратной транскрипцией экзогенной РНК и не зависит от гепаднавирусного механизма белкового праймирования, но сильно стимулируется /-шпилькой. Это прямо демонстрирует роль /-шпильки в активации полимеразы.
Во-вторых, показано, что домен обратной транскриптазы в полимеразе физически изменяется при взаимодействии с /-шпилькой. В-третьих, анализ 15 мутаций в различных областях полимеразы показал, что зависящее от/-шпильки изменение полимеразы является предпосылкой для праймирования ДНК, обратной транскрипции и транс-реакции.
Вирус устойчив к эфиру, трипсину, рН 3,0. При комнатной температуре сохраняется жизнеспособным в течение четырех дней, при температуре 2-4 град.С - в течение 700 дней; выдерживает нагревание при 56 град.С в течение 60 мин, но сравнительно быстро (за 30 мин) инактивируется при температуре 62 град.С и воздействии 0,2 % раствора формалина при 37 град.С (за 8 ч). В культуральной бесклеточной среде при 37 град.С сохраняется 21 день.
Антигенная активность, антигенная вариабельность и родство. У переболевших и экспериментально зараженных утят и уток образуются КСА, ВНА и ПА, которые передаются через яйцо потомству. У двукратно привитых вирус-вакциной уток титр ВНА уже через 2 недели достигает 1:64 - 1:256 и сохраняется до семи месяцев от начала заболевания. Желточный иммунитет практически достаточен для защиты потомства от болезни в естественных условиях. Выявлена гомология поверхностных АГ вируса гепатита уток и вируса гепатита В человека с помощью ИФА. Во Вьетнаме выделен вирулентный штамм ТВ 84 по мере пассирования на чувствительных утятах вирулентность его и венгерского штамма возрастала (8а).
Антигенная структура не изучена.
Вероятно, в антигенном отношении полевые штаммы вируса гепатита родственны. Сыворотки переболевших уток нейтрализовали в одинаковой степени штаммы вируса, выделенные в Канаде в штате Нью-Йорк (США). В 1965 г. Эсплин и Тош изолировали в США второй серотип вируса гепатита утят. Выявлена гомология перекрестных АГ вируса гепатита уток (DHV) и вируса гепатита В (HBV) человека с помощью ELISA.
ГА и ГАд свойствами вирус не обладает.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится во всех органах и тканях больного утенка. В наиболее высоком титре его обнаруживают в печени, селезенке и головном мозге. Вирусоносительство установлено в течение 8-10 недель. Клонировали кДНК 120 kD белка из печени утки, связывающего укороченные pre-S белка оболочки вируса утиного гепатита В. Аминокислотная последовательность триптических пептидов белка 120 kD показала, что он является глициндекар-боксилазным комплексом (DGD). DGD-белок экспрессировали и изучали его способность связывать pre-S пептиды. Трансфекция в клетки, происходящие из печени и почек, показала, что экспрессия этого белка происходит как на клеточной поверхности, так и в цитоплазме. Обсуждается роль DGD-белка как клеточного поверхностного ко-рецептора вируса Pre-S или как ко-фактора в реплекационном цикле вируса Pre-S гепатита В уток (10).
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится только у молодняка утят до 10-12 дневного возраста. Взрослая птица переболевает бессимптомно. Удавалось заразить цесарят, гусят, фазанят, перепелят и индюшат. Для изучения влияния вируса утиного гепатита (DHV) на антиоксидазную функцию печени, 160 здоровых утят делились на 4 группы: контрольную и инфицированные слабо-, средне - и сильно токсичными штаммами. Образцы печени брались на 1-, 3-, 5- и 7-й день после заражения для измерения содержания CAT, GSH-Px и SOD. Результаты показали, что САТ-активность печени в группе инфицированной сильно токсичными штаммами, падает уже на 1-й день, а в группе, инфицированной слаботоксичными штаммами, на 5-й день. SOD-актив-ность печени всех групп понижается с 1-го дня, а на 3-й день наблюдаются значительные различия между инфекционными группами и контролем. Активность GSP-Px инфекционных групп была меньше, чем в контрольной группе на 5-й день. Это указывает на неспособность утят, инфицированных DHV, элиминировать свободные радикалы, участвующие в патогенезе вирусного утиного гепатита.
Культивирование. Проводят на КЭ 7-9 дневного возрастай на 12-13 дневных утиных эмбрионах при заражении в аллантоисную полость. Погибают эмбрионы на 3-6-й день. У них обнаруживают отек, гиперемию и кровоизлияния на теле и голове. Печень набухшая, желто-зеленого и темно-зеленого цвета, с очагами некроза в виде точек или тонких переплетающихся тяжей. Иногда печень и аллантоисная жидкость зеленого цвета. При многократном (более 10) пассировании вируса на КЭ патогенность его для утят утрачивается. В максимальном количестве вирус концентрируется в печени эмбрионов. Вирус удается репродуцировать также в культуре клеток ФКЭ с коллагеназой. Измельченную ткань 8-дневных КЭ обрабатывают трипсином и коллаге-назой. Из полученной взвеси готовят однослойную культуру клеток, выращенную на среде 199 с сывороткой крови телят. Через 3-7 дней вирус вызывает образование сим-пластов и вакуолизацию пораженных клеток, зернистость и отставание клеток от стекла. Разработан метод титрования инфекционности вируса гепатита уток в первичной культуре клеток почки эмбрионов уток. Особенности внутриклеточной репродукции не изучены, известно лишь, что вирус синтезируется в протоплазме клетки.
Источники и пути передачи инфекции. Основным резервуаром инфекции служит больная птица и вирусоносители. Во внешнюю среду вирус выделяется с калом и носовыми выделениями, инфицируя корм, воду, подстилку, инвентарь и воздухпомещения. Возможна передача вируса с инфицированными яйцами и дикими утками. Вирус может поступать в кишечник червей-навозников, в организме которых он сохраняется до 18 дней. В тканях червя вирус не репродуцируется. В естественных условиях болеют утята до 4-недельного возраста. Описаны случаи заражения гусят вирусом гепатита утят.
Иммунитет и специфическая профилактика. Утята старше четырех недель устойчивы к заражению вирусом гепатита. У переболевших утят появляются ВНА, и они становятся устойчивыми к реинфекции. У 4-5-недель утят обнаруживается возрастная невосприимчивость. Для профилактики применяют живые и инактивированные вакцины, иммунизируют племенных уток или 1-3-дневных утят. Передаваемые трансо-вариально AT защищают утят в течение трех недель жизни. Утят с первых дней жизни прививают живыми вакцинами, а племенных уток - живыми и инактивированными.
Аттенуированные штаммы вируса получают путем серийного пассирования вирулентных штаммов (КЭ) или эмбрионах утиных (УЭ). Обычно выраженная аттенуация наступает через 50-80 пассажей. Вирус, в основном, накапливается в теле и ХАО эмбриона. Вакцинный шт. Р-50 выделяли из печени селезенки и фекалий утят в течение 8-9 дней после прививки. Аттенуированные штаммы могут передаваться горизонтально. ИмД 100 соответствует примерно 1000-10000 ЭИД50. В практических условиях не отмечено разницы в эффективности иммунизации утят при подкожном введении вакцины и выпаивании с питьевой водой. Аттенуированные штаммы СЬо и Н55 при подкожном введении в дозе 200 ЭЛД50 двухдневным утятам вызывали выраженную устойчивость к заражению вирулентным штаммом через 24 ч. Однако такие штаммы восстанавливали вирулентность после 2-4 пассажей на утятах.
Более выраженная аттенуация вируса оказалась возможной после 85 пассажей на УЭ, однако при этом ослаблялась иммуногенность. Такая вакцина, введенная 2-дневным утятам в аналогичной дозировке защищала их от заражения только спустя 96 ч. У утят, привитых в возрасте 2-3 дней живой вакциной, образовывались ВНА в высоком титре, которые удерживались до 30 недель. При ревакцинации уток в возрасте 22 недель инактивированной вакциной иммунный ответ усиливался, а полученные от них утята были иммунными в течение трех недель жизни. В неблагополучных хозяйствах племенным уткам живую вакцину первый раз вводят в возрасте 3 месяцев, во второй раз - за 4-2 недели до яйцекладки, а спустя 8 недель можно сделать третью прививку.
Инактивированную эмульгированную вакцину готовят из вируса, размноженного на УЭ и КЭ. Иммунный ответ оценивают по титру В НА у взрослых уток и иммунитету, переданному трансовариально утятам. Вирус, размноженный в УЭ и инактивированный БПЛ оказался более иммуногенным, чем инактивированный из КЭ. Удовлетворительный иммунный ответ наблюдался при трехкратной вакцинации уток в возрасте 8,16 и 22 недель. Уровень AT у племенных уток был достаточным для защиты потомства в течение первых 3 недель жизни утенка. Однократная вакцинация уток в 16-недельном возрасте инактивированной или живой вакцинами не обеспечивала надежной защиты потомства. Взрослые утки клинически не болеют. У вакцинированных живой вирус-вакциной утят ВНА сохраняются до 9 месяцев и более. Поэтому, помимо вакцин, в качестве профилактического средства гепатита утят рекомендуют использовать сыворотку реконвалесцентов и гипериммунную сыворотку. Применяют вакцину УНИиП из шт. ЗМ. Прививают утят и уток-несушек, после 2-3-кратной прививки утки-несушки передают утятам иммунитет через яйцо. Вакцина эффективна. Препарат пригоден для вакцинации утят в суточном возрасте и взрослых уток.
