[Morbis vesiculates suum (naT.);Vesikulare Scshwinekrankheit, Blaschenkrankheit des Schweines (нем.); Swine vesicular Disease (англ.); Maladie vesiculeuse du pore (франц.)]
Везикулярная болезнь свиней (ВБС) — контагиозное заболевание, клинически проявляющееся высокой температурой, везикулярным поражением венчика, эпителия области межкопытной щели, рыла, плюсны и пясти.
Впервые ВБС появилась в Ломбардии (Италия) в 1966 г. В 1972 г. подобную болезнь обнаружили в Гонконге. В этом же году три очага инфекции были зарегистрированы в Италии. В 1973 г. в Великобритании было выявлено 83 очага болезни. В те же годы инфекцию обнаружили в Австралии, Польше, Франции.
Впервые принадлежность вируса везикулярной болезни свиней к энтеровирусам показали Ньюман, Ровланде и Браун (1968 г.). Позднее их данные подтвердили Мо-ват, Дарбишер и Хантли (1972 г.). Вирус был изучен Нардели и др. (1968 г.) и Моватом с сотрудниками (1972 г.), на основании чего было предложено назвать его энтерови-русом свиней Англия/72.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. По клиническим признакам ВБС трудно отличить от ящура. Протекает она доброкачественно и лишь иногда вызывает незначительную смертность среди поросят-сосунов.
Различают острое, подострое и субклиническое течение болезни. Везикулы, появляющиеся при остром течении болезни, трудно отличить от таковых при ящуре. Подострое течение сопровождается широкой диссиминацией вируса во внешней среде. Инкубационный период при остром течении продолжается 3—7 дней, иногда дольше. В это время у животных ухудшается аппетит, заметна вялость. С развитием везикул температура тела повышается до 40—41° и за 1—2 дня снижается до нормальной. Для болезни характерно появление везикул на ногах в области венчика копыт и реже на морде и языке. Чаше поражаются обе конечности, вследствие чего появляется хромота, которая через 3—4 дня исчезает. В это время может начаться отделяться копытный рог, а у отдельных животных — спадение рогового башмака.
Иногда болезнь протекает легко, охватывет большое число животных и характеризуется слабозаметной хромотой. На месте лопнувших везикул остаются неглубокие, с геморрагическим дном язвы, содержащие экссудат соломенного цвета. Область межкопытной щели поражается редко. У 5—10 % свиней везикулы появляются на пятачке и в ротовой полости.
Подострое течение болезни характеризуется медленным распространением. Заболевают несколько свиней, у них обнаруживают единичные везикулы. Все заболевшие довольно быстро выздоравливают.
Хроническое течение болезни слабо выражено. Можно наблюдать хромоту, обусловленную развитием отдельных везикул, появлением трещин копытного рога и отслоением башмака. Имеются данные, что по мере распространения болезни усиливается тяжесть переболевания. Болезнь, казавшаяся в очагах появления безобидной, становится опасной.
В местах образования везикул и эрозий гистологически различают изменение двух типов. Изменение первого типа характеризуется вакуолизацией клеток шиловидного слоя, пикнозом ядер, разобщением клетки формированием мелких везикул, которые, сливаясь, образуют крупные везикулы. Их края плотно соединены с непораженным эпителием. Базальный слой вначале сохраняется, а затем инфильтрируется нейтро-фильными гранулоцитами, эозинофильными и мононуклеарными клетками. Изменения второго типа состоят в дегенерации клеток шиловидного слоя. Распавшиеся участки эпителия сильно инфильтрованы нейтрофильными гранулоцитами с примесью большого количества остатков ядер и детритных масс. Везикулы не образуются. На основании морфологических изменений различить везикулярную болезнь свиней и ящур не удается. При везикулярной болезни микроскопические изменения обнаружены в ЦНС. Поражения головного мозга обнаруживались на 2-й день после инокуляции вируса; на 6-й день они были более тяжелыми, а на 12-й имели резко выраженный характер и проявлялись образованием периваскулярных муфт, состоящих из лимфоцитов и фокусов нейроглиальных клеток.
Поражения развиваются через 3—11 дней после поедания контаминированного корма и через 2—4 дня после экспериментального заражения.. Лихорадка продолжается 5 дней. Пик виремии наблюдался на 2—4-й день после заражения. Гиперемия продолжается 6 дней. Вирус персистирует по крайней мере 10 дней в тканях рыльца, языка, венчика копыт, заглоточных лимфоузлов, мышце сердца, в ЦНС.
Филогенетический анализ области генов VP1 и ЗВС группы вирусов Коксакки В (ВКВ), содержащей представителей главных серотипов, и 45 изолятов вирусов везикулярной болезни свиней (ВВБС) из Азии и Европы показал, что ВВБС образуют одну монофилогенетическую группу, которая существенно отличается от известных ВКВ. Регрессионный анализ показал, что в клайде ВВБС по меньшей мере 80 % синонимической вариации в эволюционной дивергенции между изолятами объясняется временем. Это указало на существование молекулярных часов ВВБС, калибровка которых по частоте синонимических замен в год позволила предположить, что общий предок клайд а ВВБС появился между 1945 г. и 1965 г.
Морфология и химический состав. Полипептидный состав изолятов, выделенных в Великобритании, Австралии и Италии в 1972 — 1973 гг., различен. Вирус содержит три белка: VP1, VP2 и VP3 с мол. м. 33, 29 и 32 кД соответственно. Белки VP1 и VP2 ответственны за индукцию ВНА. РНК вируса можно обнаружить с помощью ПЦР в зараженных первичных клетках почки свиней. Очищенные препараты вирусной РНК подвергают обратной транскрипции. Амплификацию полученной кДНК проводят праймерами, амплифицирующими фрагменты капсидного белка и неструктурного белка LA, а также некодирующий фрагмент генома. РНК, выделенная из незаражен-ных клеток дает отрицательные результаты в ГТЦР. РНК генома вируса типа 11 (ЭВ-11) имеет длину 7438 н и кодирует полипротеины из 2195 остатков. По организации 5'-конца некодирующей области ЭВ-11 похож на другие энтеровирусы, но имеет уникальный участок поли(У) длиной 12н. Установлено, что нуклеотидная последовательность патогенного шт. 27/72 сложена из последовательностей 148 отдельных клонов. Геном этого шт. представляет 7400 нуклеотидов. Установлено 98 различий из 7400 нуклеотидов, 14 нуклеотидных различий между патогенным и непатогенным штаммами вируса ВВС. При генетическом анализе выделенных в 1972—1973 гг. в Польше штаммов вируса везикулярной болезни свиней (ВВБС) методом прямого секвенирования продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР) области, кодирующей структурный полипептид 1D(VP1) вируса сравнивали последовательности нуклеотидов (нукл. ПС) выделенных в Польше штаммов с выделенными в Европе и Японии между 1966 и 1994 гг. Не выявили заметную генетическую дивергенцию между польскими и другими штаммами, выделенными в 1972—1981 гг. Все они принадлежали к геногруппе П. 10—15 % различия обнаружены между польскими штаммами 1972 г. и выделенными в Западной Европе в 1991/92 гг. (геногруппа III) и в 1993—94 гг. (геногруппа IV). Авторы считают, что различие больше определялось временем определения генотипа, чем его географическим расположением.
N-концевая область белка VP1 вируса везикулярной болезни свиней высоко антигенна у свиней, несмотря на ее внутреннее расположение в капсиде. Антитела против этой области блокируют инфекцию и способность вируса прикрепляться к клеткам заметно повышает эту блокаду. Считают, что после связывания с клеткой капсид ВВБС подвергается не зависящим от температуры конйрормационным изменениям и это экспонирует N-конец VP1. Эта область чувствительна к антителам, блокирующим проникновение вируса.
Во внешней среде вирус высокоустойчив: в инфицированном навозе и мусоре сохраняет свою активность 8 недель, в искусственно инфицированном жидком навозе при 5 °С — в течение 38 днейй. Устойчив к эфиру и рН в широком диапазоне (от 2,0 до 12,5). В навозе, находящемся в пластиковых мешках при 12—17 °С, вирус оставался жизнеспособным в течение 138 дней хранения, в образцах материала инфицированных туш, хранившихся при минус 20 °С, выживал в течение 11 месяцев. Молочная кислота, образующаяся в мышцах павшего животного в результате трупного окоченения, на жизнеспособность вируса не влияет. Поэтому мясо больных животных может быть причиной вспышки болезни.
Вирус термолабилен, разрушается при 60 °С в течение 30 мин. Гонконгский и итальянский штаммы более резистентны к термоинактивации, чем вирус ящура; оба стабилизируются 1М MgCb, тогда как последний способствует инактивации вируса ящура. Из дезинфицирующих средств эффективны гипохлорид натрия (0,5 %) и йо-дозол (0,2 %), NaOH и формалин не эффективны.
При ультрацентрифугировании в градиенте сахарозы выделено два типа комплементсвязывающих частиц с константой седиментации 150 S и 80 S. Плотность тяжелых частиц 1,34 г/см3, легких — 1,30 г/см3. Диаметр более легких частиц 30—32 нм.
У поросят появляются ВНА, которые выявляются в течение четырех месяцев после переболевания. Ранние ВНА обнаруживаются на 4-й день. Антисыворотки к вирусу получают на морских свинках.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус имеет подтиповые варианты, подобные таковым у вируса ящура (величина достигает 0,2—0,3). В РДП с сывороткой сви-ней-реконвалесцентов найдены антигенные различия между шт. Италия/72, Англия/72, Австралия/73 и Польша/73. Антигенная структура штаммов, выделенных в Италии в 1972—1973 гг., отличалась от таковой штамма, выделенного в 1966 г. Антисыворотка, приготовленная на штаммы, выделенные в 1972—1973 гг., давала четкую РСК со штаммом, полученным в 1966 г., но не наоборот. РН дала аналогичные результаты. Известны штаммы вируса: Англия/72 (эталон ИКД 27/72), Италия 1/66 и 3/73, Австрия 1/73, Франция 1/73, Польша 1/73.
Между вирусом ВБС и вирусом Коксаки типа В5 (КВ5) существует тесное серологическое родство. Вирус ВБС легко нейтрализуется антисывороткой к вирусу Коксаки В5, а сыворотка свиней-реконвалесцентов нейтрализует шт. Коксаки В5, выделенные от человека. Однако, в прямых опытах перекрестного иммунитета иммунологического родства между этими вирусами не установлено.
Известно, что вирус Коксаки А16 вызывает ящуроподобное изменение у детей. Возможно, энтеровирус свиней Англия/72 (возбудитель ВБС) является вариантом штамма вируса, который не вызывает таких поражений у человека. Гемагглютиниру-ющие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Из органов и тканей свиней-реконвалесцентов вирус везикулярной болезни выделить не удается. Однако он долго сохраняется на поверхности тела животных и в навозе. Даже в латентном периоде он накапливается в коже, мышцах, лимфоузлах (титр до 4 lg/г ткани) и сохраняется в течение двух недель после убоя животного. В наивысшей концентрации вирус находят в секретах животных в первую неделю болезни. В течение 14—16 дней после заражения его можно выделить из экскрементов. В высокой концентрации он содержится в эпителии пораженных участков кожи, выявлен в лимфоузлах и костном мозге туш через 13 дней после убоя больных животных. По другим данным, вирус постоянно в течение 45 суток выявляется в фекалиях и нерегулярно обнаруживается до 110 суток. Из мочи, выделений носовой полости и глоточной жидкости, его можно изолировать нерегулярно в течение 90, 80 и 65 суток соответственно. Таким образом, пораженные животные могут контаминировать внешнюю среду и заражать интакт-ных свиней в течение более трех месяцев.
Экспериментальная инфекция. Заболевание легко воспроизводится при оральном, подкожном, внутрикожном и контактном способах заражения. Не все штаммы вируса, выделенные в разных странах, обладают одинаковой способностью вызывать везикулы на месте введения (внутрикожно в мякиш). У свиньи, зараженной в пятачок, везикулярные поражения на месте введения вируса развиваются уже через 36 ч. Болезнь прогрессирует, охватывая кожу, суставы конечностей, морду и язык. Однако заживление дефектов кожи происходит быстрее, чем при ящуре. При интрацеребраль-ном заражении 10-дневных поросят шт. UKG 27/72 симптомы болезни развивались на 7—8-й день и отмечались до 16 дня. Вирус выделяли из коры головного мозга на 2—4-й день после заражения, AT появлялись на 8-й день.
У подсаженных овец явных признаков болезни не обнаружено, но через 4—7 дней в глотке обнаружили большое количество вируса, что указывало на размножение его в организме овец, у шести из восьми овец были выявлены ВНА в значительном титре, у четырех животных они удерживались 6 недель. Кроме поросят, экспериментально можно заразить однодневных мышат, которые заболевают через 24—30 ч с признаками поражения ЦНС (тремор, нарушение координации движений, к 7-у дню — параличи и смерть). Вирус активно размножается в головном мозге и поражает мозговую ткань (деструкция нейронов в ганглиозном слое аммонова рога, дегенерация и распад нервных клеток). Вирус удалось реизолировать из мозга инфицированных мышей. Максимален титр его на четвертые сутки. После заражения вирусом ящура у мышат также развиваются параличи, однако мозговая ткань не поражается. Метод биопробы на мышах рекомендуется для дифференциальной диагностики ВБС от ящура.
Охарактеризованы 9 изолятов, полученных от свиней, персистентно инфицированных итальянским изолятом (ТТ/9/93) вируса везикулярной болезни свиней (ВВБС). У этих изолятов обнаружены аминокислотные замены, главным образом, в VP1 и изменение антигенности, связанной с антигенным сайтом 1. При экспериментальном заражении свиней различными штаммами не удалось выделить вирус через 16 дней после заражения и обнаружить вирусную РНК через 41 день после заражения. Попытки передать от этих животных инфекцию свиньям-сентинелям по большей части (в четирех случаях из пяти) оказались безуспешными. Авторы полагали, что персистентная инфекция редко развивается у свиней вследствии заражения их ВВБС.
Культивирование. Вирус ВБС размножается без адаптации в первичной культуре клеток почки свиньи и перевиваемых линиях свиного происхождения РК-15 и IB-RS-2. Он вызывает ЦПИ и бляшки. Первые изменения в инфицированной вирусом культуре клеток почки свиньи появляются через 3 ч после заражения и характеризуются вакуольной дистрофией цитоплазмы и интенсивной базофилией ядра. Через 8 ч в цитоплазме наблюдаются пикнозированные диски или кариорексис. Полная дегенерация клеточного слоя обычно наступает через 24—36 ч после заражения. Наряду с ЦПИ изменяется энзиматическая активность клеток: увеличивается содержание сукциндегидрогеназы и уменьшается количество лактатдегидрогеназы. У адаптированного к перевиваемым клеткам 1B-RS-2 вируса цикл размножения равен 4 ч, а титр его достигал 2х109 БОЕ/мл. Шт. Н/3'76 успешно культивировали в клетках IBRS-2. С помощью монАТ было выявлено 5 сайтов нейтрализации.
Источники и пути передачи инфекции. Свиньи с субклиническим течением болезни могут быть источником заражения здоровых животных. В отличие от возбудителя ящура, ВБС не распространяется по воздуху на большие расстояния. Инфекция передается при контакте с больными животными или через инфицированные корма и субпродукты.
Вирус поражает только свиней. Доказана восприимчивость к нему кабанов. Лабораторные работники, имевшие контакт со свиньями, зараженными британским полевым штаммом вируса, имели специфические ВНА. Позднее было показано, что при работе с вирусом или уходе за больными животными возможно заражение людей. Предполагают, что возбудитель произошел от энтеровирусов, циркулировавших у людей, поскольку он может вызывать у человека болезнь, сходную с Коксаки-ин-фекцией. В сыворотках крови здоровых свиней AT к вирусу нет, но они появляются после заражения животных вирусом Коксаки В5.
Иммунитет и специфическая профилактика. В Великобритании применяют культуральную инактивированную вакцину. Вирус (шт. ИК-27) выращивают в монослое или в суспензионных культурах клеток IB-RS-2, концентрируют, инактивируют ацетилэтиленимином, добавляют масляный адъювант. Во Франции применяют инактивированную масляную вакцину, которая сообщает иммунитет 73—100 % животным. Вирус накапливается в высоком титре (8,0—9,0 lg ТЦД so/ мл), что дает возможность получать эффективные вакцинные препараты без предварительного - концентрирования вирусного АГ. Технологии изготовления достаточно эффективных вакцин, разработанных в различных странах: во Франции (лаборатория Роне Беллон) — эмульгированная формолвакцина; в Великобритании (Пирбрайт) — ацетилэтилениминовая ГОА вакцина; в Румынии - эмульгированная вакцина типа «масло в воде» с использованием суспензионной культуры клеток IBRS-2; в Германии (о. Риме)- формолвакцина с использованием первичной культуры клеток почки поросят и ГОА. Иммунизация свиней инактивированными препаратами создает достаточно высокий уровень защиты поголовья, обеспечивающий ограничение в распространении ВБС. Эмульгированная формолвакцина, которую применяют однократно внутримышечно в дозе 2 мл, обеспечивает иммунитет продолжительностью 8 мес. Вакцина сохраняет иммуно-генность не менее года в условиях хранения при 2—6 °С. Определена полная нуклео-тидная последовательность тайванского изолята ВВБС. Сконструированы мутанты ВВБС с измененными областями 2693-2710 и соответствующие экспрессивные плазмиды. Эти мутанты могут быть использованы в качестве вакцин. Описан, основанный на ПЦР метод, позволяющий отличать мутанты ВВБС от ВВБС дикого типа и от вирусов Коксаки и ящура.