[Pestis africana suum (лат.); African swine fever (англ.); Peste porcine africaine (франц.); Peste porcina africana (исп.)]

Африканская чума свиней (АЧС, болезнь Монтгомери) — контагиозная болезнь, протекающая остро, подостро, хронически, бессимптомно и характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом, воспалительными и некродистрофическими изменениями паренхиматозных органов. Болезнь зарегистрирована в Африке, Испании, Португалии, Франции, Бразилии и на Кубе. Болеют свиньи всех возрастов и пород в любое время года. Вирус описан Монтгомери в 1921 г., выделен в отдельное семейство.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Они сходны с таковыми при КЧС. АЧС проявлялась в виде интенсивной геморрагической септицемии — в высшей степени контагиозной, быстро протекающей болезни, вызывающей гибель всех контаминированных животных. В естественных условиях инкубационный период длится 5—7 дней, в эксперименте срок его варьировал в зависимости от штамма и дозы вируса. Различают сверхострое, острое, подострое, хроническое и латентное течение болезни. Чаще наблюдают сверхострое и острое течение.

При Сверхостром Течении температура тела у больного животного повышается до 40,5— 42 °С, сильно выражены угнетение и одышка. Животное больше лежит, а через 24—72 ч погибает. При Остром (наиболее характерном) течении болезни температура повышается до 40,5—42 °С и понижается за один день до гибели животного. Одновременно с повышением температуры появляются первые симптомы болезни: подавленное состояние, парез задних конечностей. Появляются красно-фиолетовые пятна на коже ушей, рыла, брюха, промежности и нижней части шеи. Параллельно проявляются признаки воспаления легких: дыхание становится коротким, частым, прерывистым, иногда сопровождается кашлем. Симптомы расстройства пищеварения выражены слабо: обычно наблюдается длительный запор, кал бывает твердым, покрыт слизью. В некоторых случаях наблюдается понос с кровью. В атональной стадии болезни животные находятся в коматозном состоянии, которое продолжается 24—48 ч, температура тела снижается ниже нормы и через 4—10 дней с момента повышения температуры животное гибнет.

Подострое Течение по симптоматологии сходно с острым, но признаки болезни развиваются менее интенсивно. Болезнь длится 15—20 дней, свиньи обычно погибают. У единичных выживших особей развивается хроническое течение болезни, которое характеризуется перемежающейся лихорадкой, истощением, остановкой роста, мягкими безболезненными отеками в суставах запястья, плюсны, фаланг, подкожных тканей морды и нижней челюсти, некрозами кожи, кератитами. Животные болеют 2—15 месяцев, гибель, как правило, наступает после вовлечения в инфекционный процесс легких. Клинически же большинство выздоровевших животных превращаются в здоровых носителей возбудителя, т. е. у них развивается латентное течение АЧС. Патогенез хронического течения АЧС имеет некоторое сходство с такими болезнями как ИНАН, алеутская болезнь норок и др. Это сходство выражается в персистировании вируса, слабой, если не полностью отсутствующей, вируснейтрализующей активности сывороток, гипергаммаглобулинемией. Последняя, видимо, обусловлена постоянной антигенной стимуляцией персистирующим вирусом, поскольку он выделяется из органов большинства хронически инфицированных животных, и его титр коррелирует с повышением уровня гаммаглобулинов и AT.

В последние 20 лет в Португалии, Испании, Анголе и других странах произошло изменение формы проявления АЧС — летальность значительно снизилась, возросло число случаев инаппарантной инфекции, латентного носительства.

Латентное течение Характерно для естественных носителей вируса — бородавочников, лесных и кустарниковых свиней в Африке и домашних в Испании и Португалии. Клинически эта форма не выражена и проявляется лишь перемежающейся ви-ремией. При стрессах они выделяют вирус и заражают здоровых свиней. По крайней мере 3 вида диких свиней, обитающих в Африке, могут быть носителями вируса АЧС без видимых клинических признаков болезни. Однако если этот вирус ввести домашним свиньям, он вызовет высококонтагиозную сверхострую лихорадочную болезнь с летальным исходом. Отдельные особи, выжившие при такой форме болезни, обычно устойчивы к массивной дозе высокопатогенного гомологичного штамма. Хотя в сыворотках таких свиней-реконвалесцентов можно выявить высокие титры специфических (КС, ПА) AT, их иммунологическое значение остается неясным. Такие животные почти всегда являются хронически инфицированными, носящими в крови одновременно AT и вирус.

У свиней, павших от острой или подострой формы болезни, упитанность сохраняется, трупное окоченение выражено, кожа подгрудка, вентральной части брюшных стенок, внутренней поверхности бедер, мошонки покрасневшая или багрово-фиолетового цвета. Носовая полость и трахея заполнены розоватой пенистой жидкостью. Лимфоузлы туши и внутренних органов увеличены, поверхности разреза мраморные. Нередко они темно-красного, почти черного цвета и напоминают сгусток крови. Селезенка увеличена, вишневого или темно-красного цвета, мягкой консистенции, края ее закруглены, пульпа сочная, легко соскабливается с поверхности разреза. Легкие полнокровны, увеличены в объеме, серовато-красного цвета. Междольковая соединительная ткань сильно пропитана серозно-фибринозным экссудатом и выступает в виде широких тяжей, четко ограничивающих легочные дольки и доли. Нередко обнаруживают мелкофокусные кровоизлияния под плеврой и очаги катаральной пневмонии. Почки часто увеличены, темно-красного цвета, с пятнисто-точечными кровоизлияниями. Почечная лоханка отечна, усеяна пятнистыми геморрагиями. Иногда кровоизлияния находят на фоне анемии почек. Печень увеличена, полнокровна, неравномерно окрашена в серовато-глинистый цвет. Слизистая оболочка желчного пузыря набухшая, пронизана точечными кровоизлияниями, последние локализуются и в серозной оболочке. Слизистая ЖКТ покрасневшая, набухшая, местами (особенно по складкам) с кровоизлияниями. В некоторых случаях геморрагии локализуются в серозной оболочке толстого кишечника. Сосуды головного мозга кровенаполнены, мозговое вещество отечно, с кровоизлияниями.

При хроническом течении болезни патоморфологические изменения проявляются резким увеличением бронхиальных лимфоузлов и двусторонним поражением легких. Бессимптомное течение характеризуется мраморной окраской портальных или бронхиальных лимфоузлов и очаговым поражением легких. Гистологические изменения. При остром и подостром течении болезни резко расстраивается гемодинамика в лимфоузлах и селезенке в результате мукоидного набухания и фибриноидного некроза стенок кровеносных сосудов; опустошения лимфоидной ткани и распад клеток по типу кариорексиса. В ЦНС и в паренхиматозных органах отмечают воспалительно-дистрофические изменения различной степени выраженности. ИФ вирус и его АГ обнаруживают в макрофагах, ретикулярных клетках, лимфоцитах и в купферовских клетках, в мегакариоцитах и гемоцитобластах мазков-отпечатков селезенки, лимфоузлов, костного мозга, печени и легких больных животных. Видны перинуклеарные включения.

При хроническом течении патологический процесс локализуется преимущественно в бронхиальных лимфоузлах и легких. При этом регистрируют изменения, присущие серозно-геморрагическому лимфадениту и крупозно-некротической пневмонии. Возможен переход воспаления на сердечную сорочку и миокард. Бессимптомное течение болезни ограниченного характера проявляется неравномерной гиперемией бронхиальных или портальных лимфоузлов, очаговой серозно-ката-ральной или серозно-фибринозной пневмонией. В организме больных свиней вирус первоначально обусловливает гиперплазию лимфоидных клеток. В процессе его репродукции и накопления основная масса их (70—80 %) погибает по типу карио-пикноза и кариорексиса. В культуре клеток костного мозга и лейкоцитов крови свиньи происходит адсорбция эритроцитов на поверхности инфицированных клеток вирусом АЧС при достижении титра вируса 103.5-4,0 ГАЕзо/мл. В перинуклеарной зоне инфицированных клеток появляются включения, располагающиеся в местах синтеза вируса. Позднее зараженные клетки округляются, теряют связь друг с другом и отслаиваются от стенки.

Патогенез. В Естественных условиях вирус проникает в организм свиней через органы дыхания, пищеварения, поврежденную кожу и слизистые оболочки. Нуклеиновая кислота вируса индуцирует перестройку клеточного метаболизма и активизирует гидролитические ферменты, в результате чего усиливается пролиферация клеток лимфоидной ткани. Пролиферирующие клетки представляют собой благоприятную среду для репродукции вируса. В организме вирус быстро распространяется по кровеносным и лимфатическим сосудам, оказывает воздействие на лимфоидную ткань, костный мозг и на стенки кровеносных сосудов. Действие его усугубляется развитием аллергических реакций, проявляющихся увеличением количества тучных клеток, эози-нофилов, а также развитием мукоидного набухания и фибриноидного некроза сосудистых стенок.

Вирус АЧС размножается в клетках лимфоидной и ретикулоэндотелиальной тканей. При остром течении болезни он угнетает иммунную систему, разрушая или изменяя функции лимфоидных клеток, при хроническом или латентном — нарушает соотношение субпопуляций лейкоцитов, функцию макрофагов, синтез и активность медиаторов клеточного иммунитета. Патологические процессы, развивающиеся в поздней стадии острого течения АЧС (резкое ухудшение общего состояния, увеличение проницаемости сосудов, множественные геморрагии), а также при длительном течении болезни (крупозно некротическая пневмония, инфильтрация тканей лимфоид-ными клетками, некрозы кожи, артриты, гипергаммаглобулинемия) вызваны гипер-эргическим, аллергическим и аутоиммунным процессами. В патогенезе АЧС аллергические и аутоаллергические процессы играют существенную роль. При остром течении болезни резко изменяются свойства крови (лейкопения, повышение склеи-ваемости лейкоцитов, активация ферментов в крови и органах), тяжелые дегенеративные изменения клеток РЭС, множественные кровоизлияния в результате нарушения проницаемости стенок сосудов, активации фосфотаз и исчезновение гликогена в печени.

При хроническом течении АЧС выявляют системное проявление аллергической реакции, переходящей в аутоиммунную болезнь с поражением органов-мишеней. В очагах поражения установлено отложение комплексов антиген-антитело с фиксацией комплемента. В период рецидивов болезни выявляют циклические изменения в картине белой крови, аутоиммунное повреждение нейтрофилов и угнетение фагоцитарной активности. При подостром и хроническом течениях АЧС на месте повторного введения вируса часто развиваются обширные местные воспалительные процессы, названные опухолеподобными образованиями. Они представляют собой обширные припухлости в области подчелюстного пространства и шеи в диаметре до 30—40 см. При этом болезненность и повышение местной температуры не выражены. Однако в течение 12—14 суток эти образования увеличиваются, что сопровождается повышением температуры и ухудшением общего состояния животных. При убое и вскрытии таких свиней устанавливают нечетко ограниченные от нормальных тканей образования с выраженным отеком по периферии и некрозом в центральной части. В тканях установлено накопление вируса в негемадсорбирующей форме до 107,5 ТЦЦ5о/мл и специфического АГ, выявленного в РСК и ИФ. При гистоисследовании установлены изменения, характерные для гиперэргического воспаления: инфильтрация тканей лимфоидно-гистиоцитарными элементами с примесью эозинофилов, нейтрофилов и плазмоцитов.

Воспалительно-аллергические реакции на месте повторного введения вируса или его АГ способствуют локализации патологического процесса. Аллергическую сенсибилизацию при АЧС удается выявить методом внутрикожной аллергической пробы. Аллергеном служат концентрированные вируссодержащие материалы, инактивированные У-Лучами, которые вводят внутрикожно. На месте введения аллергена у инфицированных вирусом АЧС животных через 24—48 ч развивается воспалительная реакция, сопровождающаяся инфильтрацией соединительнотканного слоя кожи мононуклеарными клетками, что проявляется гиперемией и припухлостью от 10 до 40 мм в диаметре. Аллергическую реакцию выявляют с 3 по 150-е суток после инфицирования у 68,7 % животных. Приведенные сведения позволяют считать, что аллергические или ау-тоаллергические реакции играют существенную роль в патогенезе и иммуногенезе АЧС.

Морфология и химический состав. Вирионы представляют собой округлые частицы диаметром 175—215 нм, состоящие из плотного нуклеоида, двухслойного икосаэдрического капсида и наружной оболочки. Нуклеоид содержит ДНК и белок и окружен электронно-прозрачным слоем. Двухслойный капсид состоит из 1892—2172 капсомеров. Наружная липопротеидная оболочка вирионов имеет типичное строение и не необходима для проявления инфекционных свойств вируса. Между наружной оболочкой и капсидом имеется электронно-прозрачный слой. Плавучая плотность в CsCl составляет 1,19—1,24 г/см3, коэффициент седиментации 1800—8000S. Инфекционность вируса сохраняется при 5 °С в течение 5—7 лет, при комнатной температуре — 18 месяцев, при 37 °С — 10—30 дней. Вирус стабилен при рН 3—10, чувствителен к жирорастворителям и инактивируется при 56 °С в течение 30 мин.

Концы ДНК ковалентно связаны и содержат инвертированные повторы, сходными с таковыми в ДНК поксвирусов. ДНК не обладает инфекционностью. В вирионах вируса АЧС обнаружено 54 полипептида. С'Вирионами ассоциировано несколько ферментов, необходимых для синтеза ранних иРНК

Вирус АЧС размножается в цитоплазме клеток, однако функция ядра также необходима для его репродукции. В инфицированных клетках обнаружено 106 вирусспецифических белков, из которых 35 синтезируются до начала репликации вирусной ДНК (ранние белки) и 71 после репликации ДНК (поздние белки). Вирионы созревают в цитоплазме и приобретают наружную оболочку при почковании через цитоплазматическую мембрану. Вирус размножается в организме свиней и клещах рода Ornithodoros. В организме свиней вирус реплицируется в моноцитах, макрофагах и ретикулоэндотелиальных клетках. У самок клещей вирус сохраняется более 100 дней, передается трансовариально и трансфазно.

Известно, что проникновение вирусов в организм сопровождается образованием ВНА. Исключение представляет прежде всего вирус АЧС. Инфицирование этим вирусом не индуцирует у животных синтез ВНА, хотя в сыворотке крови выявляют КСА, ПА и типоспецифические задерживающие ГА AT. Отсутствие ВНА обусловливает неспособность организма связывать и элиминировать вирус, что, в свою очередь, приводит к исключительно высокой летальности инфицированных животных. С другой стороны, отмеченный парадоксальный феномен сводит на нет попытки создания эффективной вакцины, поскольку аттенуированные штаммы вируса вызывают у свиней хроническое течение болезни и длительное вирусоносительство, что весьма опасно в эпизоотологическом отношении.

Вирус АЧС обладает отдельными характеристиками иридо - и поксвирусов. Является единственным представителем уникального семейства. ДНК кодирует свыше 100 полипептидов, из которых более 30 обнаружено в препаратах очищенного вируса. С вирионами ассоциированы ряд ферментативных активностей, в том числе Д Н К-за-висимая РНК-полимераза, фосфатогидролазная активность, а также протеинкиназа и кислая фосфотаза. ДНК-зависимая РНК-полимераза расположена на периферии капсида, а АТФ-гидролаза — между капсидом и нуклеоидом. Капсид образуют, в основном, полипептиды с мол. м. 73 и 37 кД. С капсидом ассоциирована и ДНК-зависимая РНК-полимераза, участвующая в начальных стадиях репродукции вируса. ДНК представляет двухнитчатую структуру мол. м. 100-106 Д, состоящую из 170 тыс. п. о. длиной 58 нм с ковалентными концевыми сшивками в виде инвертированных повторов величиной 2,7 тыс. п. о.

Вирус АЧС имеет 20-гранную форму, величина его 175—215 нм, покрыт двухслойной липопротеиновой оболочкой, имеющей антигенное родство с тканями хозяина. Далее располагается трехслойный капсид из периодически размещенных капсоме-ров, внутри находится нуклеопротеид из плотных фибрилл, содержащих ДНК. Поверхностная оболочка и капсид содержат большое количество липидов. ДНК вируса АЧС шт. BA71V имеет длину 170101 п. о. и 151 открытую рамку считывания. Секвени-рование ДНК показало, что вирус АЧС занимает промежуточное положение между поксвирусами и иридовирусами и принадлежат к независимому семейству вирусов. Под действием рестриктазы ЕСо-R-l выявлено 28 фрагментов ДНК (величина 0,3—21,9 кД), что составляет 96 % всей молекулы, а другими рестриктазами -11—50 фрагментов (0,3—76,6 кД). Получена экспрессия 16 фрагментов ДНК в E. coli, методом молекулярной гибридизации определено местонахождение 80 сайтов и составлена карта расположения фрагментов. Выявлены различия между отдельными изолята-ми и вариантами вируса, а также механизм и последовательность синтеза вирусспеци-фических белков, их роль в патогенезе болезни.

В составе вирионов и инфицированных клеток установлено 28—37 вирусспецифи-ческих белков по другим данным, зарегистрировано 100 структурных и 162 неструктурных вирусспецифических белков м. м. 11,5—245 кД. Выявлены мажорные полипептиды (172, 73, 46, 36, 15, 12 кД), ранние и поздние белки, гликопротеиды (54, 34, 24, 5, 15 кД), установлена связь с AT 25 белков. Считают, что ранние белки синтезируются с концевых участков ДНК, а поздние — с центральной ее части. Вирус специфические белки в инфицированных клетках расположены следующим образом: в мембранных белках — 220, 150, 24, 14, 2 кД, в виропластах — 220, 150, 87, 80, 72, 60 кД, в ядре клетки — 220, 150, 27 кД. Установлен определенный порядок местонахождения отдельных белков в вирионе (начиная с поверхности) — 24, 14, 12, 72, 17, 37 и 150 кД. Построены физические карты ДНК вирулентного штамма вируса АЧС К-73 (2-й серотип) и выделенного из него авирулентного варианта КК-262, адаптированного к культуре клеток почки поросенка (ППК-666). Каждый штамм имеет свою, отличающуюся от других физическую карту ДНК при наличии определенного сходства. Белки 32 и 35 кД обладают штаммоспецифичностью. В составе вириона выявили ДНК-полимеразу, протеинкиназу и другие ферменты, которые необходимы для раннего синтеза вирусспецифических структур.

Вирус АЧС неоднороден. Он представляет собой гетерогенную популяцию, состоящую из клонов, отличающихся по признакам гемадсорбции, вирулентности, инфекционное™, бляшкообразования и антигенным свойствам. По биологическим свойствам вирус, используемый для экспериментального заражения свиней, отличается от изолятов вируса, выделенных позднее от этих же свиней. В 1991 г. опубликовано сообщение о современных данных по архитектуре морфогенеза и распределению структурных полипептидов в вирионе АЧС. На основании общего плана строения вируса АЧС, локализации виропластов в инфицированных клетках, вирус был отнесен к группе иридовирусов. P. M. Чумак высказал гипотезу о гибридном происхождении вируса АЧС, предками которого явились вирусы группы оспы и один из иридовирусов насекомых. По мнению автора, этот вирус должен быть выделен в отдельное семейство, куда позднее будут отнесены и другие вирусы.

А. Д. Середа и В. В. Макаров идентифицировали изолят-специфический гликопеп-тид вируса АЧС. В составе оболочек очищенных вирионов вируса АЧС обнаружены три гликозилированных полипептида с мол. м. 51, 56, 89 кД и три радиомаркирован-ных монохромных оболочечных компонента с мол. м. 9, 95, 230 кД, биохимическая природа которых не выяснена. Пять вирусиндуцированных гликозилированных полипептидов с мол. м. 13, 33, 34, 38, 220 кД идентифицировано в инфицированных вирусом АЧС клетках Vera. Полипептид (110—140 кД), по-видимому, имеет прямое отношение к ГАд АГ, о существовании которого ранее судили лишь по феномену ГАд. Авторы показали, что олигосахаридные белки составляют около 50 % массы гликози-лированного полипептида (110—140 кД). Липидный состав вируса АЧС зависит от клеточной системы культивирования.

Рестрикционным анализом и перекрестной гибридизацией фрагментов рестрикции показано, что геном изолята САМ/82 вируса АЧС не изменяется при пассировании на свиньях (в течение 20 пассажей) и в культуре клеток костного мозга свиньи (в течение 17 пассажей). Геном вируса АЧС достаточно стабилен при передаче вируса в естественных и экспериментальных условиях. Сопоставление данных физического картирования и биологических свойств штаммов вируса АЧС позволило предположить, что в левом концевом регионе локализуются участки ДНК, имеющие непосредственное отношение к таким проявлениям фенотипа вируса как вирулентность и им-муногенность. Такое предположение основывается на том, что у авирулентных штаммов наблюдается утрата большого участка ДНК именно в этом регионе, в то время как у природных изолятов протяженность левой концевой области гораздо значительнее. На основании полученных результатов построены физические карты геномов рефе-ренс-штаммов ВАЧС всех 4 серотипов и проведена паспортизация вакцинных штаммов, что позволяет в дальнейшем контролировать возможные изменения генома. С использованием праймеров, комплементарных нуклеотидным последовательностям структурного гена белка VP2 ВАЧС разработана тест-система для идентификации ВАЧС методом ПЦР. Открытая рамка считывания B438L, расположенная на фрагменте EcoRI-L генома вируса африканской лихорадки свиней (ВАЛС), кодирует белок длиной 438 остатков с мол. м. 49,3 кД, имеющий мотив RGD прикрепления к клеткам и не гомологичный белкам из баз данных. Ген B438L транскрибируется только на поздней стадии заражения ВАЛС. Белок экспрессировали в Escherichia coli, очистили и использовали для получения кроличьей антисыворотки, которая узнает белок с мол. м. 49 кД в зараженных ВАЛС клетках. Этот белок синтезируется на поздней стадии заражения всеми изученными штаммами ВАЛС, расположен в цитоплазматических вирусных фабриках и является структурным компонентом очищенных вирионов ВАЧС.

Геномы изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенные в Камеруне в 1982—1985 гг., неразличимы поданным рестрикционного анализа. ИзолятСАМ/87 незначительно отличается от изолятов 1982—1985 гг. Однако, в ДНК изолята САМ/86 с помощью 4- рестриктаз в 2- фрагментах (внутри правого концевого региона и в центральном районе) обнаружены значительные отличия.

Устойчивость. Вирус АЧС исключительно устойчив в широком диапазоне температур и рН среды, включая высушивание, замораживание и гниение. Он может оставаться жизнеспособным в течение длительного времени в фекалиях, крови, почве и на различных поверхностях — деревянных, металлических, кирпичных. В трупах свиней инактивируется не раньше чем через 2 месяца, в кале — в течение 16 дней, в почве — за 190 дней, а в холодильнике при -30—60 °С — от 6 до 10 лет. Солнечные лучи независимо от инфицированных объектов (бетон, железо, дерево) полностью инактивируют вирус АЧС (шт. Долизи-74) через 12 ч, а шт. Мфути-84 — через 40—45 мин. В условиях свинарника при 24 °С естественная инактивация вируса (шт. Долизи-74) происходила за 120 дней, а шт. Мфути-84 — за 4 дня. Оптимальным для дезинфекции инфицированных помещений оказался 0,5 %-ный раствор формалина. Замораживание не влияет на биологическую активность вируса, но является начальной стадией повреждения генома. Вирус с перколом устойчив к действию ДНК-азы после замораживания при -20 °С и -70 °С и повреждается при (50 °С. Высушивание вируса без стабилизатора вызывает потерю его инфекционности. В мясе инфицированных свиней и копченых окороках он сохраняется 5—6 месяцев.

Продолжительную устойчивость возбудителя в крови, экскретах и трупах учитывают при планировании ветеринарно-санитарных мероприятий. Поскольку вирус сохраняет жизнеспособность в инфицированных свинарниках в течение 3 месяцев, именно этому сроку соответствует экспозиция, после которой разрешается завоз новой партии свиней. На устойчивость вируса влияют состав и рН среды, в которой он суспендирован, содержание белка и минеральных солей, степень гидратации, природа исследуемого вируссодержащего материала. При 5 °С он сохраняет активность в течение 5—7 лет, при хранении в условиях комнатной температуры — до 18 месяцев, при 37 °С -10—30 дней. При 37 °С инфекционность его снижалась на 50 % в течение 24 Ч В среде с 25 % сыворотки и в течение 8 ч в среде без сыворотки. При 56 "С небольшое количество вируса сохраняло инфекционность более 1 ч, поэтому применяемой на практике 30-минутной инактивации сыворотки при 56 °С недостаточно для разрушения возбудителя. При 60 °С он инактивировался в течение 20 мин. Вирус исключительно устойчив как в кислой, так и в щелочной среде. Большинство дезинфицирующих веществ (креолин, лизол, 1,5 %-ный раствор NaOH) не инактивирует его. Наибольшее вирулицидное действие на него оказывают хлорактивные препараты (5 %-ный раствор хлорамина, гипохлориты натрия и кальция с 1—2 % активного хлора, хлорная известь) при 4-часовой экспозиции. Гидроксид натрия в виде 3 %-ного раствора рекомендуется при дезинфекции только в горячем виде (при температуре 80-85 °С). При дезинфекции особое внимание обращают на тщательную механическую очистку и промывание горячей водой, так как органические вещества навоза могут снижать эффективность дезинфекции.

АГ структура. Она у вируса сложная. Возбудитель содержит групповые КС-, пре-ципитирующий и типовой ГАд антигены. Обнаружены ДНК-связывающие белки, в числе которых имеются мажорные и минорные с мол. м. от 12 до 130кД. Общее число их достигает 15, из них 7 являются структурными. Протеины Р14 и Р24 расположены по периферии вириона, а Р12, Р17, Р37 и Р73 — в промежуточном слое; обнаружен протеин Р150 — мажорный вирусный протеин, который расположен в нуклеоиде или в одной из вершин (углов) вириона. Во всех эукариотических клетках имеется особый белок, состоящий из веществ аминокислотных остатков и ковалентно-связанный с различными клеточными белками (например гистоном). Такая связь обеспечена убиквитин-конфигурирующим ферментом УБС. Один из белков, кодируемых вирусом АЧС, способен активировать убиквитин.

Вопросы о сущности инфекционного АГ, индуцирующего образование ВНА, остается до сих пор открытым. Иначе вопрос обстоит с АГ, индуцирующими образование AT, задерживающих гемадсорбцию. Сыворотки с анти-ГАд свойствами широко используются всеми исследователями, изучающими проблему АЧС. Полипептиды с мол. м. 120, 78, 69, 56, 45, 39, 28, 26, 24, 16 и 14 кД наиболее интенсивно выявляются на электрофореграммах и иммуноблотограммах препаратов очищенного вируса АЧС. Смесь протеаз и панкреатической липазы в низких концентрациях удаляет из этих препаратов полипептиды с мол. м. 120 и 78 кД, в средних концентрациях — полипептиды с мол. м. 69, 56, 45, 39, 28 и 14 кД, в высоких концентрациях — полипептид с мол. м. 26 кД. Полипептид с мол. м. 21 кД, не реагировавший в иммуноблоте со специфической антивирусной сывороткой, был устойчив к совместному действию протеаз и липазы. Обработка вируса тритоном Х-100 и эфиром приводила к повышению активности вирусассоциированной ДНК-зависимой РНК-полимеразы, а обработка эфиром и последующее переосаждение — к значительному снижению активности в осажденном препарате. Обработка вируса эфиром не влияла на его активность. На основании полученных результатов и данных литературы предложена схема расположения вирусных полипептидов и ферментов в структуре вириона.

АГ вариабельность и родство. На основании задержки гемадсорбции выделено две АГ А - и В-группы (типы) и одна подгруппа С вируса АЧС. В пределах А-, В-групп и С-подгруппы выявлено много серотипов этого возбудителя. Две генетические группы (САМ/88 и САМ/86) вируса африканской чумы свиней, выделенные в Камеруне, вызывают сходные клинические признаки и повреждения у домашних свиней. Через 3—6 дней после заражения развивается лихорадка, потеря аппетита, вялость, потеря координации, дрожь, диарея и одышка. Наблюдается гиперемия легких и появление геморрагии в почках и висцеральных лимфатических узлах. Титры вируса у свиней, зараженных изолятами разных групп, статистически не различались.

С помощью иммунопробы и РЗГА установлено по 7 референс-штаммов каждой группы: Л-57; Л-60; Хинде-2; Родезия; Дакар; 2743; Мозамбик. К референс — штаммам отнесены — шт. Хинде; N 2447; 262; Магади; Спенсер; Л-60 и Родезия. Методом иммуноблоттинга с монАТ выявлено 6 групп, а рестрикционным анализом — 4 группы и 3 подгруппы. Это референс-шт. Уганда, Спенсер, Тенгани, Ангола, Л-60, Е-75. Имеются сообщения о высокой изменчивости вируса АЧС по антигенности, вирулентности и другим свойствам, а также о существовании смешанных популяций его, которые трудно поддаются аттенуации. На примере шт. Керовара-12, выделенного от бородавочника в Танзании, показана типовая гетерогенность популяции АЧС. Особенности вируса взаимосвязаны с патологическим и иммунологическим процессами в организме зараженных свиней. Большинство изолятов, выделяемых во время эпизоотии от домашних свиней в Африке, имели различные ГА АГ. Изоляты, пассируемые in vivo в макрофагах свиней, изменяются быстрее и глубже, чем при пассировании в клетках Vero. В африканских изолятах наиболее вариабельными протеинами оказались Р150, Р27, Р14и Р12, в неафриканских изолятах — Р150и Р14, протеин Р12 не изменяется, а Р72 — главный АГ — при диагностике с помощью EL1SA оказался стабильным. АГ различия между штаммами вируса АЧС невозможно определить с помощью твердофазного ИФА, РДП и ИЭОФ, так как этими методами выявляются лишь общие для всех штаммов вируса АЧС АГ. Это удается сделать лишь методом истощения культурального АГ вируса АЧС гетеротиповой сывороткой. Как видно из приведенных выше фактов, серологический и иммунологический плюралитет вируса АЧС — один из основных его свойств.

Локализация вируса. Вирус обнаруживают во всех органах и тканях больных животных. В крови он появляется во время первоначального повышения температуры и обнаруживается там до гибели животного в титрах от 103 до 108 ГАд5о/мл - При хроническом течении болезни титр вируса в крови быстро снижается, виремия носит прерывающийся характер. При отсутствии виремии он может долго (до 480 дней) сохраняться в селезенке и лимфоузлах. Точная локализация вируса при латентном течении болезни не установлена. В первоначально инфицированных органах (лимфоид-ная ткань в области глотки) вирус сохранялся в титре около 107 ГАД50Л до гибели животного. Наивысшие титры его (10s) наблюдали в тканях, содержащих большое количество ретикулоэндотелиальных элементов: селезенке, костном мозге, печени, что согласуется с выявлением в этих тканях значительных поражений. Первичным местом локализации вируса являются миндалины. Присутствие его в лейкоцитах с 1 - го дня инфекции свидетельствует о том, что возбудитель заносится в другие ткани лейкоцитами. Появление вируса в селезенке и костном мозге через 2 дня и быстрое повышение титра вируса в этих тканях дает основание полагать, что они являются местом вторичного размножения возбудителя.

Из организма зараженных животных вирус выделяется с кровью, носовыми экскретами, фекалиями, мочой, слюной и, вероятно, через легкие с выдыхаемым воздухом. У большинства выживающих животных вирусоносительство практически пожизненное. Периодически вирус может быть выделен из крови, лимфоузлов, легких, селезенки. Из других тканей выделение его затруднительно. Вирусовыделение наступает на 2—4-й дней после появления лихорадки. Стресс-факторы способствуют обострению инфекции и выделению вируса во внешнюю среду. При этом сезонность ви-русовыделения связана с опоросами. В клещах Ornithodoas вирус АЧС размножается в кишечнике и затем распространяется в слюнные железы и репродуктивные органы. Клещи могут оставаться персистентно инфицированными и передавать вирус в течение 3 лет; наряду с бородавочниками они создают перманентный резервуар вируса для домашних свиней. Клещи способны передавать его трансовариально и трансфа-зово. Концентрация вируса в клещах выше, чем у свиней-вирусоносителей.

АГ активность. В сыворотках реконвалесцентов появляются преципитируюшие КС и задерживающие ГАд AT, не влияющие на ЦПД вируса. ПА и КСА не являются типоспецифическими, они общие для всех шт., тогда как AT, задерживающие РГАд, строго типоспецифичны и используются для типирования вируса АЧС. КСА и ПА не связаны с образованием иммунитета. ВНАне образуются, но в защите действует опосредованный AT механизм. Эти антитела активны в двух системах: A) In Vitro антиите-ло зависимой клеточной цитотоксичности; б) комплементзависимом лизисе. Сыворотки животных-реконвалесцентов специфически задерживают ГАд в культурах, инфицированных гомологичным вирусом АЧС. Титр таких AT достигает максимума через 35—42 дня после клинического выздоровления животных. Вирус АЧС не вызывает формирование ВНА и гуморальные компоненты иммунной реакции не имеют большого значения. Неспособность вырабатывать ВНА против вируса АЧС, вероятно, обусловлена свойствами самого возбудителя.

Взаимодействие вируса с AT. Одна из причин недостаточной изученности иммунологии АЧС — отсутствие нейтрализации вируса AT — главного свойства других вирусов, составляющих традиционную основу изучения их иммуногенности со времени открытия серологических реакций. В этом отношении существует только один зоопа-тогенный аналог — парвовирус алеутской болезни норок, но известна также низкая способность к нейтрализации типичных представителей иридовирусов. Было предпринято много попыток изучения этого уникального феномена, но удовлетворительного объяснения до сих пор не предложено; версий много — от отсутствия вирион-ных гликопротеинов до антигенной мимикрии и гетерогенности. В стремлении выяснить данный вопрос авторы поэтапно исследовали результаты взаимодействия вируса с AT, вируса с чувствительными клетками в культуре и комплекса вирус+АТ с чувствительными клетками. Показано, что иммунный комплекс (АГ+АТ) беспрепятственно проникает в чувствительные клетки, и вирус сохраняет исходную репродуктивную активность. При АЧС нейтрализация вируса in vitro сопровождается противоположным эффектом — усилением вирусного размножения и экстенсивной патологией за счет распространения инфицированных моноцитов-макрофагов.

Вопрос взаимодействия вируса АЧС с AT нуждается в дальнейшем экспериментальном изучении. У серопозитивных аборигенных животных в крови обнаруживаются специфические КСА и ПА в титрах до 1:128 и 1:64 соответственно. Специфические AT в крови поросят появляются только после приема молозива от серопозитивных свиноматок. Уровень AT в молозиве был равен или превышал концентрацию их в крови.

Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению невосприимчивы кошки, собаки, мыши, крысы, кролики, куры, голуби, овцы, козы, КРС и лошади. У экспериментально зараженных аргасовых клещей Ornithodoros turicata вирус выявляли методом биопробы в течение года. В кишечнике клеща установлено наиболее раннее и длительное присутствие вируса. Быстрое распространение его и репликация в других тканях происходит посредством гемолимфы. Уже через 24 ч после заражения. с помощью МФА выявляли АГ. Через 2—3 недели вирус обнаруживали в ге-моцитах, а к 6—7-й неделе — в большинстве тканей.

Культивирование. Для культивирования вируса АЧС могут быть использованы подсвинки 3—4-месячного возраста, которых заражают любым способом. Чаще заражают внутримышечно в дозе 104—106 ГАд50- При развитии клинических симптомов болезни на 4—6-е сутки после заражения животных убивают и в качестве вируссодержашего материала используют кровь и селезенку, в которых вирус накапливается в титре 106"8 ГАд50. Попытки культивировать вирус АЧС в организме других видов животных успеха не имели.

К вирусу чувствительными оказались культуры лейкоцитов крови и макрофагов костного мозга свиней. Обычно заражают клетки на 3—4-й день роста в дозе 103 ГАД вируса на 1 мл питательной среды. Через 48—72 ч он накапливается в культурах клеток в титре JO6-7 5 ГАД 50/мл - Вирус АЧС инфицировал большинство макрофагов (моноцитов), если не все, то только около 4 % Полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови. В - и Т-лимфоциты, находящиеся в стадии покоя или стимулированные ФГА, липосахаридом или митогеном из фитолакки американской, не обладают чувствительностью к вирусу. Последний реплицируется исключительно в макрофагах, и в наивысших титрах содержится в эритроцитах свиней. Он проникает в клетку главным образом рецепторнезависимым путем, репликация его происходит в цитоплазме, но для синтетических процессов необходимо участие ядра. Возможно заражение более чем одной частицей вируса, что предполагает наличие нескольких его субпопуляций в одной клетке и их взаимодействие. Число клеток, содержащих АГ на поверхности, спустя 13—14 ч достигает максимального уровня. Большое количество неиспользованного вирусспецифического материала, имеющего мембранную, цилиндрическую или эксцентрическую структуру, остается в зараженных клетках. Предполагается, что в их оболочках содержится ГАд АГ.

Вирус размножается в культурах лейкоцитов и костного мозга свиней с развитием ГАд и ЦПД без адаптации. При оптимальной дозе заражения ГАд проявляется через 18—24 ч, ЦПД — через 48—72 ч и характеризуется образованием цитоплазматических включений с последующим вытеканием цитоплазмы и появлением многоядерных гигантских клеток (клеток-теней). Он проникает в клетки CV-1 или Vero адсорбционным эндоцитозом или эндоцитозом, опосредованным рецептором. «Раздевание» вирионов происходит в эндосомах или в других кислых внутриклеточных везикулярных органеллах. При инкубировании вируса АЧС с мононуклеарными клетками периферической крови свиней, он ингибирует пролиферативную реакцию лимфоцитов к фитогемагглютинину и другим лектинам. Полагают, что такое ингибирование индуцируется растворимыми фракциями, которые освобождаются периферическими мононуклеарными клетками после совместного инкубирования с вирусом. ГАд вируса в зараженных культурах настолько специфична, что используется в качестве основного теста в диагностике болезни. В других видах культур клеток вирус без предварительной адаптации не размножается. Он адаптирован к ряду гомо - и гетерологичных культур: перевиваемым линиям клеток почки поросенка (ПП и РК), почки зеленой мартышки (MS, CV), Vero-клеткам почки макаки и др. В литературе мало уделяется внимания влиянию углеводных компонентов, которые могут составлять от 50 до 90 % массы гликопротеидов, на иммуногенность вируса: одной из причин слабой иммуно-генности оболочечного гликопротеида (gp 120) вируса иммунодефицита (ВИЧ) является то, что 50 % Его массы обусловлено «атмосферой» Сахаров, которая может играть негативную роль, препятствуя, например, доступу AT к сайту фиксации на оболочке ВИЧ, т. е. жизненно важные участки ВИЧ «химически» защищены от действия иммунной системы. Не исключено, что причиной не нейтрализуемое™ вируса АЧС может быть наличие высокогликозилированных белков на поверхности вирионов. О сосуществовании гликозилированных компонентов неизвестной природы в оболочке вирионов АЧС сообщалось Мюдель Вал и др. в 1986 г.

Наличие таких компонентов на мембранах клеток также может способствовать «ускользанию» от других эффекторных механизмов иммунной системы хозяев и повышать его патогенность. Изучение субклеточной локализации и активности транспре-нилтрансферазы вируса АЧС в инфицированных клетках показало, что фермент является интегральным мембранным белком и проявляет геранилгеранилдифосфатсинтаз-ную фенилтрансферазную активность в мембранных фракциях, в 25 раз увеливаление образование геранилгеранилдифосфата в инфицированных клетках. Таким образом, связанный с мембраной белок синтезирует преимущественно транс-ГГДФ-синтетазу. Особенности репродукции. Методами гибридизации in situ, авторадиографии и электронной микроскопии изучена ультраструктурная организация репликации ДНК Вируса АЧС в зараженных клетках Vera. На ранней стадии синтеза вирусной ДНК она образует плотные очаги в ядре рядом с ядерной мембраной, а на более поздней стадии находится исключительно в цитоплазме. Методом седиментации в щелочном градиенте концентрации сахарозы показано, что на ранней стадии в ядре находятся маленькие фрагменты ДНК (=6—12 S), а на более поздней стадии в цитоплазме метятся более длинные фрагменты (=37—46 S). Импульсное мечение показало, что эти фрагменты являются предшественниками зрелой сшитой вирусной ДНК.

На промежуточной и поздней стадиях обнаружены формы «голова-к-голове». Эти данные позволяют предположить, что репликация ДНК вируса АЧС идет по механизму старта de novo с синтезом коротких фрагментов ДНК, которые затем превращаются в длинные фрагменты. Лигирование или элонгация этих молекул дают двухеди-ничные структуры с димерными концами, которые могут порождать геномную ДНК В результате образования сайт-специфического однонитевого разрыва, перестроек и лигирования. Биохимические методы анализа сборки капсида вируса АЧС, сборки и образования оболочки использованы для изучения клеточных процессов, важных для окутывания вируса мембранными цистернами. Сборка капсида ВАЧС на мембранах эндоплазматического ретикулума (ЭР) и окутывания цистернами ЭР ингибиру-ются при исчерпании АТФ или кальция в результате инкубации с А23187 и ЭДТА или с таксигарпином — ингибитором кальциевой АТФазы ЭР. Методом ЭМ показано, что клетки, истощенные по Са, не могут собирать икосаэдрические частицы ВАЧС. Вместо этого места сборки содержат гребневидные или луковицевидные структуры, в редких случаях — пустые замкнутые 5-угольные структуры. Вербовка капсидного белка ВАЛС из цитозоля на мембраны ЭР не требует АТФ или резервного фонда Са2+. Однако последующие стадии сборки капсида и образования оболочки зависят от АТФ и регулируются градиентом Са2+ в мембранных цистернах ЭР.

ГА и ГАд свойства. ГА свойствами вирус не обладает. При размножении его in Vitro в культурах лейкоцитов или клетках костного мозга свиней наблюдают явление адсорбции эритроцитов на поверхности пораженных клеток. Эритроциты прикрепляются к стенке лейкоцита, образуя вокруг него характерный венчик и иногда закрывая клетку со всех сторон, вследствие чего пораженные лейкоциты внешне напоминают тутовую ягоду. Время появления ГАд зависит от инокулируемой дозы вируса и может проявиться уже через 4 ч, но в большинстве случаев — через 18—48 ч, а при низких титрах вируса — через 72 ч. С увеличением времени инкубации число пораженных клеток возрастает, затем они начинают просветляться, и проявляется ЦПД вируса. Чувствительность РГАд зависит от свойств вируса и степени его накопления в инфицированной культуре клеток. Она выявляется под световым микроскопом при достижении титра инфекционности в культуре не ниже 104 ЛД5о/мл - По мнению отдельных авторов, время наступления ГАд зависит от титра вируса в исследуемой пробе материала. Снижение титра вируса АЧС влечет за собой снижение чувствительности РГАд. В связи с этим, в ряде случаев возникает необходимость проведения до трех последовательных серийных «слепых» пассажей вируса в культуре лейкоцитов или костного мозга, чтобы подтвердить наличие его в исследуемом материале в случае ГАд варианта.

Иногда выделяются негемадсорбирующие штаммы вируса, обладающие только выраженными цитопатогенными свойствами. При пассировании их в культуре клеток не менее 50 раз и заражении свиней гемадсорбция не восстанавливалась. В ЮАР выделили негемадсорбирующий штамм от домашних свиней при естественной эпизоотии. Позднее там был выделен негемадсорбирующий вариант из суспензий клещей О. moubata, собранных в очагах инфекции.

Так как специфическая ГАд характеризует вирулентность штаммов АЧС, выделение менее вирулентных негемадсорбирующих вирусов от свиней с хронической пневмонией представляет большой интерес. Однако отдельные негемадсорбирующие изо-ляты или клоны могут быть высоковирулентными. Механизм реакции ГАд, а также локализация ответственных за ГАд АГ не установлены. Важна роль внешних мембран вирионов в связывании их с эритроцитами, так как вирионы, не имеющие оболочек, на эритроцитах не адсорбируются. Антигены, которые принимают участие в ГАд, локализованы в оболочках вирионов, происходящих из цитоплазматических мембран клеток хозяина.

Источники и пути передачи инфекции. Главный источник инфекции — больные и павшие свиньи. Переболевшие животные остаются длительное время носителями и выделителями вируса. Заражение происходит непосредственно при контакте больных свиней со здоровыми (через поврежденные слизистые оболочки, кожные покровы, алиментарно и, вероятно, через дыхательные пути) и опосредованно — через мясо, мясопродукты, внутренние органы, кровь, мочу, фекальные массы и т. д. от павших и убиваемых больных свиней; через предметы ухода, обслуживающим персоналом, домашними и дикими животными, птицами, кожными паразитами и насекомыми, которые были в контакте с больными и павшими свиньями.

АЧС при первичном проявлении обычно протекает остро и подостро с гибелью до 97 % свинопоголовья. В изолированных хозяйствах в тропических условиях причиной возникновения вторичных очагов являются переболевшие свиньи — скрытые носители возбудителя. Так, вирус АЧС в Конго циркулирует среди местных животных в виде трудно обнаруживаемой негемадсорбирующей популяции, не вызывая каких-либо видимых симптомов болезни и создавая положительный иммунный фон у местных свиней. Эпизоотологическое обследование местного свинопоголовья свидетельствует о том, что в определенных условиях аборигенные домашние свиньи, как резервуар вируса в природе, играют существенную роль в эпизоотологии АЧС. У серопози-тивных аборигенных животных в крови обнаруживаются специфические КСА и ПА в титрах до 1:128 и 1:64 соответственно.

С целью изучения формирования пассивного иммунитета проведены опыты с поросятами различного возраста, полученными от серопозитивных животных. В крови не родившихся плодов, а также безмолозивных поросят, специфические AT отсутствовали. Также не был выделен вирус от указанных животных. Специфические AT в крови поросят появились только после приема молозива от серопозитивных свиноматок. Прослежена динамика специфических AT в крови 82 поросят от серопозитивных свиноматок в течение 5-месячного периода. При контрольном заражении 2—5 месячных поросят, в крови которых обнаруживались КСА и ПА в титре 1:16—1:32 и 1:2—1:4 соответственно, все животные пали с клиническими признаками АЧС. Находящиеся с ними в контакте серопозитивные поросята того же возраста оказались устойчивыми к заражению.

Вирус АЧС может персистировать как в организме восприимчивых свиней, так и in vitro в культуре клеток. В условиях Африки домашние свиньи могут инфицироваться посредством контакта с дикими бородавочниками (Phaco choerus) и кустарниковыми свиньями (Patomochoerus), у которых он вызывает латентную инфекцию. Аргасовые клещи О. moubata porcinus — естественный резервуар и переносчик вируса АЧС. Клещи орнитодорины (переносчики вируса АЧС) могут жить 9 лет, вирус АЧС долго сохраняется в их популяции. O. turicata обнаружены в Северной Америке в штатах Ута, Колорадо, Канзас, Оклахома, Техас, Нью-Мехико, Аризона, Калифорния и Флорида. Клещи могут мигрировать на 8 км от места обитания. Помимо O. turicata, вирус АЧС может переноситься еще гремя видами клещей: О. puertoriceusis, О. tolaje, О. dugersi.

Установлены устойчивость вируса в мертвых клещах, а также размножение и пер-систирование его у 70—75 % клещей в течение 13—15 месяцев. Членистоногие получают вирус при кровососании больных животных в период виремии. Вирус размножается в членистоногих, у которых длительный период персистенции, и, наконец, клещи его передают здоровым свиньям в процессе кормления. Вирус АЧС был выделен из коксальной жидкости, слюны, экскретов, мальпигиевых сосудов и экссудата половых органов у естественно и экспериментально инфицированных клещей, а также из яиц и нимф первой стадии инфицированных самок. Таким образом, у этого вида клещей возможна трансовариальная и трансспермальная передача вируса. Это способствует поддержанию и циркуляции вируса в популяции даже при отсутствии регулярных контактов переносчиков с инфицированными животными. Достаточно агента однажды занести в популяцию клещей, и возникает его циркуляция независимо от контакта этой популяции с чувствительными животными в дальнейшем. В связи с большой продолжительностью жизни клещей (10—12 лет) очаг болезни в случае его возникновения может существовать неопределенно долгое время. В местностях, где это произошло, возможность искоренения АЧС представляется сомнительной.

Таким образом, основной путь быстрого распространения возбудителя и возникновения новых вспышек болезни, вероятно, алиментарный. Респираторный путь способствует распространению его в пределах эпизоотического очага, а трансмиссивный — созданию стойких природных очагов. В связи с тесными биологическими взаимоотношениями вируса и аргасовых клещей природный очаг может существовать без повторных заносов вируса неопределенное время. Хотя штамм Malawi Lil20P (MAL) вируса АЧЛ был выделен из клещей Ornithodorus sp., попытки экспериментально заразить этих клещей скармливанием штамма MAL оказались неудачными. 10 популяциям клещей О. porcinus porcinus и одной популяции клещей О. porcinus domesticus давали с пищей ВАЛС MAL. Через 10 дней после заражения меньше 25 % клещей содержали ВАЧС. У более 90 % клещей ВАЛС не обнаруживался через 5 недель после инокуляции. При оральной инокуляции ВАЧС MAL клещам О. porcinus porcinus титр ВАЛС понижался в 1000 раз через 4—6 недель и становился ниже предела обнаружения. Однако после инокуляции изолята ВАЛС Pretoriuskop/90/4/l (Рг4) титр ВАЛС увеличивался в 10 раз через 10 дней и в 50 раз через 14 дней. В средней кишке клещей, инокулированных ВАЧС, обнаружена экспрессия ранних, но не поздних вирусных генов и не наблюдается синтез ДНК ВАЧС.

Вирионы потомства редко присутствуют у клещей после оральной инокуляции ВАЛС. Если же они присутствуют, то они ассоциированы с сильной цитопатологией фагоцитарных эпителиальных клеток средней кишки (ЭКСК). При парентеральном введении ВАЛС MAL в гемоцеле устанавливается персистентная инфекция, но наблюдается задержанная генерализация MAL, и его титр в большинстве тканей в 10—1000 раз ниже, чем при заражении ВАЛС Рг4. Ультраструктурный анализ показал, что ВАЛС MAL реплицируется во многих типах клеток, но не в ЭКСК а ВАЛС Рг4 может реплицироваться в ЭКСК. Таким образом, репликация ВАЛС MAL ограничена в ЭКСК клещей.

АЧС на Мадагаскаре подтверждена с помощью ПЦР и нуклеотидного секвенирования после изоляции вируса. После инокуляции лейкоцитов не наблюдалось гемадсорбции или ЦПД, но размножения вируса в клетках подтверждалось с помощью ПЦР. Определение вирусного генома АЧС проводилось амплификацией высококон-вертированного участка, кодирующего белок р72. Обнаружено 99,2 % идентичности между штаммами Maladasi и вирусом, выделенным в 1994 г. при вспышке в Мазамби-ке. Серологические исследования проводились на 449 образцах сывороток, в результате найдено, что только 3—5 % сывороток, выделенных от свиней между 1996 и 1999 гг. были позитивными.

В естественных условиях африканской чумой болеют домашние и дикие свиньи. У некоторых диких африканских свиней болезнь протекает субклинически. Такие животные представляют большую опасность для свиней культурных пород. В природе существует замкнутый круг циркуляции этого вируса между дикими свиньями-ви-русоносителями и клещами (род Ornithodorus). Вирус АЧС представляет гетерогенную популяцию, состоящую из клонов, обладающих разными биологическими характеристиками в отношении ГАд, вирулентности, инфекционности, размеров бляшек, АГ свойств. Вирулентность изолята определяется вирулентностью доминирующего в популяции клона, а не количеством введенного вируса. Пассирование изолятов вируса АЧС на свиньях и в культуре клеток Vero может привести к изменению соотношения разных клонов в вирусной популяции и изменению всех ее характеристик. Культуральные и вирулентные свойства возбудителя АЧС подвергаются модификации в процессе естественного течения эпизоотии и при экспериментальной селекции. Культуральные и вирулентные свойства вируса АЧС чрезвычайно лабильны: он может утрачивать ГА способность, снижать вирулентность, вплоть до полной ее утраты, в процессе естественной эволюции эпизоотии и в эксперименте при пассировании в тканевых культурах.

Иммунитет и специфическая профилактика. В патогенезе и иммуногенезе АЧС аллергические или аутоаллергические реакции играют существенную роль. При действии аттенуированных штаммов вируса на лимфоидные клетки происходит синтез неполноценных AT, неспособных нейтрализовать вирус. Образуются комплексы антиген-антитело, которые концентрируются в тканях органов-мишеней, приводя к нарушению их функций и развитию аллергических и аутоиммунных процессов; наблюдают стимуляцию клеточного иммунитета — лизис инфицированных клеток сенсибилизированными лимфоцитами, выделение медиаторов клеточного иммунитета: лимфо-токсина, фактора угнетения миграции бласттрансформации и др. Развитие этих процессов зависит от биологических свойств используемых штаммов и индивидуальных особенностей организма (состояние иммунной системы).

Определенную роль в патогенезе болезни играют взаимодействие вируса с эритроцитами и нарушение механизма свертывания крови. Влияние вируса на клетки лимфоидной системы и эритроциты характеризуется их разрушением или изменением функции, а также развитием аллергического и аутоиммунного процессов.

Переболевшие или привитые (инактивированным материалом или аттенуирован-ным вирусом) животные имеют определенную степень устойчивости к гомологичному изоляту вируса (задержка гибели свиней), изменение выраженности клинических признаков болезни, выздоровление и полное отсутствие реакции на контрольное заражение). Отсутствие специфической защиты против изолятов, выделенных в других зонах, свидетельствует об их АГ и иммунологических различиях.

С. Anderson наблюдал длительное носительство вируса и его приживление при повторном заражении у переболевших и привитых животных. Пассивный и колостральный иммунитет выражен слабо. AT недостаточно нейтрализуют вирус. Причины слабой напряженности иммунитета, а также нейтрализующей активности AT связывают с особенностями АГ структуры вируса (блокирование АГ липидами, конкуренция или маскировка протективных АГ видовыми АГ вируса или хозяина), а также с изменением функции лимфоидных клеток — нарушение взаимодействия вируса и АГс макрофагами и кооперации последних с Т - и В-лифоцитами. В пользу первого предположения свидетельствует слабый или измененный ответ на инактивирован-ные АГ препараты как у чувствительных, так и у других видов животных. В условиях низкой активности AT усиливаются реакции клеточного иммунитета, которые имеют существенное значение в блокировании инфекции, а также являются причиной развития гиперчувствительности замедленного типа, аллергических и аутоиммунных осложнений.

Процесс защиты при АЧС представляется в виде динамического равновесия между этиологическими факторами (вирусом) и механизмами иммунной защиты. Он может быть преобладающим как в том, так и в другом направлении, это зависит от свойств применяемых штаммов и состояния иммунной системы животного. Надежных профилактических препаратов против АЧС — нет. Получить инактивиро-ванные вакцины против АЧС классическими методами, используя современные методики, никому не удалось. Большинство привитых животных при контрольном заражении погибали и только незначительная часть их выживала после длительного переболевания. Результаты испытания инактивированной вакцины наводят на мысль, что основное значение в аномалии иммунитета при АЧС имеет структура АГ и их взаимодействие между собой, а не состояние иммунной системы макроорганизма.

Препараты из живого аттенуированного вируса были более эффективными, вызывая слабую поствакцинальную реакцию, они защищали от заражения гомологичным вирусом 50—90 % вакцинированных животных. Однако самые существенные недостатки живых вакцин — длительное вирусоносительство после прививки, развитие осложнений у части иммунных животных, приживление у вакцинированных животных вирулентного вируса без проявления клинических признаков болезни, что также опасно в практических условиях. Учитывая эти недостатки, поставлен под сомнение вопрос о применении живых аттенуированных вакцин для ликвидации очагов болезни в сочетании с другими ветеринарно-санитарными мероприятиями.

Множественность иммунологических типов возбудителя и существование смешанных или измененных популяций вируса значительно ограничивают возможности использования таких препаратов. Однако имеются сведения о подборе эффективных средств для лечения больных свиней и снятия вирусоносительства, которые можно применять в сочетании с аттенуированными штаммами вируса. В материалах совещания экспертов по АЧС Европейского экономического сообщества (1978—1987 гг.) и других сообщениях намечено развитие научных исследований, направленных на создание компонентных, химических и генноинженерных вакцин. С этой целью изучают тонкую АГ структуру возбудителя АЧС й инфицированных клеток, структуру и функции генетического материала, проводят поиск протективных АГ с использованием современных методов молекулярной биологии, генетики, монАТ. Эти направления могут привести к выработке новых подходов к созданию эффективных и безвредных вакцин против АЧС. Ген 9GL вируса АЧС гомологичен гену ERV1 дрожжей, участвующему в окислительном фосфорилировании и клеточном росте, и гену ALVc ге-патотрофной фракцией.

Ген 9GL кодирует белок длиной 119 остатков (I) и высококонсервативен у всех изученных полевых изолятов АЧС. Показано, что I является поздним белком ВАЧС. Мутант штамма MAL с делецией гена 9GL (A9GL) в 100 раз хуже размножается в макрофагах и образует мелкие бляшки по сравнению с родителем MAL. I влияет на нормальное созревание вирионов: 90—99 % вирионов в макрофагах, зараженных мутантом A9GL, имеет ацентричные нуклеоидные структуры. Смертность свиней равна 100 % при заражении штаммом MAL, а при заражении мутантом A9GL выживают все свиньи, причем у них наблюдается временная лихорадка. Все свиньи, зараженные мутантом A9GL, остаются клинически нормальными, и титр виремии у них понижен в 100—10 000 раз. Все свиньи, предварительно зараженные мутантом A9GL, выживают при последующем заражении летальной дозой ВАЧС MAL. Таким образом, мутант A9GL может быть использован в качестве живой аттенуированной вакцины ВАЛС.