Лабораторная диагностика смешанных респираторных болезней телят

Введение. Во многих областях Украины респираторные болезни телят, как правило, протекают по типу паразитоценозов, в состав которых входят вирусы, риккетсии, хламидии, микоплазмы, спирохеты, бактерии, грибы, простейшие и гельминты. В настоящее время, как отмечает В. М. Апатенко [1], микропаразитоценоз представляет наибольший интерес для заразной патологии, изучающей вирусные, бактериальные, зоопаразитарные болезни и ассоциативные заболевания смешанной этиологии.

Совокупность вирусных и бактериальных агентов при смешанной инфекции принято считать более опасным, способным принести большой ущерб организму больного животного по сравнению с моноинфекциями [2,3]. При взаимодействии двух или более возбудителей в организме животных возможно явление иммунодепрессии, т. е. угнетение иммунитета или наоборот - усиление иммунного ответа организма. Следовательно, при смешанных инфекциях иммунный ответ может быть сложным и по-разному влиять на течение болезни.

Таким образом, множественная этиология респираторных болезней телят способствует избирательной оценке относительного значения в патологии органов дыхания каждого инфекционного агента, при изучении которого необходимы комплексные исследования [4].

Целью Нашей работы было изучение лабораторных методов диагностики ПГ-3, ИРТ, аденовирусной инфекции и хламидиоза и проведение серологических исследований пробы сыворотки крови телят на наличие антител к вирусу ПГ-3 и возбудителю хламидиоза.

Материал и методы исследований. Исследования проводили в июне-июле 2008 года в ЧСП А/Ф "Зеленогорск" Белогорского района АР Крым, на кафедре эпизоотологии, паразитологии и ветсанэкспертизы ЮФ "КАТУ" НАУ и в вирусологическом отделе Крымской республиканской государственной лаборатории ветеринарной медицины.

Были изучены инструкции, наставления и методики по проведению лабораторной диагностики парагриппа-3, аденовирусной инфекции, инфекционного ринотрахеита и хламидиоза. В виду отсутствия наборов для диагностики ИРТ и аденовирусной инфекции, проводили исследования сывороток крови от телят на наличие антител к вирусу ПГ-3 и возбудителю хламидиоза.

Для опыта были отобраны 20 голов телят 4-месячного возраста с выраженными клиническими признаками заболевания органов дыхания. Исследование проб сывороток крови от больных телят на присутствие антител к вирусам парагриппа-3 и возбудителю хламидиоза проводили в вирусологическом отделе Крымской республиканской государственной лаборатории ветеринарной медицины в реакции задержки гемагглютинации и реакции длительного связывания комплемента соответственно. Сыворотки крови у телят были взяты в начальный период заболевания и через 21 день.

Результаты исследований.

При проведении лабораторных исследований на смешанные респираторные болезни телят большое значение следует уделять правилам взятия, обработки и транспортировки патологического материала. Эти правила предусматривают брать материал от больных животных в период максимального проявления клинических признаков (3-й-7-й день болезни). А от вынуждено убитых или павших животных не позже, чем через 1-2 часа после их гибели. От больных животных с подозрением на респираторные болезни стерильным ватно-марлевым или поролоновым тампоном берут со слизистой оболочки носовой полости серозные истечения, предназначенные для обнаружения и выделения возбудителей, а также парные сыворотки больных животных с целью выявления прироста титров антител методом ретроспективной диагностики. От павших и вынужденно убитых животных патологическим материалом служат кусочки носовой перегородки, трахеи, бронхов, паренхиматозных органов, региональные лимфатические узлы (заглоточные, шейные, средостенные), а также кусочки тонкого отдела кишечника, фекалии. Флаконы с материалом направляют в лабораторию в термосе со льдом. При необходимости материал консервируют 30%-ным раствором глицерина, а первую сыворотку, взятую в начале заболевания (не позднее 4-5 дня), замораживают и исследуют одновременно со второй, взятой повторно на 15-20 сутки после заболевания, в течение трех дней после ее получения.

Лабораторная диагностика Парагриппа-3 Включает индикацию специфического антигена в патологическом материале от больных животных в реакции иммунофлуоресценции, выделение вируса из патологического материала больных телят и животных-вирусоносителей в культуре клеток почки или легких эмбриона коровы, почки новорожденных телят с последующей идентификацией в реакции торможения гемадсорбции и реакции задержки (торможения) гемагглютинации (РЗГА) со специфической к вирусу ПГ-3 сывороткой из диагностического набора биофабричного производства. РЗГА используют также при ретроспективной диагностики ПГ-3 методом выявления прироста антител в реконвалесцентной сыворотке крови переболевших животных в сравнении с сывороткой, взятой в начале заболевания от этих же животных, а также методом иммуноферментного анализа (ИФА). При выделении вируса ПГ-3 можно использовать развивающиеся куриные эмбрионы 9-11-дневного возраста, зараженные на хорионаллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полости. Для доказательства наличия вируса ПГ-3 в экстраэмбриональной жидкости ее испытывают в культуре клеток почки теленка. Лабораторную диагностику на ПГ-3 провоят параллельно с исследованием материала на адено - и РС-инфекции, ИРТ, ВД и хламидийные инфекции крупного рогатого скота.

При постановке диагноза на Аденовирусную инфекцию учитывают сходную патологию, вызываемую возбудителями ИРТ, ПГ-3, ВД, РС-инфекции, хламидиоза и микоплазмоза крупного рогатого скота. Решающее значение при этом имеют лабораторные исследования, обозначенные при диагностике пневмоэнтеритов телят методом обнаружения антигена в патологическом материале в реакции иммунофлуоресценции и антител в сыворотке крови в реакции связывания комплемента, реакции непрямой гемагглютинации, реакции диффузной преципитации, в реакции иммуноферментного анализа, а также выделения возбудителя из патологического материала на культуре клеток тестикул бычка, почек эмбриона коров с последующей идентификацией в серологических реакциях.

Дифференциацию смешанных респираторных болезней телят, в этиологии которых причастны вирусы Инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и респираторно-синцитиальной инфекции, осуществляют с помощью диагностических наборов биофабричного производства, включая набор для постановки реакции иммуноферментного анализа. Параллельно исследуют материал на присутствие специфических антител к антигенам возбудителей ПГ-3, аденовирусной и хламидийной инфекциям.

Диагностика Хламидиоза крупного рогатого скота включает обнаружение элементарных телец в мазках-отпечатках, приготовленных из патологического материала и окрашенных по методу Гимза-Романовскому и модифицированному методу Стемпа, в световом поле микроскопа; выделение возбудителя на 6-7-дневных куриных эмбрионах, культурах клеток BGM, Vero, HL, HEp-2, карликоВой козы (ПКК), почки сайги (ПС-ФГМ-10, ПС-ГЛАО-10), почки зеленой мартышки, почки эмбриона овцы (ПЭО), почки степной черепахи, первично-трипсинизированных и диплоидных культурах клеток почек эмбриона крупного рогатого скота; определение специфическмих антител к хламидийным антигенам в РСК, РДСК, РТГА, РН, РИФ и реакции иммуноферментного анализа [5].

Сводные данные по результатам серологических исследований проб сывороток крови на наличие антител к вирусу ПГ-3 и возбудителю хламидиоза представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты исследований сывороток крови телят на присутствие специфических антител к вирусу ПГ-3 и возбудителю хламидиоза

Из таблицы 1 видно, что при исследовании проб сывороток крови от больных телят в РДСК в 3 пробах (NN 3521, 3512, 3504) были выявлены специфические антитела к возбудителю хламидиоза.

При исследовании проб сыворотки крови на парагрипп-3 в РЗГА из 20 проб все сыворотки (100%) реагировали положительно в титрах от 1:40 до 1:160, а при повторном исследовании проб сывороток крови на 18-25 день заболевания в шести пробах (NN3525, 3524, 3523, 3521, 3519, 3518) отмечено 4-кратное увеличение тиров антител к вирусу ПГ-3, что свидетельствует о широкой его циркуляции среди телят.

Вывод. В ЧСП А/Ф "Зеленогорск" Белогорского района АР Крым при серологических исследованиях проб сывороток крови от телят 4-х-месячного возраста с признаками заболеваний органов дыхания выявлены антитела к вирусу парагриппа-3 (в шести пробах - четырехкратное увеличение титра антител при исследовании парных проб сыворотки крови) и к возбудителю хламидиоза (в трех пробах). Это свидетельствует о циркуляции данных возбудителей среди поголовья крупного рогатого скота ЧСП А/Ф "Зеленогорск" и об их участии как этиологических агентов в возникновении смешанных респираторных болезней телят.

Список литературы

1. Апатенко В. М. Общая паразитоценология (учебное пособие). - Харьков, 2005 - 151 с.

2. Амирбеков М., Ковалев В. Л. Респираторные болезни телят (диагностика и лечение) // Ветеринария. - 1985. - N1. - С. 37-39.

3. Прискока В. А., Павленко Н. С. Гетерогенность паразитоценозов. - К.: Логос, 1998. - 115 с.

4. Наконечний ., Матузенко М. Пневмоентерити телят змшано етолог // Ветеринарна медицина Украни. - 1997. - N 11. - С. 32-34.

5. Сюрин В. Н., Белоусова Р. В., Фомина Н. В. Диагностика вирусных болезней животных / Справочник. - М.: Агропромиздат, 1991. - 528 с.

Гончаренко И. М.