Культуральная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
Несмотря на то что живые вакцины широко используют в ветеринарной практике, в последние годы все большее значение приобретают инактивированные препараты в силу своей безопасности. Это необходимо учитывать при вакцинопрофилактике болезней, возбудители которых способны длительно персистировать в организме животных в скрытой форме, затрудняющей их диагностику [1-4, б-8].
В настоящее время для изготовления инактивированных вакцин против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС) используют первичнотрипсинизированные культуры клеток (почки теленка, бычьего тестикула), вирулентный штамм вируса 4016 с относительно невысоким уровнем накопления в этих клеточных культурах (6,0--6,5 1дТЦД5о/мл). Все это обусловливает трудоемкость технологии изготовления клеточного и вирусного сырья и определенным образом влияет на эффективность вакцинного препарата.
Цель исследований - разработка новой инактивированной вакцины против ИРТ КРС на основе аттенуированного штамма и более перспективной технологии, основанной на применении продуктивной перевиваемой культуры клеток и роллерного способа выращивания вируса.
Материалы и методы. В работе использовали перевиваемую культуру клеток МДВК; вакцинный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС (активность 7,25-8,0 1дТЦД5о/мл); вирулентный штамм 4016 этого вируса (активность 6,0-6,5 1дТЦД адъюванты: минеральное масло, гидроокись алюминия с сапонином и аэросил.
Культуру клеток и вирус выращивали во вращающихся 3-литровых сосудах на роллерных установках (производительность 50 л вируссодержащей суспензии за цикл) по разработанной во ВНИИВВиМ методике. Вирусное сырье инактивировали теотропином или сернокислой медью в конечной концентрации 0,1 % при 37+/-1 град.С в течение 7 сут. Полноту инактивации вируса оценивали в трех последовательных пассажах культуры клеток МДВК с интервалом 5 сут.
Для изготовления вакцины к инактивированному антигенсодержащему материалу в качестве адъювантов добавляли минеральное масло, или ГОА с сапонином, или аэросил. Вакцину проверяли на стерильность, полноту инактивации, безвредность, антигенную и иммуногенную активность.
Для оценки безвредности каждую серию вакцины вводили взрослым кроликам внутримышечно по 3,0 мл и в течение 7 сут наблюдали за клиническим состоянием животных.
5о/мл); инактиватор теотропин Антигенную и иммуногенную активность контролировали на взрослых кроликах и б-8-месячных телятах. Для этого кроликов двукратно вакцинировали внутримышечно в дозах 0,5 и 1 мл, а телят - подкожно в дозах 1, 2 и 5 мл с интервалом 14 дней. Через 14 дней после повторной прививки в сыворотке крови животных определяли уровень вируснейтрализующих антител, а телят подвергали контрольному заражению вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС.
Результаты исследований и обсуждение. Данные по сравнительной оценке уровня накопления вакцинного и эпизоотического штаммов вируса ИРТ КРС с использованием соответственно перевиваемых и первично трипсинизированных клеток, роллерного и стационарного способов выращивания, а также технологии изготовления инактивированной вакцины из указанных штаммов представлены в таблице 1.
Препараты из вакцинного штамма, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по экономическим и технологическим показателям значительно превосходили аналог из эпизоотического штамма 4016. При этом теотропин в качестве инактиватора обеспечивал экологическую безопасность убитой вакцины из штамма ТК-А.
Оценка иммуногенности различных образцов инактивированной вакцины против ИРТ КРС показала преимущество препаратов из вакцинного штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по сравнению с таковой из вирулентного штамма 4016 (табл. 2). Препараты из вакцинного штамма в дозе 2,04-2,0 мл обеспечивали защиту привитых животных в течение 12 мес, а из эпизоотического даже в большей дозе 10,04-10,0 мл - не бо Иммунный ответ у телят и кроликов изучали, прививая их инактивированной вакциной против ИРТ КРС из штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК в разных дозах (табл. 3).
У телят и кроликов, привитых двукратно инактивированной вакциной против ИРТ КРС из аттенуированного штамма ТК-А, титр вируснейтрализующих антител в сыворотке крови был одинаковым (см. табл. 3).
Минеральное масло при введении его в дозе 5,0 мл вызывало у некоторых телят на месте инъекции образование припухлости диаметром до 10 см при удовлетворительном общем состоянии животных. В производственных условиях такие осложнения наблюдали у 25- 30 % привитого скота, переходящие в отдельных случаях в гнойно-некротические абсцессы. Данное обстоятельство побудило нас продолжить работу по снижению реактогенности (местной реакции) масляной вакцины и одновременно искать другие эффективные и безвредные адъюванты.
При применении масляной вакцины в более низких дозах (1,0 и 2,0 мл) местная реакция на введение препарата была слабой или умеренной, иммунный ответ у привитых животных не снижался.
В производственных условиях опытные образцы указанной вакцины, хранившейся 1 год при 2-8 град.С, в дозах 1,0 и 2,0 мл вызывали у животных на месте введения препарата умеренную или слабую реакцию и обеспечивали формирование напряженного иммунитета продолжительностью 12 мес.
После иммунизации телят инактивированной вакциной против ИРТ КРС с ГОА и сапонином (срок хранения 1 год при 2--80С) в дозах 5,0 и 2,0 мл общее состояние их было удовлетворительным, отмечали слабую местную реакцию, напряженный иммунитет сохранялся 12 мес.
При заражении иммунизированных и контрольных животных вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС первые были устойчивы к данному возбудителю, а у непривитых отмечали повышение температуры тела до 41,0 град.С, слюнотечение, конъюнктивит и другие признаки, характерные для ИРТ КРС.
Максимальное накопление вируснейтрализующих антител регистрировали при двукратной иммунизации животных инактивированной вакциной против ИРТ КРС с интервалом 14-28 дней (табл. 4). Результаты опытов также свидетельствуют о том, что кроликов можно использовать в качестве лабораторной модели для контроля иммуногенности (по сероконверсии) инактивированной вакцины против ИРТ КРС.
Заключение. Разработана перспективная технология изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС, отличающаяся экономичностью, высокой иммуногенностью и безопасностью получаемого препарата. Эффективность ее основана на использовании вакцинного штамма ТК-А, продуктивной перевиваемой линии клеток МДВК и роллерного метода выращивания, что исключает стадию концентрирова-ния вирусного сырья и делает производство инактивирован-ной вакцины против ИРТ КРС экономичным.
Н. И. ЗАКУТСКИЙ, В. И. ЖЕСТЕРЕВ, И. Ф. ВИШНЯКОВ, Л. Д. КОНАКОВА, Л. И. АНИСИМОВА, А. А. ШЕВЧЕНКО ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии
