Определение активности (подвижности) спермиев.
При исследовании спермы под микроскопом в поле зрения могут встречаться спермии с разными видами движения, главным образом с тремя: прямолинейно-поступательным, манежным и колебательным.
Нормальные, полноценные спермии двигаются вперед по прямой линии, перемещаются в направлении продольной оси спермия. Это прямолинейное поступательное движение. Спермии с таким видом движения способны в половых органах самок двигаться навстречу яйцеклеткам и принимать участие в их оплодотворении. Чем больше спермиев с прямолинейным поступательным движением, тем выше оплодотворяемость самок.
Круговое (манежное) движение - спермии двигаются вокруг своей головки или по небольшому кругу, радиус которого примерно равняется длине спермия, в направлении или против движения часовой стрелки. Такое движение является ненормальным, оно свидетельствует об ослаблении, неполноценности спермиев. У рыб круговое движение спермиев является нормальным, оно обеспечивает встречу спермиев с яйцеклетками в воде.
Колебательное движение - спермии вздрагивают и колеблются на одном месте, выгибаются, делают слабые движения хвостом, головкой, перемещаются толчками из стороны в сторону, но не двигаются поступательно. Колебательное движение - признак неполноценности или быстрой гибели спермиев.
Однако колебательные движения могут быть и у нормальных спермиев при охлаждении спермы, нарушении условий хранения спермы, накоплении в ней молочной или угольной кислот. Такие спермии могут возобновлять прямолинейное поступательное движение при подогревании или подщелачивании среды. Следовательно, оценку активности спермы следует проводить только при температуре 38-40°С.
Установлено, что все спермии несут одноименный, отрицательный электрический заряд. В сперме высокого качества одноименно заряженные половые клетки отталкиваются одна от другой, не происходит слипания и столкновения спермиев.
При повышении кислотности спермы, наличии ионов некоторых металлов, иммунизации организма чужеродным белком, воспалительных процессах в половых органах или влиянии других неблагоприятных факторов происходит нейтрализация отрицательного заряда спермиев и они агглютинируют (склеиваются между собой). Агглютинация свидетельствует о плохом качестве спермы.
В некоторых густых эякулятах спермии во время эякуляции не успевают полностью выйти из состояния анабиоза, проявляя при этом слабую подвижность. Такую сперму необходимо проверить после добавления к ней 2,9%-го раствора натрия лимоннокислого, подогретого до 38-40С. Для этого на предметное стекло наносят две капли раствора и каплю спермы, накрывают покровным стеклом и оценивают качество в нескольких полях зрения при температуре 38-40°С.
При исследовании активности (подвижности) спермиев определяют глазомерно, то есть визуально какой процент спермиев в поле зрения микроскопа имеет нормальное прямолинейное движение. Спермии с манежным и колебательным движением условно считают мертвыми и при оценке по бальной системе не учитываются. Если все спермии неподвижные, ставят оценку Н (некроспермия - неподвижность), манежное (круговое) движение спермиев помечают буквой М, колебательное - буквой К.
Активность (подвижность) спермиев оценивают в баллах, по стобалльной, а теперь – по десятибалльной шкале. Высшую оценку
10 баллов получает сперма, в которой практически все (100%) спермиев
двигаются прямолинейно-поступательно. Однако практически такой
спермы не бывает, поскольку в каждом эякуляте есть спермии разного
возраста, степени зрелости, возбудимости и подвижности. Поэтому высокой оценкой активности считают 9 баллов, то есть если 9 спермиев из 10 прямолинейно-поступательное движение. При 80% спермиев с прямолинейно-поступательным движением ставят 8 баллов, при 70% -
7 и т. д.
В научной литературе часто выражают активность спермиев непосредственно в процентах спермиев, которые имеют прямолинейное поступательное движение, и пишут, например, вместо балла 9 - 90, вместо 3 - 30 и т. д. Знак процента при этом не пишут.
Следует отметить, что в густой свежеполученной сперме барана и быка бывает сложно определить какой процент спермиев имеет тот или другой вид движения. Тогда ставят балл по таким признакам: если в сперме наблюдается бурное вихреподобное движение ставят высший балл 10, при несколько замедленном вихреподобном движении ставят 9. Завихрение, которое образовалось, сразу же исчезает.
Может быть скопление отдельных ослабленных или же не подвижных спермиев. Эти скопления плавают в виде темных островков, которые не исчезают, и наличие их снижает балл оценки.
Новичкам рекомендуют проводить определение активности спермиев в баллах не во всем поле зрения микроскоп, а по секторам, отдельным участкам поля зрения. При этом одновременно учитывают и записывают в числитель число подсчитанных спермиев, а в знаменателе - только с прямолинейно-поступательным движением. Потом полученные данные суммируют и высчитывают процент спермиев с прямолинейно-поступательным движением.
Оценку спермы по густоте и активности проводят в нескольких (не менее трех) полях зрения микроскопа и выводят средний показатель.
Для разбавления и хранения используют сперму барана с оценкой не ниже Г-9, быка и хряка Г и С не ниже 8 баллов, жеребца - Г и С не ниже 6 баллов.
В журнале учета качества полученной спермы ставят оценку густоты и подвижности каждого эякулята отдельно, помечая буквами, а цифрами подвижность (например, Г-8, С-9, С-7 и т. д.) При оценке разбавленной спермы в журнал записывают результаты только активности спермиев (8, 3 и т. д.).
После окончания работы все части микроскопа протирают чистой салфеткой и накрывают марлевой салфеткой, полиэтиленовым колпаком или же ставят в специальный футляр для микроскопа.
Разбавленную и охлажденную (замороженную) сперму оценивают по активности после размораживания.