Определение билирубина в Крови
Билирубин, образующийся в органах ретикуло-эндотелиальной системы, является нормальной составной частью крови человека и домашних животных.
Материалом для построения его молекулы служит гемоглобин распавшихся красных кровяных телец. Поступая из органов ретикуло-эндотелиальной системы в кровь, билирубин растворяется в плазме и придает ей желтоватое окрашивание, интенсивность которого зависит, главным образом, от количества растворённого пигмента жёлчи. Этой разновидности билирубина Лепене даёт название Баларудина, через печень не проведённого. С усилением распада эритроцитов увеличивается одновременно и содержание в крови непроведённого билирубина. Особенно резкое нарастание билирубина обнаруживают при гемолитических желтухах.
Циркулирующий в крови билирубин захватывается купферовскими клетками печени, где происходят какие-то структурные изменения в его молекуле. Этой новой разновидности пигмента - нормальной составной части жёлчи- дают название Билирубина, проведённого через печень. При различного рода препятствиях к оттоку жёлчи в кишечник, естественным следствием чего являются застои в жёлчных путях, происходит всасывание жёлчи и поступление её в кровь. Вследствие этого в сыворотке можно обнаружить билирубин, проведённый через печень. Появление в крови этой разновидности пигмента является, таким образом, естественным следствием желтух, развивающихся в результате затруднённого оттока жёлчи. Они получили название ретенционных желтух.
Для диференциальной диагностики желтух пользуются предложенными ван-ден-Бергом прямой и непрямой реакциями. При помощи прямой реакции определяют билирубин, проведённый через печень, присутствие которого в крови считается несомненным патологическим симптомом. Для обнаружения непроведённого билирубина служит непрямая реакция.
Существенным дополнением к этого рода качественному исследованию на билирубин является количественное определение содержания пигментов жёлчи в крови. Оно даёт представление о степени желтухи и тех расстройств, которые привели к её возникновению.
Среди многочисленных способов определения билирубина наиболее простым и в то же время достаточно надёжным известен метод, в основе которого лежит принцип колориметрии.
В небольшую агглютинационную пробирку отмеряют при помощи пипетки 0,5 куб. см совершенно прозрачной и бесцветной сыворотки крови и сравнивают её окраску со стандартной жидкостью, налитой в такую же пробирку. Задача исследования состоит в том, чтобы при помощи разведения сыворотки 10% раствором поваренной соли добиться полного тождества окраски со стандартом. Результаты исследования выражают формулой: 0,5 +X, где 0,5 определяет количество сыворотки, а X-количество раствора поваренной соли в кубических сантиметрах, потребовавшегося для получения однообразного окрашивания.
Состав стандарта: двухромовокислый калий - 0,1, дестиллированная вода- 200 куб. см, серная кислота -3 куб. см.
Содержание билирубина в крови здоровой лошади колеблется в пределах от 0,5 + 0 до 0,5+1.
При желании результаты исследования легко перевести в единицы Мейлен-грахта: так как стандартная жидкость соответствует 5 единицам, содержание билирубина в крови здоровой лошади при пересчёте колеблется в пределах от 1 до 15 единиц.
Одна единица Мейленграхта соответствует интенсивности окраски 0,5 мг билирубина, растворённого в 200 л воды.
Способ ван-ден-Берга наиболее точный из всех предложенных.
Для осаждения белков и экстракции билирубина 2 куб. см сыворотки крови обрабатывают 4 куб. см спирта и центрифугируют до полного просветления жидкости. Затем к 3 куб. см центрифугата прибавляют для растворения жирных кислот 1,5 куб. см спирта и обрабатывают 0,75 куб. см свежеприготовленной смеси диазореактивов Эрлиха. Окрашенную в розоватый цвет жидкость, вследствие образования диазосоединений билирубина, переливают в стаканчик колориметра и колориметрируют. В качестве стандарта применяют раствор сернокислого кобальта (2,61 г на 100 куб. см воды).
Расчёт производят по формуле:
Где У-отсчёт для стандарта, Z-отсчёт для исследуемой жидкости.
Содержание билирубина при определении по способу ван-ден-Берга у лошади колеблется в пределах от 0,3 до 1 при средней величине в 0,8. При катаральных желтухах содержание его повышается в общем незначительно, до 1,8-2 мг% на 100 куб. см сыворотки.
Более резкую билирубинемию обнаруживают при инфекционных заболеваниях - инфлуэнце, крупозной и гриппозной пневмонии, мыте, ангине. По наблюдениям автора, количество билирубина при этих заболеваниях повышается до 2-2,5 мг%. Наиболее высокие цифры мы обнаруживали при mor-bus maculosus, отравлении SO2 и отравлениях хвощом, когда содержание билирубина нарастало до 4 мг%.
Максимальные изменения установлены при инфекционном энцефаломиэлите, для которого средними являются, по наблюдениям автора, колебания между 4-8-12 мг билирубина в 100 куб. см сыворотки.
Несмотря на то, что билирубинемия по существу является симптомом, общим многим заболеваниям, она тем не менее имеет громадное клиническое значение. Резкие билирубинемии с содержанием жёлчных пигментов свыше 4 мг наблюдаются при очень небольшом круге заболеваний, которые к тому же существенно отличаются друг от друга по своей клинике. При учёте клинической картины билирубинемию можно использовать, таким образом, не только в прогностическом, но и в диагностическом отношении.
