Определение крови и кровяных пигментов
Кровяные пигменты могут быть в моче в связанном виде с эритроцитами и могут появляться в растворенном виде. В первом случае говорят о гематурии, т. е. появление крови в моче, а во втором-о гемоглобинурии, выделение кровяных пигментов. К гемоглоби-нурии принято относить только те случаи, когда одновременно имеется и гемо-глобинемия, когда, следовательно, почки выделяют гемоглобин эритроцитов, разрушенных в кровяном токе. Выщелачивание гемоглобина из эритроцитов мочой после вступления их в мочевые пути из почечных канальцев называть гемоглобинурией не следует.
Различают гематурию почечную и вторичную, возникающую в мочевых путях. Почечная гематурия характеризуется появлением в моче эритроцитов вследствие нарушения цельности сосудистой стенки. Большая часть эритроцитов сохраняет свою форму, строение и окраску и легко обнаруживается при микроскопии осадка. Меньшая часть эритроцитов разрушается, придавая красноватую окраску моче.
Количество эритроцитов, поступающих в мочу, может быть различным, в зависимости от степени поражения сосудистой стенки. В одних случаях в моче обнаруживаются единичные эритроциты, в других, напротив, их бывает так много, что кровоизлияние угрожает жизни животного.
Причиной почечных кровотечений могут быть различные заболевания из группы геморрагического диатеза-кровепятнистая болезнь лошадей, сибирская язва, чума, паратиф телят и др. Причиной кровотечения может быть нефрит и геморрагический инфаркт почек вследствие тромбоза почечной артерии. В последнем случае лошади, например, могут истекать кровью в течение 3-5 дней. Затем причиной почечной гематурии могут быть травматические повреждения почек или почечных лоханок инородными телами (камни) и животными паразитами. Наконец, причиной почечной гематурии может быть разрыв сосудов и распад стенок на почве злокачественных опухолей. При почечных гематуриях в моче можно обнаружить эритроциты, кровяные цилиндры и эпителиальные клетки почек. При обильных кровотечениях в моче можно встретить слепки мочеточников, достигающие толщины пальца взрослого человека.
Вторичная гематурия отмечается при различных заболеваниях мочевых путей и мочевого пузыря. Кровоизлияния в мочевом пузыре бывают незначительными и кровь при них обнаруживается только в последних порциях мочи. В основе гематурии лежит цистит, травмирование камнями и паразитами и повреждение сосудов распадающимися опухолями. При уретральных кровоизлияниях моча выделяется каплями через наружное отверстие уретры, и при мочеиспускании только первые порции мочи содержат эритроциты. Особое место занимает гематурия крупного рогатого скота в некоторых местностях, которая держится несколько недель и даже лет. Кровотечение бывает обильным, и возникающие в мочевом пузыре сгустки крови закупоривают нередко мочеиспускательный канал, что может привести к разрыву мочевого пузыря.
На слизистой оболочке мочевого пузыря у этих животных можно обнаружить варикозные неровности, опухолевидные разрастания, которые обнаруживаются цистоскопией и ректальным исследованием.
Гемоглобинурия. В отличие от гематурии в моче обнаруживаются не форменные элементы крови, а кровяные пигменты распавшихся эритроцитов или мышечной ткани. Разрушение эритроцитов в кровяном ложе связывается с различного рода интоксикациями. По происхождению гемоглобинурия подразделяется на симптоматическую, токсическую и параксизмальную.
Симптоматическая гемоглобинурия является, как показывает название, симптомом таких заболеваний, как ревматическая и энзоотическая гемоглобинурия лошадей, пироплазмоз и трипанозомоз. Реже гемоглобинурия отмечается при плевропневмонии и гангрене легких, септицемии и инфлюэнце.
Токсическая гемоглобинурия вызывается фармакологическими и биологическими ядами, обладающими гемолитическими свойствами. К первым относятся, например, отравление бертолетовой солью, фенолами и их производными, мышьяковистым водородом и т. д. Сильнейшими ядами второй группы являются: яд кобры, грибной яд сморчка и сыворотка крови другого вида животных, введенная в вену, или другим каким-либо способом.
Параксизмальная гемоглобинурия характеризуется появлением кровяных пигментов приступами. В основе пароксизмальной гемоглобинурии лежит или длительная инфекция (инфекционная анемия лошадей, злокачественный мыт и грипп), а у молочных коров возникновение гемоглобинурии отмечается после поения ледяной водой.
Для исследования на кровяные пигменты необходимо брать нефильтрованную мочу. Среди многочисленных способов химического определения кровяных пигментов наиболее приемлемыми являются следующие:
Проба с едким натром или кали (Геллера). В качестве реактива используется 10%-ный водный раствор едкого кали или натра. К 5 мл испытуемой мочи добавляют 1/3 по объему едкой щелочи, после чего содержимое взбалтывают и кипятят. При кипячении выпадают фосфорнокислые соли кальция и магния, которые и увлекают в осадок кровяные пигменты. Положительной реакцией считается появление на дне пробирки красивого красного осадка, дающего зеленоватый оттенок на проходящем свете. Реакция получается при наличии/значительного количества крови. У лошадей эта реакция малочувствительна, потому что в моче лошади имеется незначительное количество фосфатов. У других животных этой реакцией можно пользоваться с успехом.
Проба Van-Deen'a. В узенькой пробирке смешивают по 20 капель свежеприготовленного спиртового раствора гваяковой смолы (0,25 : 50) и старого озонированного скипидара или 3% перекиси водорода и, слегка взболтав, наслаивают эту смесь на испытуемую мочу. По линии соприкосновения жидкостей моментально получается белое смолистое кольцо, которое в присутствии крови становится темносиним.
Проба Тевенон - Роланда. В качестве реактива используется 3%-ный раствор перекиси водорода и реактив N 2 следующего состава: Sol. Pyramidoni in alcogol 5%; Sol. ас. acetici glaciali 50% аа 50,0.
В пробирку наливают по 1 мл мочи и реактива и после этого прибавляют по 3-4 капли перекиси водорода. В присутствии кровяных пигментов получается нестойкое фиолетовое окрашивание. При исследовании мочи лошади лучше к реактиву добавлять мочу.
Проба Адлер - Цитрона. В качестве реактива используются перекись водорода (3%) и насыщенный раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте Sol. Benzidini in ас. acetici glaciali.
К 3 мл перекиси водорода добавляют 10-15 капель насыщенного раствора бензидина в уксусной кислоте до молочной опалесценции и затем-испытуемая моча по каплям. Положительная реакция на кровяные пигменты характеризуется появлением зеленого окрашивания или зеленого кольца на линии соприкосновения жидкостей.
Проба Колло. Для выполнения этой пробы необходимо иметь: 1-щелочный раствор фенолфталеина (фенолфталеина 2,0, едкого кали 20,0, дистиллированной воды 100 мл). Окрашенный раствор кипятят и при непрерывном кипячении добавляют 10,0 металлического цинка в порошке. Кипячение раствора продолжается до полного обесцвечивания. После этого раствор фильтруется и сохраняется в склянке (капельнице из оранжевого стекла), 2-2%-ный раствор ледяной уксусной кислоты, в 95 град. очищенном спирте и 3-30%-ный раствор перекиси водорода.
При исследовании моча и уксуснокислый спирт берутся в равных количествах, примерно по 2-3 мл, затем в пробирку добавляют 25-30 капель щелочного раствора фенолфталеина и затем 1-3 капли перекиси водорода. В присутствии кровяных пигментов получается красивое малиновое окрашивание.
По данным Домрачева, наиболее чувствительной на кровяные пигменты в моче лошади является проба с фенолфталеином. Чувствительность ее 1 : 40 000. Очень чувствительной является также проба с пирамидоном. Гораздо менее надежной у травоядных считается проба с едкой щелочью, и только с кислой мочой у плотоядных она дает хорошие результаты.
Точная дифференциация кровяных пигментов в моче может быть осуществлена с помощью спектроскопа. Оксигемоглобин при спектроскопии дает две полосы поглощения в желтой и зеленой части спектра. Гемоглобин образует одну широкую полосу поглощения между желтым и зеленым цветами спектра. Метгемоглобин дает три полосы поглощения в красной, желтой и зеленой частях спектра. Иногда в моче встречается смесь всех трех модификаций гемоглобина, а, кроме того, еще и гематопорфирина (дериват гемоглобина, не содержащий железа).
Для обнаружения гематопорфирина, по Сальковскому, подкисленную мочу осаждают щелочным раствором хлористого бария (смесь равных частей насыщенной на холоду гидроокиси бария и 10% хлористого бария). Осадок промывается водой, затем абсолютным спиртом, подкисленным 6-8 каплями соляной кислоты. Красно-фиолетовый раствор кислого гематопорфирина дает две полосы поглощения, а после насыщения аммиаком-четыре полосы щелочного гематопорфирина.
