[Womiting and wasting disease in piglets (англ.); Erbrechen und Kummern beim Saugferkel (нем.)]
Эпидемическая диарея поросят (ЭДП) впервые зарегистрирована в 1971 г. в Великобритании. Клинически болезнь проявляется аналогично ТГС, за исключением важного отличия, заключающегося в том, что поросята-сосуны (до 4—5 недельного возраста) не заболевают. Подобная болезнь наблюдалась в Бельгии в 70-е годы прошлого столетия. Позднее выделили вирус при ТГС-подобном заболевании, который назвали ЭДП тип 2. Последний отличался от ранее выделенного, обозначенного как вирус ЭДП тип 1, только тем, что вызывал заболевание и у поросят-сосунов.
Только в 1978 г. удалось установить связь коронаподобного вирусного АГ со вспышкой ЭДП типа 2. Экспериментальное заражение подтвердило энтеропатоген-ность изолята, но только не для поросят-сосунов, а для свиней на откорме. Недавно показано, что вспышки ЭДП типа 1 и 2 обусловлены одним и тем же вирусом.
В ELISA-блокинг AT к вирусу ЭДП обнаружены среди свинопоголовья Бельгии, Великобритании, Германии, Франции, Нидерландов, Швейцарии, Болгарии. В США, по крайней мере до 1990 г., обнаружить AT к вирусу ЭДП не удалось, как и в Австрии. Получены данные, свидетельствующие о возможности распространения инфекции, обусловленной вирусом ЭДП в хозяйствах стран СНГ. При исследовании на наличие вирусов ИГС и ЭДП в одних и тех же образцах патматериала положительные результаты получены в большинстве случаев как на ИГС, так и на ЭДП. Это ставит вопрос о широком распространении смешанной вирусной инфекции ИГС-ЭДП. Возникает необходимость полномасштабных исследований по изучению этиологической роли вируса ЭДП при массовых вспышках острых диарейных заболеваний новорожденных поросят и молодняка, особенно в случаях, когда болеют также откормочные и взрослые свиньи.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Главным и часто единственным признаком ЭДП является водянистый понос. При вспышках заболевания на чувствительном поголовье заболеваемость и смертность могут значительно варьировать. Болезнь клинически очень похожа на ТГС, за исключением медленного распространения и невысокой смертности новорожденных поросят. Поросята до недельного возраста могут погибать от дегидратации при диарее в течение 3—4 дней. Смертность в среднем составляет 50 %, но может достигать 90 %. Животные более старшего возраста выздоравливают через одну неделю. На некоторых фермах, тяжело поражаются поросята на откорме и даже взрослые свиньи, тогда как поросята-сосуны не поражаются вовсе или у них развивается легкая диарея. Заболеваемость у новорожденных поросят низкая. Нет объяснения различию клинического проявления заболевания при отсутствии иммунитета. На откормочных фермах наблюдаются большие различия клинических признаков при острой вспышке ЭДП. У всех поросят выражена диарея в течение недели. Животные угнетены, аппетит отсутствует, кал водянистый (но без крови). Выздоровление наступало через 7—10 дней. Смертность— 1—3 %. Поросята погибают обычно на ранней стадии диареи или даже перед ее появлением. Самая высокая смертность обычно наблюдалась при стрессах.
ЭДП тяжелее болеет откармливаемое поголовье, чем новорожденные поросята. Откармливаемые поросята более чувствительны к вирусу и заболеваемость достигает 100 %. Распространение ЭДП в помещении закрытых племенных ферм, а также в откармливаемых стадах более медленно, чем ТГС. В племенных фермах на это уходит, как правило, 4—5 недель после заражения животных различных возрастных групп.
Макроскопические поражения локализуются в тонком кишечнике, который заполнен желтой жидкостью. Микроскопически через 24 ч после заражения заметны вакуолизация клеток эпителия и выход гистеоцитов а ворсинках тонкого кишечника, что соответствует последующей диарее. С этого момента укорачиваются ворсинки. Ультраструктурные изменения находят только в цитоплазме энтероцитов, в которых клеточные органелы уменьшены, имеют электронно-ответные зоны.
Патогенез изучали на поросятах-гнотобиотах, не получавших молозива, инокули-рованных прототипным шт. CV777 в возрасте 3 дней. Поросята заболевали через 22-36 ч. Вирус репродуцировался в цитоплазме в эпителиальных клетках ворсинок в тонком и толстом кишечнике. Флюоресцирующие фокусы обнаружены также в криптах и мезентериальных лимфоузлах, но инфекция в этих зонах всегда оставалась рассеянной и, возможно, непродуктивной.
Заражение эпителиальных клеток наблюдалось уже через 12—18 ч после инокуляции поросят и достигало максимума через 24—36 ч. Развивалась дегенерация клеток тонкого отдела кишечника, что приводило к укорачиванию ворсинок. Отношение длины ворсинок и глубины крипт от нормального 7:1 снижалось до 3:1. В эпителиальных клетках толстого отдела кишечника дегенерации не отличались. Флюоресценция в клетках отмечалась до 5-го дня после заражения поросят. Поражения в тонком кишечнике были очень похожи на таковые при ТГС. При ЭДП отмечался более продолжительный инкубационный период. Размножение вируса ЭДП вне клеток кишечника не происходило.
Патогенез ЭДП на поросятах более старшего возраста изучен также детально. Флюоресценция вирусспецифического АГ обнаруживалась в эпителиальных клетках ворсинок тонкого и толстого отделов кишечника откармливаемых поросят как после экспериментального, так и после естественного заражения. До сих пор не ясно, каким образом поражения толстого отдела кишечника усиливало клиническое проявление болезни. Нет также объяснения наличию внезапных мышечных некрозов, часто наблюдаемых как у молодняка, так и у взрослых свиней.
Морфологический и химический состав. Морфология вируса ЭДП — типична для коронавирусов. Частицы, обнаруживаемые в фекальных массах, плеоморфны, чаще сферические. Их диаметр составляет 130 нм ( от 95 до 190 нм). Многие частицы имеют электронно-плотную центральную зону размером 18—23 нм. Внутренние структуры не просматриваются. Морфогенез вируса ЭДП происходит в эпителиальных клетках кишечника по схеме, аналогичной другим коронавирусам. Собранные вирусные частицы могут проходить через цитоплазматические мембраны.
Физико-химическая и биологическая характеристики подтверждают принадлежность вируса ЭДП к семейству коронавирусов. Вирус эфиро - и хлороформочувствителен. Плавучая плотность составляет 1,18 г/см3. Концентрированный и очищенный вирус агглютинирует эритроциты 12 видов животных. Адаптированный к культуре клеток вирус ЭДП теряет инфекционность при 60 °С в течение 30 мин, но значительно стабильнее при 50 "С. Вирус стабилен при рН 5—9 при 4 °С и 6,5—7,5 при 37 °С. Инфекционность вируса не снижается при обработке ультразвуком или многократным замораживанием-оттаиванием.
Репликация не ингибируется 5-йод-2-дезоксиуридином, что показывает принадлежность вируса к РНК-содержащим. Основные структурные белки вируса ЭДП такие же, как и у других коронавирусов. Вирус содержит гликозилированный пепло-мерный протеин мол. м. 85—135 кД, гликозилированный оболочечный протеин 20—32 кД, негликозилированный РНК-связанный нуклеокапсидный протеин мол. м. 58 кД. Идентифицирован мембранный гликопротеин (М) вируса с использованием кроличьей антипептидной сыворотки, клонированного М-гена в клетках Vero и вбакулови-русной системе. Нативный М-белок вируса включается в вирионы, является N-гли-козилированным и мигрирует с относительной подвижностью 27 К в полиакрила-мидном геле. М-белок, синтезированный рекомбинантным бакуловирусом, мигрирует с подвижностью 23 К, т. е. идентично подвижности дегликозилированного продукта. Показано, что 19 К полоса, определяемая в клетках, инфицированных вирусом ЭДП, но не в вирионах, представлена фрагментом М, из которого С-конец был удален. Ориентация М внутри оболочки вириона определялась также электронной микроскопией и с помощью иммунозолотой метки. Все данные подтверждают гипотезу о том, что вирус ЭДП должен быть отнесен к группе 1 коронавирусов.
Антигенная вариабельность и родство. В Прямой ИФ или ЭМ установлено отличие вируса ЭДП от ТГС и ГВЭС, коронавируса собак, вируса диареи неонатальных телят, вирусов ИБ, ИПК. Однако исследования, проведенные с помощью более чувствительных методов (иммуноблоттинг), показали, что вирус ЭДП имеет АГ-детерминанты, общие с вирусом ИПК. Эти детерминанты локализуются в нуклеокапсидном белке. Серологических различий вируса ЭДП не обнаружено. Изоляты из Германии и Франции серологически идентичны прототипному шт. CV777.
Культивирование. Высокоочищенный вирус получают после орального заражения поросят-гнотобиотов несколькими серийными промываниями тонкого кишечника, начиная с первых признаков диареи. Эта перфузия может продолжаться 12 ч, объем вирусного материала достигает 1,5 л с титром 104—105 ИД (для поросенка) в 1 мл. Адаптация вируса ЭДП к лабораторным моделям требует исключительных условий. Попытки культивирования различных изолятов ЭДП в кишечных или легочных эксплантатах плодов поросят или новорожденных поросят оказались безуспешными. Непостоянная репродукция вируса отмечалась в ряде культур клеток, как обработанных, так и необработанных трипсином или панкреатином. Однако линия Vera оказалась способной поддерживать серийное пассирование вируса. Рост вируса зависел от наличия трипсина в культуральной среде. ЦПД проявляется вакуолизацией и формированием синцитиев. Синцитий может содержать до 100 ядер. Кинетика роста характеризуется пиком титра вируса (105>5 БОЕ/мл) через 15 ч после заражения.
Вирус ЭДП передается, главным образом, с калом больных животных. Заражение в естественных условиях происходит орально. Орально-фекальный путь передачи инфекции главный, если не единственный.
Вспышки ЭДП на ферме часто встречаются в течение 4—5 дней после продажи или покупки поросят. Заражение возможно через контаминированный транспорт, обувь или другие контаминированные вирусом предметы. После вспышки на ферме вирус может исчезнуть или заболевание принимает энзоотическую форму.
Иммунитет и специфическая профилактика. Специфические средства и методы профилактики ЭДП в настоящее время не разработаны. Искусственное распространение вируса ЭДП среди взрослых свиноматок, возможно, стимулирует лактогенный иммунитет и укорачивает сроки переболевания на ферме. Санитарные меры предупреждают занос вируса ЭДП на ферму. Эпизоотологические исследования показали, что вирус ЭДП заносится на ферму главным образом (или только) с перемещающимися людьми или животными.