МИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОРМОВ В УНПК ЮФ «КРЫМСКИЙ АГРОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» НАУ

Приведены результаты микологических и токсикологических исследований кормов в УНПК ЮФ «КАТУ» НАУ. Из образцов разных кормов выделены следующие грибы: Stachybotrys Alternas, Aspergillus Fumigatus, Aspergillus Flavus, Rhizopus Nigricans, Alternaria Alternate, Mucor Racemosus, Penicillium. Слабо токсичными оказались Stachybotrys Alternas и Aspergillus Flavus.

Среди многообразия грибов, обсеменяющих корма, встречаются патогенные для человека и животных. При хранении кормов в зависимости от сезона года, видовой и количественный состав грибной флоры меняется, и при определённых условиях могут накапливаться различные микотоксины. Наличие микотоксинов в кормах является причиной снижения продуктивности животных, появлению в продуктах животноводства (например, в молоке) ядовитых веществ, нарушению репродуктивных способностей самцов и самок, а также вызывать заболевание животных со смертельным исходом [1,2,3,4].

Цель исследований: определить обсеменённость кормов спорами грибов в зависимости от сезона года и установить накопление в кормах микотоксинов.

Материал и методы исследований. Пробы кормов отбирали в соответствии с «Правилами отбора образцов патологического материала, крови, кормов, воды и пересылки их для лабораторных исследований» (утверждены Председателем государственного департамента ветеринарной медицины Украины от 15 апреля 1997 г., за № 15-14/III). Санитарно-микологические исследования кормов проводили в соответствии с «Методическими указаниями по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» (утверждены Председателем государственного департамента ветеринарной медицины Украины от 06 марта 1998 г., № 1514/73). Отбор проб проводили в три этапа: осенний период - октябрь 2004 г., зимний - декабрь 2004 г., весенний - апрель 2005 г (Табл. 1).

Образцы кормов изучали на средах Чапека и Сабуро, токсические свойства устанавливали на рыбках гуппи [5]. Для выделения грибов из сена и соломы, нарезали грубые корма ножницами, длиной около 2 см, в стерильную чашку Петри. Нарезанный корм пинцетом переносили на поверхность агара Чапека и располагали так, чтобы кусочки корма не соприкасались друг с другом. В три чашки Петри с питательной средой раскладывали по 10 кусочков сена или соломы. Из дерти, отрубей, первоначально готовили разбавление 1:1000 или 1:10000 (в зависимости от показателей органолептического анализа). Посев проводили сразу же после приготовления взвеси, не давая ей отстоятся. При разбавлении 1:1000 засевали 5 чашек, 1:10000 - 8 чашек Петри.

Таблица 1

Периоды исследования и виды исследуемых кормов

Результаты исследования: 1. Выделение и определение микромицетов.

1.1. Осенний период. Исследование соломы (проба №1). При посеве на агар Чапека образовывались колонии бархатистые, глубокоскладчатые, вначале белые, в последующем приобретали зеленый цвет. На обратной стороне чашке Петри - желтые.

При микроскопии обнаружены гифы, формирующие бесцветный мицелий. Гифы септированы, конидиеносцы короткие, гладкие, 5-8 мкм. шириной, в верхней части окрашены в зеленый цвет, отходят прямо от гиф. Верхушка конидиеносцев колбовидно расширена. Фиалиды одноярусные, густо расположенные. Конидии шаровидные, 2,5-3 мкм. в диаметре, окрашены в зеленый цвет.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Aspergillus fumigatus (аспергилл дымчатый).

Также на агаре Чапека образовывались черные бархатистые колонии. Гифы ветвящиеся, слабо септированные, вначале бледно-оливковые, позже оливково-бурые. Конидиеносцы разветвленные, конидиеносные ветви прямостоящие, вначале почти бесцветные, позже оливково-бурые, 60-85 × 3,0-3,5 мкм, несущие на концах мутовки фиолид.

Фиолиды собраны в группах по 5-8, булавовидные, серые, сросшиеся у основания. Конидии цилиндрические, щетинистые, темно окрашенные, зрелые конидии черного цвета, непрозрачные, бородавчатые. На каждой фиолиде 3-7 конидий, которые скучены на пучке фиолид.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Stachybotrys alternans (стахиботрис чередующийся).

Исследования соломы (проба №2). При посеве на среду Чапека выросли колонии грибов, по культуральным и морфологическим свойствам идентичные колониям Aspergillus fumigatus, полученным, при исследовании соломы пробы № 1.

Исследование отрубей пшеничных (проба №3). При посеве на среду Чапека образовались быстро растущие колонии, наползающие на стенки чашки Петри, рыхло-войлочные, 1-1,5 см. высотой; вначале оливково-зеленые, затем буровато-серые. Ризоиды разветвленные, темно-коричневые. Столоны хорошо выражены. Стилоспорангиеносцы прямые, бурые, отходят по 2-5 от шейки ризоида. Спорангиоспоры неправильно шаровидные, сильно угловатые, бледно-серые. Зигоспоры 80-100 мкм. в диаметре, темно-бурые, с низкими бородавчатыми выступами, образуется над субстратами и на его поверхности.

По морфологическим и культуральным свойствам, гриб был отнесен к роду Rhizopus, виду Rhizopus nigricans (ризопус чернеющий).

Исследование ячменя (проба №4). При посеве на агар Чапека образовывались колонии двух типов. Колонии первого типа - белые, нежнопаутинистые, быстро растущие колонии, при старении буреющие, рыхловойлочные, легко спадающиеся и легко разрывающиеся. Мицелий гриба - сильно разветвленная клетка, гифы несептированные, от мицелия ответвляются плодоносящие гифы - спорангиеносцы с шарообразными спорами 20-70 мкм. в диаметре, буроватыми просвечивающимися. Споры - почти шаровидные, 6-10 мкм., светло-желтые.

Этот гриб был отнесен к оомицетам, рода Mucor, виду Mucor racemosus (мукор кистевидный).

Колонии второго типа - быстро растущие, округлые, желтовато-зеленые колонии 2,5-3 см. в диаметре. На обратной стороне чашки - тускло-коричневые, мицелиальные сплетения тонкие. Конидиальные головки радиальные, конидиеносцы бесцветные, с толстой оболочкой. Вздутие в молодом возрасте продолговатое, позже - более или менее шаровидное. Фиалиды 1-2 ярусные, постоянно образуются на вздутиях. Конидии вначале эллиптические, затем, более или менее шаровидные, шиповатые 3-6 мкм. в диаметре.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Aspergillus flavus (аспергилл желтый).

Исследование сена люцерны (проба №5). На среде Чапека образовывались оливковые, пушистые колонии, в центре волнистые, зональные с мелкими каплями жидкости. Гифы буроватые, 3-6 мкм. толщиной. Конидиеносцы собраны в маленькие группы, ветвистые извилистые, с одной или несколькими конидиями. Конидии образуются в длинных цепочках, обратно грушевидные, с короткой цилиндрической шейкой, с несколькими поперечными и продольными перегородками.

По морфологическим и культуральным свойствам гриб был идентифицирован как Alternaria alternate (альтернария чередующаяся).

Исследование жмыха подсолнечного (проба №6). При посеве на среде Чапека образовывались серовато-зеленые колонии с желтоватыми каплями жидкости, радиально складчатые, снизу желтые. Мицелий и конидиеносцы септированные, многоклеточные. В верхней части, конидиеносец разветвлен, на концах его образуются стеригмы, от которых отшнуровываются четкообразные ряды конидий. Конидии шарообразные, зеленоватого цвета. Плодоносные споры - конидиеносцы, стеригмы и конидии напоминают кисть.

Этот гриб мы отнесли к классу аскомицетов, род Penicillium.

Исследование силоса вико-овсяного (проба №7). При посеве на среде Чапека образовывались колонии грибов, идентичные тем, которые были выделены из пробы №3 - Rhizopus nigricans.

1.2. Зимний период. При исследовании образцов кормов, отобранных в декабре 2003 года, обнаружены следующие микромицеты:

Солома (проба №1) - Aspergillus fumigatus;

Сено разнотравное (проба №2) - Aspergillus fumigatus;

Сено люцерновое (проба №3) - Stachybotrys alternans, Aspergillus fumigatus;

Сенаж (проба №4) - Mucor racemosus, Aspergillus fumigatus;

Отходы переработки сорго (проба №5); шрот (проба №6); дерть ячменная (проба №7); каша (проба №8) - во всех пробах обнаружен Mucor.

1.3. Весенний период. При исследовании образцов кормов, отобранных в апреле 2004 года, обнаружены следующие микромицеты:

Сено люцерновое (проба №1) - Penicillium;

Сено разнотравное (проба №2) - Mucor racemosus, Penicillium;

Ячмень (проба №3) - Aspergillus fumigatus;

Дерть (проба №4) - Aspergillus fumigatus;

Шрот (проба №5) - Mucor racemosus;

Силос (проба №6) - Rhizopus nigricans;

Силос (проба №7) - Mucor racemosus, Penicillium;

Каша (проба №8) - Mucor racemosus.

2. Определение обсемененности кормов спорами грибов. Общую обсемененность корма спорами грибов определяли после подсчета выросших колоний с учетом количества посеянного материала и степени разбавления. Число колоний на всех 5 (8) чашках суммировали, умножали на степень разбавления (1000; 10000) и делили на общее количество миллилитров посеянной взвеси (5), таким образом, получали количество диаспор гриба в одном грамме корма.

Формула для расчета:

, где

А - количество колоний, выросшие на 5 (8) чашках;

1000 - степень разведения;

В - количество миллилитров посеянной взвеси.

Для повышения достоверности полученных результатов и снижения вероятности ошибки, опыт повторяли 5 раз. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты определения интенсивности обсеменённости кормов спорами грибов (тысяч в 1 г.)

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о значительной обсеменённости кормов спорами грибов, среди которых могут быть и патогенные.

3. Определение токсичности кормов. Токсичность кормов определяли ускоренным методом, с использованием рыбок гуппи. Определяли токсичность всех видов плесневых грибов, выделенных при осеннем исследовании кормов. (Табл. 3)

Таблица 3

Результаты определения токсичности кормов в УНПК

Из таблицы 3 видно, что две пробы кормов, солома ячменная и ячмень обладают слабой токсичностью. Остальные пробы кормов оказались нетоксичными.

Обсуждение результатов исследования. В результате проведенной работы было установлено обсеменение отобранных образцов кормов различными видами микромицетов, при этом прослеживается динамика видового состава микрофлоры в зависимости от периода исследований.

Микрофлора кормов в первый период исследования была представлена сапрофитными организмами, включающими эпифитные (род Alternaria) и случайно попавшими плеснеобразующими грибами (Aspergillus fumigatus, Penicillium и др.).

Также был выделен опасный для здоровья животных токсигенный гриб-целлюлозоразрушитель Stachybotrys alternans развивающийся при хранении кормов с повышенной влажностью.

В процессе хранения кормов изменяется видовой и количественный состав грибной флоры. Эпифитная микрофлора и факультативные паразиты постепенно вытесняются «плесневыми» грибами. К таким грибам относятся представители, главным образом родов Aspergillus и Penicillium, а также мукоровые грибы рода Mucoraceae (Mucor racemosus, Rhizopus nigricans). Обычно они присутствуют и в доброкачественных кормах, однако активизируются лишь при благоприятных условиях, в результате возрастает их численность в корме и накапливаются различные микотоксины. Для появления токсических свойств в корме недостаточно одного лишь наличия содержащих токсины спор гриба (что встречается при так называемом заспорении кормов) в количествах, наблюдающихся в естественных условиях. Необходимы прорастание спор и развитие мицелия, приводящие к возрастанию массы грибницы, спор и накоплению токсинов, происходящих лишь при определенных условиях.

Использование пораженных микромицетами кормов клинической картины микотоксикозов не вызывает, однако в хозяйствах регистрируют животных с признаками гепатодистрофии и нарушения пищеварительной системы (гипотония, атония), что может быть результатом длительного накопления микотоксинов в малых дозах в организме животных.

При определении токсичности кормов было выявлено 2 пробы - солома ячменная и ячмень - обладающие слабой токсичностью. По результатам определения обсеменнености этих проб была получена высокая обсемененность. Остальные корма оказались нетоксичными.

Полученные результаты следует учитывать при заготовке, хранении и использовании кормов УНПК.

Выводы: 1. Все исследованные корма обсемененны микромицетами, среди которых имеются токсинообразующие: рода Aspergillus, Penicillium, Stachybotrys, Mucor;

2. Грибы Stachybotrys alternans и Aspergillus flavus выделенные из ячменной соломы и зерна ячменя обладают слабой токсичностью.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Павленко М., Новожицкая Ю. Санитарно-гигиеническое значение полевых грибов, повреждающих зерно во время вегетации // Ветеринарная медицина Украины. - 1998. - № 10. - С 41.

2. Харченко С., Шуба В., Куц Н., Tea E. Токсичные грибы на кормах -возбудители коетоксикоза животных и птицы // Ветеринарная медицина Украины. -1997. -№3. - С 27-30.

3. Кулинич М., Саморай М. Относительно фузариотоксикоза птицы // Ветеринарная медицина Украины. - 2000. - № 12. - С 31-32.

4. Погребняк Л., Грачев С., Корзуненко А., Ображей А. Хронический экспериментальный зеараленотоксикоз у телят // Ветеринарная медицина Украины. - 2000. - № 12. - С.32-34.

5. Лещенко В. М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. -М.: Медицина, 1997. - 128 с.

УДК:619:[528.28:615.9]:636.085.3

Barabash A. F., Polischuk S. V., Kucenko Y. P., Glinka D. I. MYCOTOXICOLOGICAL FEATURE PROVENDER IN SCHOLASTIC SCIENTIFICALLY – PRODUCTION COMPLEX OF SOUTHERN BRANCH CRIMEAN AGROTECHNOLOGICAL UNIVERSITY OF NAU.

The Broughted results mycological and toxicological studies is provender in scholastic scientifically - production complex of Southern Branch Crimean Agrotechnological University of NAU. From sample of the miscellaneous provender выде-flaxes following mushrooms: Stachybotrys alternas, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Rhizopus nigricans, Alternaria alternate, Mucor racemosus, Penicillium. Weakly toxic turned out to be Stachybotrys alternas and Aspergillus flavus.

Барабаш А. Ф. – кандидат вет. наук, профессор (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Полищук С. В. – кандидат биол. наук, доцент (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Куценко Ю. П. – кандидат вет. наук, доцент (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Глинка Д. И. - ассистент (ЮФ «КАТУ» НАУ)