МИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОРМОВ В УНПК ЮФ «КРЫМСКИЙ АГРОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» НАУ

 

Приведены результаты микологических и токсикологических исследований кормов в УНПК ЮФ «КАТУ» НАУ. Из образцов разных кормов выделены следующие грибы: Stachybotrys Alternas, Aspergillus Fumigatus, Aspergillus Flavus, Rhizopus Nigricans, Alternaria Alternate, Mucor Racemosus, Penicillium. Слабо токсичными оказались Stachybotrys Alternas и Aspergillus Flavus.

Среди многообразия грибов, обсеменяющих корма, встречаются патогенные для человека и животных. При хранении кормов в зависимости от сезона года, видовой и количественный состав грибной флоры меняется, и при определённых условиях могут накапливаться различные микотоксины. Наличие микотоксинов в кормах является причиной снижения продуктивности животных, появлению в продуктах животноводства (например, в молоке) ядовитых веществ, нарушению репродуктивных способностей самцов и самок, а также вызывать заболевание животных со смертельным исходом [1,2,3,4].

Цель исследований: определить обсеменённость кормов спорами грибов в зависимости от сезона года и установить накопление в кормах микотоксинов.

Материал и методы исследований. Пробы кормов отбирали в соответствии с «Правилами отбора образцов патологического материала, крови, кормов, воды и пересылки их для лабораторных исследований» (утверждены Председателем государственного департамента ветеринарной медицины Украины от 15 апреля 1997 г., за № 15-14/III). Санитарно-микологические исследования кормов проводили в соответствии с «Методическими указаниями по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» (утверждены Председателем государственного департамента ветеринарной медицины Украины от 06 марта 1998 г., № 1514/73). Отбор проб проводили в три этапа: осенний период - октябрь 2004 г., зимний - декабрь 2004 г., весенний - апрель 2005 г (Табл. 1).

Образцы кормов изучали на средах Чапека и Сабуро, токсические свойства устанавливали на рыбках гуппи [5]. Для выделения грибов из сена и соломы, нарезали грубые корма ножницами, длиной около 2 см, в стерильную чашку Петри. Нарезанный корм пинцетом переносили на поверхность агара Чапека и располагали так, чтобы кусочки корма не соприкасались друг с другом. В три чашки Петри с питательной средой раскладывали по 10 кусочков сена или соломы. Из дерти, отрубей, первоначально готовили разбавление 1:1000 или 1:10000 (в зависимости от показателей органолептического анализа). Посев проводили сразу же после приготовления взвеси, не давая ей отстоятся. При разбавлении 1:1000 засевали 5 чашек, 1:10000 - 8 чашек Петри.

Таблица 1

Периоды исследования и виды исследуемых кормов

№ пробы	Период исследования
I осенний (октябрь)	II зимний (декабрь)	III весенний (апрель)
1.	Солома ячменная	Солома	Сено разнотравное
2.	Солома ячменная	Сено разнотравное	Сено люцерновое
3.	Отруби пшеничные	Сено люцерновое	Ячмень
4.	Сено люцерновое	Сенаж	Дерть ячменная
5.	Ячмень	Отходы переработки	Шрот
		Сорго	Подсолнечниковый
6.	Жмых	Шрот	Силос
	Подсолнечниковый	Подсолнечниковый
7.	Силос вико-овсяный	Дерть ячменная	Каша
8.		Каша

Результаты исследования: 1. Выделение и определение микромицетов.

1.1. Осенний период. Исследование соломы (проба №1). При посеве на агар Чапека образовывались колонии бархатистые, глубокоскладчатые, вначале белые, в последующем приобретали зеленый цвет. На обратной стороне чашке Петри - желтые.

При микроскопии обнаружены гифы, формирующие бесцветный мицелий. Гифы септированы, конидиеносцы короткие, гладкие, 5-8 мкм. шириной, в верхней части окрашены в зеленый цвет, отходят прямо от гиф. Верхушка конидиеносцев колбовидно расширена. Фиалиды одноярусные, густо расположенные. Конидии шаровидные, 2,5-3 мкм. в диаметре, окрашены в зеленый цвет.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Aspergillus fumigatus (аспергилл дымчатый).

Также на агаре Чапека образовывались черные бархатистые колонии. Гифы ветвящиеся, слабо септированные, вначале бледно-оливковые, позже оливково-бурые. Конидиеносцы разветвленные, конидиеносные ветви прямостоящие, вначале почти бесцветные, позже оливково-бурые, 60-85 × 3,0-3,5 мкм, несущие на концах мутовки фиолид.

Фиолиды собраны в группах по 5-8, булавовидные, серые, сросшиеся у основания. Конидии цилиндрические, щетинистые, темно окрашенные, зрелые конидии черного цвета, непрозрачные, бородавчатые. На каждой фиолиде 3-7 конидий, которые скучены на пучке фиолид.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Stachybotrys alternans (стахиботрис чередующийся).

Исследования соломы (проба №2). При посеве на среду Чапека выросли колонии грибов, по культуральным и морфологическим свойствам идентичные колониям Aspergillus fumigatus, полученным, при исследовании соломы пробы № 1.

Исследование отрубей пшеничных (проба №3). При посеве на среду Чапека образовались быстро растущие колонии, наползающие на стенки чашки Петри, рыхло-войлочные, 1-1,5 см. высотой; вначале оливково-зеленые, затем буровато-серые. Ризоиды разветвленные, темно-коричневые. Столоны хорошо выражены. Стилоспорангиеносцы прямые, бурые, отходят по 2-5 от шейки ризоида. Спорангиоспоры неправильно шаровидные, сильно угловатые, бледно-серые. Зигоспоры 80-100 мкм. в диаметре, темно-бурые, с низкими бородавчатыми выступами, образуется над субстратами и на его поверхности.

По морфологическим и культуральным свойствам, гриб был отнесен к роду Rhizopus, виду Rhizopus nigricans (ризопус чернеющий).

Исследование ячменя (проба №4). При посеве на агар Чапека образовывались колонии двух типов. Колонии первого типа - белые, нежнопаутинистые, быстро растущие колонии, при старении буреющие, рыхловойлочные, легко спадающиеся и легко разрывающиеся. Мицелий гриба - сильно разветвленная клетка, гифы несептированные, от мицелия ответвляются плодоносящие гифы - спорангиеносцы с шарообразными спорами 20-70 мкм. в диаметре, буроватыми просвечивающимися. Споры - почти шаровидные, 6-10 мкм., светло-желтые.

Этот гриб был отнесен к оомицетам, рода Mucor, виду Mucor racemosus (мукор кистевидный).

Колонии второго типа - быстро растущие, округлые, желтовато-зеленые колонии 2,5-3 см. в диаметре. На обратной стороне чашки - тускло-коричневые, мицелиальные сплетения тонкие. Конидиальные головки радиальные, конидиеносцы бесцветные, с толстой оболочкой. Вздутие в молодом возрасте продолговатое, позже - более или менее шаровидное. Фиалиды 1-2 ярусные, постоянно образуются на вздутиях. Конидии вначале эллиптические, затем, более или менее шаровидные, шиповатые 3-6 мкм. в диаметре.

По культуральным и морфологическим свойствам гриб был идентифицирован как Aspergillus flavus (аспергилл желтый).

Исследование сена люцерны (проба №5). На среде Чапека образовывались оливковые, пушистые колонии, в центре волнистые, зональные с мелкими каплями жидкости. Гифы буроватые, 3-6 мкм. толщиной. Конидиеносцы собраны в маленькие группы, ветвистые извилистые, с одной или несколькими конидиями. Конидии образуются в длинных цепочках, обратно грушевидные, с короткой цилиндрической шейкой, с несколькими поперечными и продольными перегородками.

По морфологическим и культуральным свойствам гриб был идентифицирован как Alternaria alternate (альтернария чередующаяся).

Исследование жмыха подсолнечного (проба №6). При посеве на среде Чапека образовывались серовато-зеленые колонии с желтоватыми каплями жидкости, радиально складчатые, снизу желтые. Мицелий и конидиеносцы септированные, многоклеточные. В верхней части, конидиеносец разветвлен, на концах его образуются стеригмы, от которых отшнуровываются четкообразные ряды конидий. Конидии шарообразные, зеленоватого цвета. Плодоносные споры - конидиеносцы, стеригмы и конидии напоминают кисть.

Этот гриб мы отнесли к классу аскомицетов, род Penicillium.

Исследование силоса вико-овсяного (проба №7). При посеве на среде Чапека образовывались колонии грибов, идентичные тем, которые были выделены из пробы №3 - Rhizopus nigricans.

1.2. Зимний период. При исследовании образцов кормов, отобранных в декабре 2003 года, обнаружены следующие микромицеты:

Солома (проба №1) - Aspergillus fumigatus;

Сено разнотравное (проба №2) - Aspergillus fumigatus;

Сено люцерновое (проба №3) - Stachybotrys alternans, Aspergillus fumigatus;

Сенаж (проба №4) - Mucor racemosus, Aspergillus fumigatus;

Отходы переработки сорго (проба №5); шрот (проба №6); дерть ячменная (проба №7); каша (проба №8) - во всех пробах обнаружен Mucor.

1.3. Весенний период. При исследовании образцов кормов, отобранных в апреле 2004 года, обнаружены следующие микромицеты:

Сено люцерновое (проба №1) - Penicillium;

Сено разнотравное (проба №2) - Mucor racemosus, Penicillium;

Ячмень (проба №3) - Aspergillus fumigatus;

Дерть (проба №4) - Aspergillus fumigatus;

Шрот (проба №5) - Mucor racemosus;

Силос (проба №6) - Rhizopus nigricans;

Силос (проба №7) - Mucor racemosus, Penicillium;

Каша (проба №8) - Mucor racemosus.

2. Определение обсемененности кормов спорами грибов. Общую обсемененность корма спорами грибов определяли после подсчета выросших колоний с учетом количества посеянного материала и степени разбавления. Число колоний на всех 5 (8) чашках суммировали, умножали на степень разбавления (1000; 10000) и делили на общее количество миллилитров посеянной взвеси (5), таким образом, получали количество диаспор гриба в одном грамме корма.

Формула для расчета:

, где

А - количество колоний, выросшие на 5 (8) чашках;

1000 - степень разведения;

В - количество миллилитров посеянной взвеси.

Для повышения достоверности полученных результатов и снижения вероятности ошибки, опыт повторяли 5 раз. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты определения интенсивности обсеменённости кормов спорами грибов (тысяч в 1 г.)

№ п/п	Вид корма	Споры грибов	M ± m
1	Солома ячменная	Stachybotrys alternans	73,6 ± 3,1
Aspergillus fumigatus	121,8 ± 3,3
2	Отруби пшеничные	Rhizopus nigricans	780,0 ± 14,3
3	Сено люцерны	Alternaria alternate	18,8 ± 3,7
4	Силос вико-овсяный	Rhizopus nigricans	9,2 ± 2,3
5	Ячмень	Aspergillus flavus	1256,0 ± 61,6
Mucor racemosus	1748,0 ± 118,8
6	Жмых подсолнечный	Penicillium	496,0 ± 14,7

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о значительной обсеменённости кормов спорами грибов, среди которых могут быть и патогенные.

3. Определение токсичности кормов. Токсичность кормов определяли ускоренным методом, с использованием рыбок гуппи. Определяли токсичность всех видов плесневых грибов, выделенных при осеннем исследовании кормов. (Табл. 3)

Таблица 3

Результаты определения токсичности кормов в УНПК

Вид корма	Род (вид)грибов	Количество подопытных гуппи, шт.	Количество погибших гуппи, шт.	Оценка токсичности
Солома ячменная	Stachybotrys alternans Aspergillus fumigatus	5	3	Слаботоксичный
Отруби пшеничные	Rhizopus nigricans	5	-	Нетоксичный
Сено люцерны	Alternaria alternate	5	-	Нетоксичный
Ячмень	Aspergillus flavus Mucor racemosus	5	2	Слаботоксичный
Жмых подсолнечниковый	Penicillium	5	-	Нетоксичный
Силос вико - овсяный	Rhizopus nigricans	5	-	Нетоксичный

Из таблицы 3 видно, что две пробы кормов, солома ячменная и ячмень обладают слабой токсичностью. Остальные пробы кормов оказались нетоксичными.

Обсуждение результатов исследования. В результате проведенной работы было установлено обсеменение отобранных образцов кормов различными видами микромицетов, при этом прослеживается динамика видового состава микрофлоры в зависимости от периода исследований.

Микрофлора кормов в первый период исследования была представлена сапрофитными организмами, включающими эпифитные (род Alternaria) и случайно попавшими плеснеобразующими грибами (Aspergillus fumigatus, Penicillium и др.).

Также был выделен опасный для здоровья животных токсигенный гриб-целлюлозоразрушитель Stachybotrys alternans развивающийся при хранении кормов с повышенной влажностью.

В процессе хранения кормов изменяется видовой и количественный состав грибной флоры. Эпифитная микрофлора и факультативные паразиты постепенно вытесняются «плесневыми» грибами. К таким грибам относятся представители, главным образом родов Aspergillus и Penicillium, а также мукоровые грибы рода Mucoraceae (Mucor racemosus, Rhizopus nigricans). Обычно они присутствуют и в доброкачественных кормах, однако активизируются лишь при благоприятных условиях, в результате возрастает их численность в корме и накапливаются различные микотоксины. Для появления токсических свойств в корме недостаточно одного лишь наличия содержащих токсины спор гриба (что встречается при так называемом заспорении кормов) в количествах, наблюдающихся в естественных условиях. Необходимы прорастание спор и развитие мицелия, приводящие к возрастанию массы грибницы, спор и накоплению токсинов, происходящих лишь при определенных условиях.

Использование пораженных микромицетами кормов клинической картины микотоксикозов не вызывает, однако в хозяйствах регистрируют животных с признаками гепатодистрофии и нарушения пищеварительной системы (гипотония, атония), что может быть результатом длительного накопления микотоксинов в малых дозах в организме животных.

При определении токсичности кормов было выявлено 2 пробы - солома ячменная и ячмень - обладающие слабой токсичностью. По результатам определения обсеменнености этих проб была получена высокая обсемененность. Остальные корма оказались нетоксичными.

Полученные результаты следует учитывать при заготовке, хранении и использовании кормов УНПК.

Выводы: 1. Все исследованные корма обсемененны микромицетами, среди которых имеются токсинообразующие: рода Aspergillus, Penicillium, Stachybotrys, Mucor;

2. Грибы Stachybotrys alternans и Aspergillus flavus выделенные из ячменной соломы и зерна ячменя обладают слабой токсичностью.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Павленко М., Новожицкая Ю. Санитарно-гигиеническое значение полевых грибов, повреждающих зерно во время вегетации // Ветеринарная медицина Украины. - 1998. - № 10. - С 41.

2. Харченко С., Шуба В., Куц Н., Tea E. Токсичные грибы на кормах -возбудители коетоксикоза животных и птицы // Ветеринарная медицина Украины. -1997. -№3. - С 27-30.

3. Кулинич М., Саморай М. Относительно фузариотоксикоза птицы // Ветеринарная медицина Украины. - 2000. - № 12. - С 31-32.

4. Погребняк Л., Грачев С., Корзуненко А., Ображей А. Хронический экспериментальный зеараленотоксикоз у телят // Ветеринарная медицина Украины. - 2000. - № 12. - С.32-34.

5. Лещенко В. М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. -М.: Медицина, 1997. - 128 с.

УДК:619:[528.28:615.9]:636.085.3

Barabash A. F., Polischuk S. V., Kucenko Y. P., Glinka D. I. MYCOTOXICOLOGICAL FEATURE PROVENDER IN SCHOLASTIC SCIENTIFICALLY – PRODUCTION COMPLEX OF SOUTHERN BRANCH CRIMEAN AGROTECHNOLOGICAL UNIVERSITY OF NAU.

The Broughted results mycological and toxicological studies is provender in scholastic scientifically - production complex of Southern Branch Crimean Agrotechnological University of NAU. From sample of the miscellaneous provender выде-flaxes following mushrooms: Stachybotrys alternas, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Rhizopus nigricans, Alternaria alternate, Mucor racemosus, Penicillium. Weakly toxic turned out to be Stachybotrys alternas and Aspergillus flavus.

Барабаш А. Ф. – кандидат вет. наук, профессор (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Полищук С. В. – кандидат биол. наук, доцент (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Куценко Ю. П. – кандидат вет. наук, доцент (ЮФ «КАТУ» НАУ)

Глинка Д. И. - ассистент (ЮФ «КАТУ» НАУ)