Несмотря на то что живые вакцины широко используют в ветеринарной практике, в последние годы все большее значение приобретают инактивированные препараты в силу своей безопасности. Это необходимо учитывать при вакцинопрофилактике болезней, возбудители которых способны длительно персистировать в организме животных в скрытой форме, затрудняющей их диагностику [1—4, б—8].

В настоящее время для изготовления инактивированных вакцин против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС) используют первичнотрипсинизированные культуры клеток (почки теленка, бычьего тестикула), вирулентный штамм вируса 4016 с относительно невысоким уровнем накопления в этих клеточных культурах (6,0—-6,5 1дТЦД5о/мл). Все это обусловливает трудоемкость технологии изготовления клеточного и вирусного сырья и определенным образом влияет на эффективность вакцинного препарата.

Цель исследований — разработка новой инактивированной вакцины против ИРТ КРС на основе аттенуированного штамма и более перспективной технологии, основанной на применении продуктивной перевиваемой культуры клеток и роллерного способа выращивания вируса.

Материалы и методы. В работе использовали перевиваемую культуру клеток МДВК; вакцинный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС (активность 7,25—8,0 1дТЦД5о/мл); вирулентный штамм 4016 этого вируса (активность 6,0—6,5 1дТЦД адъюванты: минеральное масло, гидроокись алюминия с сапонином и аэросил.

Культуру клеток и вирус выращивали во вращающихся 3-литровых сосудах на роллерных установках (производительность 50 л вируссодержащей суспензии за цикл) по разработанной во ВНИИВВиМ методике. Вирусное сырье инактивировали теотропином или сернокислой медью в конечной концентрации 0,1 % при 37±1 °С в течение 7 сут. Полноту инактивации вируса оценивали в трех последовательных пассажах культуры клеток МДВК с интервалом 5 сут.

Для изготовления вакцины к инактивированному антигенсодержащему материалу в качестве адъювантов добавляли минеральное масло, или ГОА с сапонином, или аэросил. Вакцину проверяли на стерильность, полноту инактивации, безвредность, антигенную и иммуногенную активность.

Для оценки безвредности каждую серию вакцины вводили взрослым кроликам внутримышечно по 3,0 мл и в течение 7 сут наблюдали за клиническим состоянием животных.

5о/мл); инактиватор теотропин Антигенную и иммуногенную активность контролировали на взрослых кроликах и б—8-месячных телятах. Для этого кроликов двукратно вакцинировали внутримышечно в дозах 0,5 и 1 мл, а телят — подкожно в дозах 1, 2 и 5 мл с интервалом 14 дней. Через 14 дней после повторной прививки в сыворотке крови животных определяли уровень вируснейтрализующих антител, а телят подвергали контрольному заражению вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС.

Результаты исследований и обсуждение. Данные по сравнительной оценке уровня накопления вакцинного и эпизоотического штаммов вируса ИРТ КРС с использованием соответственно перевиваемых и первично трипсинизированных клеток, роллерного и стационарного способов выращивания, а также технологии изготовления инактивированной вакцины из указанных штаммов представлены в таблице 1.

Препараты из вакцинного штамма, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по экономическим и технологическим показателям значительно превосходили аналог из эпизоотического штамма 4016. При этом теотропин в качестве инактиватора обеспечивал экологическую безопасность убитой вакцины из штамма ТК-А.

Оценка иммуногенности различных образцов инактивированной вакцины против ИРТ КРС показала преимущество препаратов из вакцинного штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по сравнению с таковой из вирулентного штамма 4016 (табл. 2). Препараты из вакцинного штамма в дозе 2,04-2,0 мл обеспечивали защиту привитых животных в течение 12 мес, а из эпизоотического даже в большей дозе 10,04-10,0 мл — не бо Иммунный ответ у телят и кроликов изучали, прививая их инактивированной вакциной против ИРТ КРС из штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК в разных дозах (табл. 3).

У телят и кроликов, привитых двукратно инактивированной вакциной против ИРТ КРС из аттенуированного штамма ТК-А, титр вируснейтрализующих антител в сыворотке крови был одинаковым (см. табл. 3).

Минеральное масло при введении его в дозе 5,0 мл вызывало у некоторых телят на месте инъекции образование припухлости диаметром до 10 см при удовлетворительном общем состоянии животных. В производственных условиях такие осложнения наблюдали у 25— 30 % привитого скота, переходящие в отдельных случаях в гнойно-некротические абсцессы. Данное обстоятельство побудило нас продолжить работу по снижению реактогенности (местной реакции) масляной вакцины и одновременно искать другие эффективные и безвредные адъюванты.

При применении масляной вакцины в более низких дозах (1,0 и 2,0 мл) местная реакция на введение препарата была слабой или умеренной, иммунный ответ у привитых животных не снижался.

В производственных условиях опытные образцы указанной вакцины, хранившейся 1 год при 2—8 °С, в дозах 1,0 и 2,0 мл вызывали у животных на месте введения препарата умеренную или слабую реакцию и обеспечивали формирование напряженного иммунитета продолжительностью 12 мес.

После иммунизации телят инактивированной вакциной против ИРТ КРС с ГОА и сапонином (срок хранения 1 год при 2--80С) в дозах 5,0 и 2,0 мл общее состояние их было удовлетворительным, отмечали слабую местную реакцию, напряженный иммунитет сохранялся 12 мес.

При заражении иммунизированных и контрольных животных вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС первые были устойчивы к данному возбудителю, а у непривитых отмечали повышение температуры тела до 41,0°С, слюнотечение, конъюнктивит и другие признаки, характерные для ИРТ КРС.

Максимальное накопление вируснейтрализующих антител регистрировали при двукратной иммунизации животных инактивированной вакциной против ИРТ КРС с интервалом 14—28 дней (табл. 4). Результаты опытов также свидетельствуют о том, что кроликов можно использовать в качестве лабораторной модели для контроля иммуногенности (по сероконверсии) инактивированной вакцины против ИРТ КРС.

Заключение. Разработана перспективная технология изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС, отличающаяся экономичностью, высокой иммуногенностью и безопасностью получаемого препарата. Эффективность ее основана на использовании вакцинного штамма ТК-А, продуктивной перевиваемой линии клеток МДВК и роллерного метода выращивания, что исключает стадию концентрирова-ния вирусного сырья и делает производство инактивирован-ной вакцины против ИРТ КРС экономичным.

Н. И. ЗАКУТСКИЙ, В. И. ЖЕСТЕРЕВ, И. Ф. ВИШНЯКОВ, Л. Д. КОНАКОВА, Л. И. АНИСИМОВА, А. А. ШЕВЧЕНКО ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии