В связи с глобальным нарушением экологии, в том числе и Мирового океана, в результате жизнедеятельности человека наблюдается резкое снижение численности морских млекопитающих, в частности Сивуча (1,2,3). Ситуация приняла настолько серьезный оборот, что этот вид в начале 90-х годов в России и в США сочли необходимым включить в список животных, состояние численности которых стало угрожающим. Кроме того, в США была принята и выполняется по сей день специальная Программа по изучению и восстановлению численности вида до безопасного состояния. Среди возможных причин снижения численности этого вида морских млекопитающих можно назвать: загрязнение моря токсическими веществами (нефть и нефтепродукты, ДДТ, соли тяжелых металлов и т. д.), уменьшение кормовой базы за счет увеличения промысла рыбы, повышение микробной обсемененности морской воды патогенами наземных млекопитающих и человека (попадающими в море с канализационными и аграрными стоками), что может приводить к возникновению вспышек инфекционных заболеваний в природных популяциях морских животных; нарушение иммунных функций организма под воздействием стресса, токсикантов, длительных болезней и др.; снижение уровня рождаемости и выживания приплода; генетически обусловленные нарушения (инбридинг, врожденные заболевания и др.).
В настоящее время вопросы инфекционных патологий у ластоногих, в частности сивуча, изучены недостаточно. Поэтому остается актуальным изучение нормальной микрофлоры организма дикого Сивуча, а так же возможных возбудителей заболеваний этого вида морских млекопитающих.
При обзоре литературных данных, касающихся данной темы исследования выяснилось, что изучение микробной обсемененности организма щенков и взрослых особей Сивуча, а так же серологические исследования проводились и ранее (4,5,6,7). Так Calkins D. C. and Goodwin E. в своей работе указывают на обнаружение в сыворотке крови 2% исследованных животных антитела к Leptospira interrogans серогрупп Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Bratislava, а так же антител к Chlamydia psitacci. Spraker Terry R. at all при бактериологических исследованиях материала от живых и павших Сивучей в разных случаях изолировали Edwardsiella tarda, Listeria sp., Streptococcus sp., Staphylococcus sp – от живых животных; Escherichia coli, Streptococcus sp., Salmonella sp. – из внутренних органов павшего животного и Staphylococcus sp., E. coli, Streptococcus sp., Edwardsiella tarda, Pseudomonas sp., Enterobacter sp., Provendencia/Morganella sp., Chlamydia sp., Enterococcus faecalis, Vibrio fluvialis, Serratia marcescens – из абортированных плодов.
Литературных данных о микробиологических исследованиях Сивуча, обитающего на Российской территории, мы не обнаружили. Отсутствуют сведения и о биологических особенностях микрофлоры, изолируемой от ластоногих. Поэтому в настоящей работе нами была поставлены следующие цели: изучить состав микробных ассоциаций организма щенков сивуча, в том числе биологические свойства микрофлоры.
Данная работа проводилась на кафедре микробиологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И.Скрябина. Отбор проб осуществлялся в июне-июле 2004 г. на Камчатке (мыс Козлов) и Командорских островах (о. Медный, Россия).
В июне 2004 года был отобран материал для бактериологических исследований от щенков сивуча с двух лежбищ: о. Медный и м. Козлов. Всего изучено 230 проб от 46 щенков. Примерный возраст животных варьировал от 2 до 5 недель. Щенки обследовались в ранний постнатальный период жизни (подсосный период).
Отбор материала осуществляли от живых животных (прижизненно). При отборе проб для микробиологических исследований не было необходимости проводить общую анестезию щенков, животных лишь фиксировали на фанерном «щите». Материал отбирали с помощью стерильных тампонов из дакрона и хлопка, которые сразу помещали в коллекторы с транспортной средой, полужидкой консистенции, содержащей активированный уголь. Взятие мазков производили из анального отверстия, наружных половых органов (влагалище – у самок и препуций – у самцов), с конъюнктивы, из ротовой полости и носовой полости. У некоторых особей отмечали наличие кожных поражений и абсцессов, в таких случаях брали мазки из поражений и гнойное содержимое. Помимо этого осуществляли взятие мазков с конъюнктивы на предметные стекла для первичной микроскопии, которые фиксировали 96% этанолом.
Бактериологическое исследование отобранного материала осуществляли по общепринятым методикам. Следует отметить, что первичные посевы материала на ряд питательных сред (МПА, кровяной МПА, Сабуро, Эндо), а так же микроскопию мазков проводили в полевой лаборатории. Дальнейшие исследования проводились на кафедре.
У выделенных микроорганизмов изучали морфологию, тинкториальные, культуральные, биохимические свойства, антигенную структуру, факторы патогенности.
В результате проведенных исследований микроорганизмы были выделены из материала всех обследованных щенков. Нами были идентифицированы до вида следующие микроорганизмы: Streptococcus parauberis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Hafnia alvei, Serratia marcescens, Proteus penneri, Proteus vulgaris. Первичные посевы осуществлялись сразу на несколько различных по составу питательных сред для начальной дифференциации. При этом в 100% случаев рост бактерий отмечали на кровяном мясо-пептонном агаре, 97% - на среде Эндо и в 97% - на МПА. На первом этапе исследования были проведены в полевой лаборатории на судне, где посевы осуществлялись через 3-5 часов после отбора. Однако в связи с невозможностью проведения последующей диагностики материал был отправлен в стационарную бактериологическую лабораторию, и в данном случае посевы были произведены через 6 суток после отбора. При этом мы отметили, что соотношение и количество видов микроорганизмов различалось. Так при посеве не позднее 5-ти часов после взятия общее количество выросших колоний было меньше, колонии по большей части располагались отдельно и соотношение колоний грампозитивных и грамнегативных бактерий было примерно равным. В то время как в посевах сделанных позднее (из того же материала) мы наблюдали «сливной рост» − практически отсутствие отдельных колоний, значительное преобладание грамнегативных микроорганизмов.
Микрофлора каждого исследованного щенка была представлена не менее чем двумя видами бактерий. При этом от 97,82% особей были изолированы бактерии семейства Enterobacteriaceae, представленные видами Escherichia coli, которые были изолированы от 71,74% щенков, Hafnia alvei-47,83% щенков, Serratia marcescens − 54,35% щенков, Proteus penneri − 17,39% щенков, Proteus vulgaris − 26,09% щенков. Наибольшее количество культур энтеробактерий мы изолировали из анального отверстия, наружных половых органов, ротовой и носовой полостей.
От 39,13% щенков сивуча были выделены Staphylococcus epidermidis. От 43,48% − Streptococcus parauberis. Стрептококки и стафилококки были выделены в основном из носовой полости, гениталий, абсцессов, реже из ротовой полости и ануса. Необходимо отметить, что в посевах гнойного содержимого абсцессов или кожных поражений стафилококки или стрептококки изолировались в чистых культурах либо в ассоциации друг с другом.
При изучении факторов патогенности выделенных бактерий выяснилось, что стрептококки и 12 изолятов кишечной палочки оказались вирулентными для белых мышей как при подкожном так и при внутрибрюшинном заражении, а так же проявляли гемолитические свойства по отношении к эритроцитам барана и крупного рогатого скота (β-гемолиз). Все культуры выделенных стафилококков проявляли b-гемолиз на кровяном агаре с эритроцитами барана и КРС. Эти микроорганизмы оказались авирулентными для белых мышей, однако у 9 культур была обнаружена лецитиназа а у 4 культур – плазмокоагулаза.
На основании полученных результатов сделаны выводы:
1. При исследовании материала от щенков Сивуча (Eumetopias jubatus) с Командорских островов (репродуктивных лежбищ о. Медный и м. Козлова) в 100% случаев были выделены различные микроорганизмы.
2. Микрофлора щенков была представлена Streptococcus parauberis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Hafnia alvei, Serratia marcescens, Proteus penneri, Proteus vulgaris.
3. При исследовании факторов патогенности вирулентными для белых мышей оказались изоляты стрептококков, кишечной палочки, протея; гемолитическими свойствами обладали все выделенные стафилококки, стрептококки, эшерихии; токсигенностью – эшерихии и стафилококки.
4. Патогенность выделенных стрептококков, стафилококков и эшерихий позволяет считать их возможной причиной инфекционных заболеваний у щенков Сивуча.
Литература:
1. Бурканов В. Н. Динамика и современное состояние численности сивуча в водах России, 1989-1999 гг.// Мат-лы международной конференции: «Морские млекопитающие Голарктики». – Архангельск, 2000г. – С. 56-65.
2. Задальский С. В. Пространственное размещение и структура летних лежбищ сивучей (Eumetopias jubatus Schreb., 1776) в северной части Охотского моря и их численность. // Мат-лы международной конференции: «Морские млекопитающие Голарктики». – Архангельск, 2000г. – С. 123-126.
3. Лафлин Т. Р., Фриц Л. Тенденции снижения численности сивучей западной Аляски и управление морским промыслом. // Материалы международной конференции: ”Морские млекопитающие Голарктики”. – Архангельск, 2000 г. – С. 213-216.
4. Calkins, D. S. and E. Goodwin. Investigation of the declining sea lion population in the Gulf of Alaska. Avial. Alaska Dept. Fish and game, 333 Raspberry Road, Anchorage, AK 99518, 1988. – 76 p.
5. Dunn J. L. Bacterial and micotic diseases of cetaceans and pinnipeds. // In. Dierauf L. A. (ed.). CRC Handbook of Marine Mammal Medicine: Health, Disease and Rehabilitation. CRC Press. Boca Raton, Florida. – p. 73-87.
6. Smith A. W., C. M. Prato, W. G. Gilmartin, R. J. Brown, and M. C. Keyes. A preliminary report on potenciale pathogenic microbiological agents recently isolated from pinnipeds. J. of Wildl. Diseases, 1974. – 10:54-59
7. Spraker Terry R., Denise Bradley Investigations into the health status of Steller Sea Lions, Eumetopias jubatus, from 1992 to 1995. Veterinary Diagnostic Laboratory Colorado State University Fort Collins, CO 80523. – p. 88-108.
Денисенко Т. Е.