В нашей стране используется один основной метод криоконсервации спермы жеребцов – это замораживание спермы в больших объёмах (20 мл). Основу этой технологии составляет ЛХЦЖ среда, разработанная Науменковым А. И. и Романьковой Н. К. в 1969 году. Также существуют и малообъёмные отечественные технологии (5мл): одна технология – с центрифугированием эякулята (Фомина Е. Л.,1990), а другая – с помощью диализа (Науменкова В. А., Андрюшин В. В., 1993). Однако, предпочтение отдаётся замораживанию в больших объёмах, т. к. с этой технологией результативность осеменения доходит до 50-60%, а по отдельным опытам до 90-100%. Малообъёмные технологии пока не востребованы в производстве, т. к. они не были апробированы на большом поголовье.
За рубежом предпочтение отдаётся замораживанию в малых объёмах (0,2-5мл). Эта технология включает в себя центрифугирование предварительно разбавленной спермы, после чего следует новое разбавление осадка до тех пор, пока не будет получена желаемая концентрация сперматозоидов в 1мл. По данным разных зарубежных авторов, концентрация сперматозоидов колеблется от 300 до 500 млн. на дозу осеменения, например, по сообщениям Пальмера (1984), количество подвижных спермиев должно быть не менее 300 млн., по данным Пиккета (1987), – 400-500 млн. на осеменение. Сперму, разбавленную до нужной концентрации, замораживают в соломинках разного объёма от 0,2 до 5 мл.
Первые попытки сравнить результаты замораживания спермы жеребцов в соломинках и алюминиевых тубах были проделаны Love et al. (1985). Уровень зажеребляемости замороженной спермы в соломинках составил 46%, а в тубах 55%. Разница статистически недостоверна.
Цель нашей работы состояла в сравнении двух различных технологий замораживания спермы жеребцов:
1. Отечественная технология – в алюминиевых тубах по 15-20 мл (Науменков А. И., Романькова Н. К., 1969);
2. Импортная технология Колорадского университета США – в соломинках по 0,5 мл (Pickett, 1973).
Также определяли оплодотворяющую способность спермы после оттаивания путём осеменения кобыл спермой, замороженной по двум технологиям. По результатам опыта выявляли наиболее эффективную технологию криоконсервации семени жеребцов.
Опыт проводили в 2005 году в Локотском конном заводе Брянской области, ООО «Русь» Липецкой области и в Рязанском конном заводе.
Экспериментальные исследования по сравнению различных технологий замораживания спермы проводили в Локотском конном заводе в связи с тем, что данный завод приобрёл импортное оборудование фирмы «Минитуб» для замораживания семени жеребцов по технологии Колорадского университета.
В опыте был использован жеребец-производитель тракененской породы Бах (Бархотка-Хроматик), рождённый в Кировском конном заводе в 1995 г. Сперму от этого жеребца брали на искусственную вагину и делили на две равные части.
Одну часть разбавляли ЛХЦЖ средой, эквилибрировали 2 часа в холодильнике, разливали по 15-20 мл в алюминиевые тубы и замораживали по технологии ВНИИ коневодства (контроль).
Другую часть цельной спермы (опыт) разбавляли средой М1 (фирмы «Минитуб») в соотношении 1:1. Разбавленную сперму разливали в пробирки и центрифугировали в течение 15мин. в режиме 1500 об./мин. Затем сливали из пробирок надосадочную жидкость (80-85% от общего объема), а осадок (концентрированная сперма) разбавляли средой М2 (фирмы «Минитуб») в соотношении 1:1.
По технологии Колорадского университета сперму после второго разбавления фасовали в соломины по 0,5 мл и с помощью полуавтоматического прибора фирмы «Минитуб» закупоривали с одного края металлическими шариками. Соломины эквилибрировали один час в холодильнике и замораживали в парах азота в течение 15 мин., после чего опускали в азот.
Опыт по искусственному осеменению кобыл проведён в ООО «Русь» и Рязанском конном заводе. Для исследования отобрали кобыл тракененской породы и разделили их на две группы по принципу аналогов.
В опытной группе кобыл осеменяли спермой, замороженной в соломинах по технологии Колорадского университета. В контрольной группе кобыл осеменяли спермой, замороженной по технологии ВНИИ коневодства.
Для осеменения кобыл по российской технологии брали одну дозу спермы (15-20 мл). Для осеменения по технологии Колорадского университета расходовали 8-12 соломинок, чтобы в дозе содержалось не менее 300 млн. подвижных спермиев.
Тубы оттаивали в водяной бане при температуре 40-42ºС в течение 50-60секунд. Соломины при температуре 37-38ºС – в течение 30 секунд.
Перед замораживанием и после оттаивания сперму оценивали по показателям подвижности (в баллах) и переживаемости спермиев при 0ºС (в часах).
Кобыл осеменяли одноразовой пипеткой фирмы «Минитуб» или катетером Иванова в тело матки за 12-16 часов до овуляции с предварительным контролем степени развития фолликула.
Результат осеменения определяли ректальным методом через 45-60 дней после овуляции.
В исследованиях, проведённых в ООО «Русь» и Рязанском конном заводе, всего осеменили 11 голов. В опытной группе из 5 осеменённых кобыл зажеребело 2. В контрольной группе из 6 кобыл оказалось 4 жерёбых.
Таким образом установлено, что зажеребляемость от спермы, замороженной по отечественной технологии, составила 66%, а импортной – 40%.
Для получения достоверного результата необходимо провести эксперименты на большем поголовье кобыл. Опыты будут продолжены.
Результаты нашей работы свидетельствуют о некотором преимуществе (26%) отечественной технологии замораживания спермы жеребцов перед зарубежной технологией.
Васильева О. В., Бабушкин П. М.