КАБИНЕТ МИНИСТРОВ УКРАИНЫ

ЮЖНЫЙ ФИЛИАЛ «КРЫМСКИЙ АГРОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» НАУУ

Кафедра хирургии и акушерства

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

для изучения темы:

„Подготовка и стерилизация инструментов и материалов, применяемых в искусственном осеменении сельскохозяйственных животных»

(для самостоятельной работы студентов факультета ветеринарной медицины, специальность 7.130.501. – «Ветеринарная медицина»)

Симферополь - 2006

Введение

В большинстве хозяйств пункты искусственного осеменения животных строят по типовым индивидуальным проектам. Они должны соответствовать основным ветеринарно-санитарным и зоотехническим требованиям. Типовой проект пункта имеет манеж, лабораторию, моечную комнату, помещение для хранения инвентаря и содержания животных после осеменения.

Пункт искусственного осеменения оборудуют электрическим освещением, паровым или водным отоплением, канализацией, обеспечивают теплой водой.

Помещение пункта должно быть сухим, светлым и теплым. Его периодически дезинфицируют горячим раствором щелочи или свежегашеной извести с последующим проветриванием. В лаборатории, стерилизационной и моечной комнатах устраивают бактерицидные лампы.

В своей работе техник искусственного осеменения животных руководствуется рекомендациями и инструкциями по осеменению животных, выполняет указания руководителей и специалистов хозяйства, племпредприятия.

Подготовка и стерилизация посуды и инструментов.

Инструменты, посуда и материалы для искусственного осеменения животных должны всегда быть чистыми, сухими и стерильными. Это важно для предотвращения загрязнения, инфицирования и гибели спермиев, а также профилактики инфекционных и инвазионных болезней.

Новую стеклянную посуду вначале моют водопроводной водой с мылом или специальными моющими средствами с помощью ерша, щетки, куском марли, навернутым на корнцанг (пинцет), куском поролона или движущимся ершом от электромотора. Затем ее погружают в раствор соляной кислоты (1 столовая ложка на 3 л дистиллированной воды) и выдерживают 24 ч. После этого посуду тщательно отмывают от раствора соляной кислоты проточной водой, а затем многократно дистиллированной водой и высушивают на доске с колышками.

Бывшую в употреблении стеклянную посуду (кроме цилиндров для отмеривания жидкостей) сразу же после использования моют в горячем 2-3%-ном растворе гидрокарбоната натрия, обильно ополаскивают чистой, а затем дистиллированной водой и высушивают.

Посуду, загрязненную желтком, синтетической средой с желтком или спермой, выдерживают 24 ч в хромовой смеси, затем многократно промывают с помощью ерша в проточной воде и несколько раз ополаскивают дистиллированной водой и сушат. Предметные и покровные стекла тщательно моют в теплой воде и насухо протирают марлевыми салфетками. Металлические инструменты моют теплым 2-3%-ным раствором двууглекислой соды, обмывают прокипяченной теплой водой и насухо вытирают чистым полотенцем или марлевой салфеткой.

Посуду, приборы и инструменты стерилизуют автоклавированием, кипячением, сухим жаром, фламбированием и спиртом.

Стерилизация в автоклаве.

В автоклаве стерилизуют чистые искусственные вагины, металлические инструменты и посуду. Халаты, полотенца, марлевые салфетки стерилизуют или гладят горячим утюгом перед употреблением. Стерилизацию вагин в автоклаве проводят в течение 20 мин нагретым паром под давлением 0,3 – 0,5 атм при температуре 1050С в течение 15-20 мин. Металлические инструменты, посуду и материалы автоклавируют под давлением 1,5 атм в течение 30-45 мин.

Стерилизация кипячением.

Этим способом стерилизуют стеклянную посуду, шприцы-катетеры и металлические инструменты. Шприцы-катетеры перед стерилизацией разбирают (вынимают поршень). Цилиндр обертывают марлей и прикрепляют к нему поршень. Каждый поршень шприца индивидуально притерт к цилиндру, и менять поршни нельзя. Склянки, банки и спермоприемники обертывают слоем ваты или марли. На дно стерилизатора (кастрюли) кладут слой ваты или марли, помещают на него шприцы, склянки, банки, спермоприемники, наливают воды на 2/3 объема стерилизатора, закрывают крышкой и кипятят 15-20 мин.

После остывания снимают крышку, стерильным пинцетом вынимают из стерилизатора инструменты и посуду и встряхивают. После остывания шприцы собирают и удаляют из них воду. Оставшиеся капли воды снимают стерильными марлевыми салфетками или удаляют промыванием 1 %-ным раствором гидрокарбоната натрия или 0,9 %-ным раствором натрия хлорида. Шприцы завертывают в стерильную бумагу или салфетку (проглаженные горячим утюгом), склянки закрывают стерильными бумажными колпачками, банки и спермоприемники – крышками.

Металлические инструменты (влагалищные зеркала, подставки для инструментов, пинцеты, ножницы и др.) следует класть в кипящую воду, в противном случае они быстро покрываются ржавчиной. Стерилизуют их 15-20 мин. Вынутые из кипящей воды горячие металлические инструменты быстро просыхают. Оставшиеся капли воды с инструментов удаляют стерильными марлевыми салфетками.

Стерилизация сухим жаром.

Стерилизация сухим жаром производится в электрическом сушильном шкафу при температуре 160 – 1800С или духовом шкафу газовой плиты. Сухим жаром стерилизуют чистую стеклянную посуду, шприцы-катетеры в разобранном виде и спермоприемники. Перед стерилизацией колбы, мензурки, мерные цилиндры закрывают бумажными колпаками, шприцы-катетеры завертывают в бумагу, с банок снимают притертые крышки.

Подготовленную посуду ставят в сушильный или духовой шкаф, нагревают до нужной температуры и стерилизуют в течение 45 мин. Затем шкаф отключают, дают ему остыть и вынимают посуду. Если шкаф не остудить, то при открывании дверцы на стеклянной посуде могут появляться трещины от резкого изменения температуры.

Стерилизация фламбированием (обжиганием).

Фламбированием стерилизуют (непосредственно перед употреблением) на пунктах искусственного осеменения чисто вымытые и сухие влагалищные зеркала, стеклянные спермоприемники, 100-граммовые широкогорлые банки, стеклянные палочки, ножницы, пинцеты, подставки для инструментов.

Для стерилизации фламбированием посуду и инструменты несколько раз проводят над некоптящим пламенем паяльной лампы, спиртовой или газовой горелки, примуса с двумя горелками или горящего спиртового тампона (смоченного 96 %-ным спиртом). Чтобы стеклянная посуда не давала трещин, ее обжигают осторожно, вначале нагревают над пламенем огня на расстоянии 15-20 см, а затем приближают к нему и равномерно обрабатывают со всех сторон. Чтобы огонь не обжигал руки, можно легкие стеклянные приборы и инструменты удерживать над пламенем с помощью пинцета.

Обеззараживание спиртом.

Для обеззараживания шприцев-катетеров и спермоприемников можно применять 70 %-ный спирт-ректификат с последующим удалением его остатков промыванием 5-6 раз 1 %-ным раствором натрия гидрокарбоната, 2,9 %-ным раствором цитрата натрия или 0,9 %-ным раствором натрия хлорида. Пинцеты, стеклянные палочки, термометры обеззараживают тампонами, пропитанными 96 %-ным спиртом.

Ультрафиолетовое облучение.

Применяют для обеззараживания полиэтиленовых перчаток, пипеток и других инструментов из полиэтилена.

Стерилизация вазелина.

Для смазывания резиновой камеры искусственной вагины используют стерильный белый или желтый вазелин. Для стерилизации вазелин накладывают в банку объемом 100-150 мл, неплотно закрывают крышкой, ставят в стерилизатор (кастрюлю) на слой ваты или марли (3-4 слоя), который заполняют холодной или теплой водой до уровня вазелина в банке. Воду нагревают до кипения и вазелин стерилизуют в течение 30 мин. После остывания банку с вазелином плотно закрывают стерильной крышкой. Вазелин стерилизуют ежедневно перед получением спермы.

Приготовление ватных тампонов.

Тампоны готовят из белой гигроскопической ваты круглыми, диаметром 6-7 см для жеребца, 5-6 см для быка и хряка и 3-4 см для барана. Чтобы тампон не разрывался и был прочным и тонким, берут небольшой участок ваты, делят на тонкие слои, оттягивают от краев тоненькие участки и не отрывая завертывают их концы за середину на противоположную сторону тампона так, чтобы нити ваты пересекались под прямым углом. Каждый тампон сдавливают между ладонями рук и складывают в крышку тампоницы, а затем увлажняют спиртом-ректификатом. Затем их отжимают с помощью пинцета или между чистыми ладонями и перекладывают в тампоницу (банку с притертой крышкой). Вместо спирта можно использовать 0,02 %-ный раствор фурацилина.

Тампоны, увлажненные спиртом, используют для обеззараживания рук, искусственных вагин, подставок для инструментов, внешней поверхности спермоприемников, инструментов для введения спермы, влагалищных зеркал, пинцетов, стеклянных палочек, термометров, скорлупы яиц, а также для обеззараживания металлических инструментов фламбированием.

Часто сухие ватные тампоны складывают в бумажные пакеты или стерильные стеклянные банки с бумажными колпаками и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 1300С полтора часа. Сухими стерильными тампонами снимают с инструментов остатки физиологического раствора, спирта, вазелина и т. д.

Приготовление марлевых салфеток.

Чистую марлю или белую ткань разрезают на участки размером 20х20, 30х30 или 40х40 см, подшивают края белыми нитями, стирают, складывают в четыре раза и помещают в обеззараженную банку с притертой крышкой. Салфетки можно стерилизовать сухим жаром.

Стерильные салфетки используют для прикрывания и завертывания стерильных инструментов (особенно при осеменении в летних лагерях), протирания оптики микроскопа, предметных и покровных стекол, высушивания искусственных вагин, снятия капель воды с приборов, инструментов и др.

Загрязненные салфетки стирают с мылом или в растворе моющего порошка, хорошо ополаскивают, сушат и гладят горячим утюгом.

Приготовление фильтров.

Фильтры готовят из чистой, стерильной фильтровальной бумаги. Стерильными ножницами разрезают бумагу на четырехугольные листы в соответствии с размером имеющейся воронки. Каждый лист перегибают и сближают два противоположных угла. В полученном большом треугольнике разглаживают основание по прямой. Затем сближают углы основания треугольника и разглаживают сторону малого треугольника. Раздвигают один слой бумаги малого треугольника и вкладывают фильтр в стеклянную воронку. После этого концы фильтра отрезают так, чтобы при вкладывании в воронку края его были на 0,5 см ниже края воронки. Воронку с фильтром помещают в горло колбы и осторожно выливают на фильтр раствор или воду. При фильтровании не следует допускать переливания жидкости выше краев фильтра. После фильтрования жидкость становится более прозрачной и свободной от различных механических примесей.

Физиологические растворы

Приготовление 2,9 %-ного раствора натрия лимонно-кислого (натрия цитрата).

На 100 мл прокипяченной и охлажденной до 800С дистиллированной воды берут 2,9 г натрия лимонно-кислого (натрия цитрата) трехзамещенного пятиводного химически чистого или чистого для анализа и разводят в колбе круговыми движениями до полного растворения.

Стерилизируют раствор натрия цитрата в кипящей водяной бане на протяжении 5-10 мин или подогревают до 90-950С. Готовят раствор ежедневно.

Часто станции искусственного осеменения готовят раствор цитрата натрия в ампулах или флаконах и отпускают хозяйствам вместе с замороженной спермой. Такой раствор стерилизуют автоклавированием в течении 30 мин при температуре 1080С и давлении 0,4 атм.

Цитрат натрия имеет слабощелочную реакцию и буферные свойства, он не токсичен для спермиев, нейтрализует молочную кислоту, которая накапливается в спермиях. Поэтому 2,9 %-ный раствор натрия цитрата используется при оценке качества спермы, ее размораживании, споласкивании спермоприемников, промывании инструментов для введения спермы и др.

Приготовление 1 %-ного раствора бикарбоната натрия.

Раствор готовят из расчета 1 г химически чистого натрия гидрокарбоната (натрия бикарбоната или пищевой соды – NаНСО3) на 100 мл прокипяченной и охлажденной до 40-450С дистиллированной воды. При температуре воды выше 600 натрий бикарбонат распадается, переходит в Nа2НСО3 и становится токсичным для спермиев. Водопроводная вода не пригодна для работы со спермой.

1 %-ный раствор натрия бикарбоната используют при оценке качества спермы, для увлажнения влагалищного зеркала, полиэтиленовых перчаток, промывания спермоприемников, инструментов для введения спермы и др. Готовят его ежедневно.

Приготовление 0,9 – 1 %-ного раствора натрия хлорида.

Раствор готовят из расчета 1 г химически чистого натрия хлорида (не йодированной соли) – NаСL на 100 мл прокипяченной дистиллированной воды. Можно брать таблетки натрия хлорида по 0,9 г каждая. После растворения соли раствор ставят на огонь и доводят до кипения.

Раствор натрия хлорида готовят ежедневно и используют, как исключение, при отсутствии натрия цитрата или бикарбоната натрия для увлажнения и промывания инструментов, посуды после стерилизации ее в кипяченной воде, удаляют остатки спирта из инструментов и спермоприемника, увлажняют влагалищное зеркало. Известно, что ионы хлора негативно влияют на спермии.

Растворы для обеззараживания

Приготовление 70 %-ного спирта.

70 %-ный этиловый спирт готовят из 950-ного или 960 этилового спирта-ректификата. Известно, что 70 %-ный спирт менее коагулирует белки и поэтому глубже проникает в протоплазму микробов и этим влечет их гибель. Для приготовления 100 мл 70 %-ного спирта необходимо в стерильный цилиндр налить 73 мл 960 этилового спирта-ректификата и долить 27 мл прокипяченной дистиллированной воды до метки 100 мл и перемешать стерильной стеклянной палочкой. Расчет на приготовление 100 мл 70 %-ного спирта проводят по такой пропорции:

96 % ------ 100 мл

70 % ------ х мл

где

70 х 100

х = --------------------- = 72,8 мл

96

Крепость спирта может проверяться с помощью спиртометра. Его протирают спиртовым тампоном и аккуратно опускают в узкий цилиндр со спиртом, где он должен свободно плавать, не касаясь дна. Если же крепость спирта будет выше, тогда доливают необходимо количество воды.

70 %-ный этиловый спирт готовят на 2-3 дня, хранят в банке с притертой пробкой и используют для обеззараживания инструментов для введения спермы, спермоприемников, баночек, инструментов и приборов, особенно при роботе в летних лагерях. После обеззараживания инструментов и приборов остатки спирта убирают промыванием физиологическим раствором 5-6 раз.

Приготовление 0,02 %-ного (1:5000) раствора и 0,01 %-ного раствора фуразолидона.

Эти растворы готовят на 0,9-1 %-ном растворе натрия хлорида, дистиллированной или кипяченной воде из расчета 0,2 г фурацилина или 0,1 г фуразолидона на 1 л воды или раствора натрия хлорида.

Указанные растворы используют для промывания и обмывания препуция у самцов, обмывания наружных половых органов самок перед осеменением, мытья искусственных вагин, а также рук перед и после осеменения животных.

Растворы для мытья инструментов, посуды

Приготовление 2-3 %-ного раствора натрия бикарбоната или 1-1,5 %-ного раствора кальцинированной соды.

Эти растворы готовят в чистой эмалированной посуде из расчета 2-3 г натрия бикарбоната (двууглекислой соды, натрия гидрокарбоната, NаНСО3) или 1-1,5 г кальцинированной соды (натрий карбоната, двууглекислой соды, Nа2НСО3) на 100 мл горячей воды. Эти растворы используют для мытья искусственных вагин, влагалищных зеркал, посуды, инструментов, термосов, сосуда Дьюара, а также для обмывания кожи препуция у самцов и вульвы у самок перед осеменением.

Вымытые в горячем растворе соды инструменты, посуда и другие предметы обязательно споласкивают чистой горячей водой 5-6 раз, вытирают чистой салфеткой и обеззараживают.

Контрольные вопросы для проверки знаний

1.  Какие санитарно-гигиенические требования необходимо выполнять при подготовке к работе материалов, растворов, инструментов и др?

2.  Как приготовить ватные тампоны и для чего они используются?

3.  Как приготовить 2,9 %-ный раствор натрия цитрата и для чего он используется?

4.  Как приготовить 1 %-ный раствор натрия хлорида и для чего он используется?

5.  Как приготовить 70 %-ный спирт этиловый и для чего он используется?

6.  Как приготовить 2-3 %-ный раствор бикарбоната натрия и для чего он используется?

7.  Какие растворы являются физиологическими для спермиев?

8.  Какой концентрации готовят раствор фурацилина и фуразолидона и для чего они используются?

9.  Как стерилизуют вазелин и для чего он используется?

10.  Как подготовить предметные и покровные стекла для исследований спермы?

11.  Как очистить загрязненную посуду, инструменты и подготовить их к работе для искусственного осеменения сельскохозяйственных животных?

12.  Как проводят стерилизацию посуды, инструментов и других материалов кипячением?

13.  Как проводят стерилизацию посуды, инструментов и других материалов в сушильном шкафу?

Литература

1.  Валюшкин К. Д., Медведев Г. Ф. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных.- Минск: Урожай, 1997 – 718с.

2.  Зверева Г. В., Чухрай Б. М.. Справочник техника по искусственному осеменению животных - К.: Урожай, 1987.

3.  Смирнов И. В.. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных - К.: Высшая школа, 1982.

4.  Смирнов И. В, Винничук Д. Т., Денисенко М. Т., Шарапа Г. С.. Справочник по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных - К.: Урожай, 1980.

5.  Шипилов В. С., Зверева Г. В., Родин И. И., Никитин В. Я.. Практикум по акушерству, гинекологии и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных - М.: МО Агропромиздат, 1988 - 335с.

6.  Яблонский В. А. Практическое акушерство, гинекология и биотехнология воспроизводства животных с основами андрологии.- К.: Мета, 2002.- 319с.

Подписано к печати «21» октября 2006г.

Формат 60х90 1/16. Бумага офсетная. Условн. печ. л. 1,5

__________________________________________________________________

Методические рекомендации подготовлены доцентом кафедры хирургии и акушерства, к. в.н. Саенко Н. В.

Рецензент, доцент кафедры эпизоотологии, паразитологии и ветсанэкспертизы ЮФ «КАТУ» НАУ, к. б.н. Полищук С. В.

Рекомендованы и одобрены на заседании кафедры хирургии и акушерства Южного филиала «КАТУ» НАУУ, протокол № 1, от «6» сентября 2006г.

Одобрены методической комиссией факультета ветеринарной медицины, протокол № 9, от «29» сентября 2006г.

Ответственный за выпуск: зав. кафедрой хирургии и акушерства Южного филиала «КАТУ» НАУУ, к. в.н., доцент Бамбуляк Н. Ф.