В моче здоровых животных содержатся ничтожные следы желчных пигментов. В увеличенном количестве появляются они в моче при различных формах желтухи. В свежей моче окраска в интенсивно желтый цвет придается билирубином. При стояний такая моча приобретает зеленоватый оттенок вследствие окисления билирубина в биливердин и другие продукты окисления. У собак даже незначительное количество билирубина обнаруживается сравнительно легко. У лошадей обнаружение желчных пигментов в моче служит показателем очень сильной желтухи.. Наиболее значительное количество желчных пигментов отмечается у лошади при инфекционном энцефаломиэлите лошадей. Ценность признаков желтухи и обнаружение желчных пигментов в моче определяется тем, что они выявляются наиболее рано, еще до развития нервных симптомов. По нашим наблюдениям, желчные пигменты в моче появляются у лошади за 1—2 недели, в ряде случаев даже и раньше. Значительное количество желчных пигментов в моче обнаруживается также при отравлении S02, кровепятнистой болезни, крупозной пневмонии и некоторых других заболеваниях.
Проба с дымящейся азотной кислотой (Гмелина). Реакция основана на окислении желтовато-красного билирубина в зеленый биливердин и другие соединения, значение которых для клиники в достаточной степени не доказано. Окислителем при постановке реакции служит дымящаяся азотная кислота.
Берется 5 мл мочи, под которую подслаивается азотная кислота, содержащая следы азотистой кислоты. При наличии билирубина на границе двух жидкостей образуются кольца разных цветов. Образование зеленого кольца на границе кислоты и мочи является показателем положительной реакции на желчные пигменты. Остальные кольца зависят от индикана и других пигментов.
Проба на фильтровальной бумаге по Розен-бергу представляет модификацию пробы Гмелина. Испытуемая моча предварительно фильтруется, после чего на поверхность фильтра, смоченного мочой, наносится 1—2 капли азотной кислоты. В присутствии желчных пигментов вокруг капли кислоты образуется ряд цветных колец. Наружное зеленое кольцо, на месте соприкосновения мочи и кислоты, является характерным для желчных пигментов.
Проба Накаяма. В качестве реактива используется 99 мл 95%-ного спирта, 1 мл крепкой азотной кислоты и 0,4 мл хлорного железа.
К 5 мл мочи добавляют равное количество 10%-ного раствора хлористого бария. Помутневшую мочу центрифугируют. Жидкость сливается, а осадок, состоящий из нерастворимых солей бария, размазывают стеклянной палочкой по дну фарфоровой чашки и осторожно высушивают на легком пламени, затем на неостывшую чашечку опускают одну каплю реактива Накаяма. Для желчных пигментов характерно зеленое расходящееся кольцо. Другие цвета недоказательны.
Проба Синева. Эта проба наиболее проста и удобна для определения желчных пигментов в моче лошади. Мочу, разбавленную пополам водой, обрабатывают равным количеством 20%-ным раствором хлористого бария и после взбалтывания центрифугируют. Прозрачный центрифугат сливается, а осадок растворяется в дымящей азотной кислоте. Для билирубина характерно появление желтого или зеленого окрашивания осадка.
Проба Обермейер а — Проппера. Для определения желчных пигментов необходимо иметь реактив следующего состава: 3,5 мл 10%-ной йодной настойки, 12,0 йодистого калия, 75,0 хлористого натрия, 125 мл 95%-ного спирта и 625 мл дистиллированной воды. Под разведенную дистиллированной; водой мочу подслаивают реактив. В присутствии желчных пигментов появляется синее кольцо, переходящее в зеленое.
Пробы Мухина. 1. К 3—5 мл испытуемой мочи добавляют несколько капель 10%-ного водного раствора уксусной кислоты и затем 0,5— 1 мл скипидара. В течение 1—1,5 минут содержимое пробирки слегка подогревают, постоянно встряхивая, на пламени спиртовой лампочки. Проба считается положительной, если моча окрашивается в зеленый цвет. Чувствительность пробы—1 : 8 000.
2. На 3—5 мл мочи наслаивается 2—3 мл раствора марганцевокислого калия в концентрации 1 : 1 000—1 : 10 000. Моча предварительно фильтруется и должна иметь кислую реакцию. При наличии в моче желчных пигментов на границе соприкосновения жидкостей появляется изумрудно-зеленое кольцо. В зависимости от количества желчных пигментов толщина кольца и интенсивность окрашивания бывают различные. Чувствительность пробы 1 : 4 000— 1 : 8 000. Реакция наиболее характерна для мочи крупного рогатого скота.
Проба Гаммарстена. Для постановки пробы предварительно приготовляют реактив, состоящий из смеси 10 мл 25%-ной соляной "кислоты? и 1 мл азотной кислоты. Эту смесь оставляют стоять при комнатной температуре до тех пор, пока она не станет желтой. Перед постановкой реакции реактив предварительно разбавляют спиртом в 5—10 раз. К 10 мл мочи в центрифужной пробирке добавляют несколько капель хлористого кальция и центрифугируют. Слив жидкость с осадка, добавляют к нему 1—2 мл реактива, который растворяет осадок. Желчные пигменты дают зеленое окрашивание в концентрации 1 : 1 000 000.
Проба Марашаля. К исследуемой моче прибавляют по каплям йодную настойку или люголевский раствор. Положительной реакцией на билирубин будет изменение цвета в зеленый. Розин несколько модифицировал эту реакцию. На исследуемую мочу осторожно наслаивается смесь из одной части настойки иода и девяти частей спирта. На границе жидкостей в присутствии билирубина получается зеленое кольцо.
Проба Гюнтера. К 5 мл ледяной уксусной кислоты прибавляют 0,005 перекиси магнезии и нагревают в пробирке до кипения. Предварительно подщелоченную едким натром мочу приливают к кипящему реактиву. При наличии билирубина тотчас же или после вторичного нагревания жидкость окрашивается в зеленый цвет. При слабой окраске зеленое красящее вещество извлекается при помощи хлороформа.
Проба Гупперта. К исследуемой моче прибавляют углекислый натрий до слабощелочной реакции, после чего добавляют хлористый кальций или барий и производят осаждение до тех пор пока еще образуется окрашенный осадок. Можно с этой целью к моче добавлять также и известковую воду в избытке. Если осадок кипятить в алкоголе, к которому добавлено несколько капель разведенной серной кислоты, то он обесцвечивается, а жидкость окрашивается в присутствии билирубина в зеленый цвет. Эта проба с успехом может быть использована в случаях, когда количество желчных пигментов в моче незначительно. Количество мочи должно быть не меньше 100 мл. Осадок может быть также подвергнут обработке с примесью дымящейся азотной кислоты.