Исследование мочи на белок имеет важное значение в диагностическом отношении. Белковые вещества в моче показывают на патологический процесс.

Небольшое количество белка может быть обнаружено сложными методами и у здоровых животных. Эти ничтожные следы белка не принимаются во внимание и мочу здоровых животных клинически принято считать свободной от белка.

При патологических состояниях почечный фильтр теряет способность задерживать белки крови и они начинают поступать в большом количестве в мочу. В зависимости от факторов, которые обусловливают появление белка в моче, различают альбуминурию—физиологическую и патологическую.

К физиологическим альбуминуриям принято относить: алиментарную альбуминурию, альбуминурию новорожденных и альбуминурию рожениц. Количество белка при физиологических альбуминуриях бывает незначительным, состояние это является переходящим и, кроме того, в моче обычно не обнаруживается других компонентов, свидетельствующих о поражении почек, а также нет и соответствующих клинических проявлений. При анализе альбуминурии, помимо количественного определения белка и микроскопии осадка, необходимо тщательное исследование животного и особенно самой почки, а также и органов, функционально с ней связанных.

Патологическая альбуминурия наблюдается при многих заболеваниях и служит не критерием болезни, а одним из признаков заболевания, часто не определяющим сущности страдания.

Истинная, или реальная, альбуминурия встречается при острых воспалительных и дегенеративных заболеваниях почек. Количество белка, поступающего в мочу, зависит от степени поражения и распространенности. При диффузных поражениях, охватывающих равномерно почечную паренхиму, обычно отмечается большое количество белка в моче, в то время как одностороннее поражение или очаговое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией. При нефрозах количество белка достигает высокой сте-

Пени, в то время как хроническое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией, а в ряде случаев белок в моче не отмечается совсем.

Застойная гиперемия почек, возникающая на почве некомпенсированного порока сердца, сопровождается умеренной альбуминурией.

Из патологических процессов, не связанных непосредственно с почками, можно назвать заболевание крови паразитарного характера, лейкемии, первичные и вторичные анемии, тяжелые заболевания кишечника, такие, как энтерит, микозы кишечника, паратуберкулез крупного рогатого скота, тяжелые инфекционные и лихорадочные заболевания, при которых имеет место понижение кровяного давления и дегенерация почечного эпителия.

Скопление углекислоты в крови может при тяжелых страданиях легких служить причиной появления альбуминурии, которая является быстро-проходящей.

Кроме истинной альбуминурии, необходимо учитывать альбуминурию ложную или случайную, которая является следствием примеси белка в нижних мочевых путях—мочевом пузыре или уретре.

Для исследования мочи на белок необходимо, чтобы она была свободной от различных примесей (истечение из влагалища, фекалий и т. д.) и прозрачной.

Просветление мочи достигается различными способами—отстаиванием, фильтрованием и центрифугированием. Наиболее быстро просветление мочи достигается центрифугированием, после чего моча становится обычно совершенно прозрачной и только в отдельных случаях слегка опалесцирует. При незначительном помутнении мочи достаточно бывает отстаивания в течение одного часа.

Сильно мутную мочу можно просветлить фильтрованием через бумажный фильтр. При аммиачном брожении мутную мочу взбалтывают с животным углем, инфузорной землей или углекислым барием. При малых альбуминуриях этот метод непригоден, так как часть белка адсорбируется. Шпет в этих случаях рекомендует для объективной оценки полученных результатов сравнивать испытуемую мочу с нативной, не подвергавшейся обработке.

Для просветления мутной и слизистой мочи лошади очень удобен метод Кулакова. Моча наливается в узкий стеклянный цилиндр, закрывается ватной пробкой, которая стеклянной палочкой или специальными щипцами продавливается через слой мочи до дна цилиндра. Над пробкой после этого про-давливания появляется совершенно прозрачная моча, пригодная для химического исследования на белок.

Качественное исследование на белок. В ветеринарной практике нашли широкое применение следующие пробы.

Проба кипячением. В пробирку набирается 5—10 мл испытуемой мочи. Щелочная моча подкисляется несколькими каплями 10%-ной азотной или уксусной кислоты до нейтральной или слабокислой реакции и на пламени горелки нагревается до кипения.

Помутнение жидкости или выпадение хлопчатого осадка указывает на присутствие белка. При отрицательном результате можно добавить к горячей моче равный объем насыщенного раствора поваренной соли. Моментально^ помутнение всей жидкости свидетельствует о наличии в моче белка. В комбинат ции с реакцией на высаливание проба с кипячением является достаточно чувствительной и довольно простой.

Проба Геллера. В пробирку наливают прозрачную испытуемую мочу. С помощью пипетки под мочу подслаивается концентрированная азотная кислота. Синев рекомендует мочу наслаивать на кислоту. В присутствии белка на границе двух жидкостей получается белое рыхлое кольцо различной толщины в зависимости от количества белка, находящегося в моче. При незначительных альбуминуриях кольцо возникает спустя 2—3 минуты после подслаивания или наслаивания жидкостей. Проба с азотной кислотой дает положительный результат при наличии в моче 0,033% белка.

Проба концентрированной азотной кислотой дает положительный результат не только с сывороточными белками, но и с альбумозой, бальзамическими веществами и нуклеоальбуминами. В присутствии мочекислых солей и красящих веществ в моче на границе двух жидкостей получаются цветные кольца. Осадок из альбумоз исчезает при нагревании и вновь появляется при охлаждении испытуемой порции мочи, а нуклеоальбумин растворяется в избытке азотной кислоты. Муть с бальзамических и смолистых веществ растворяется после прибавления двойного объема спирта или больших количеств эфира.

Проба Бедекера. Мочу предварительно необходимо разбавить водой в равных количествах, чтобы исключить возможность осаждения мочекислых солей. Затем к 5 мл мочи добавляют по каплям 10%-ный раствор уксусной кислоты до совершенно ясной кислой реакции. Если после этого появляется муть, то мочу необходимо профильтровать, чтобы избавиться от нуклеоальбумина, муцина или уратов. Затем в мочу добавляют 3—4 капли 10%-ного раствора железосинеродистого калия (избыток реактива растворяет белок). В зависимости от количества белка появляется опалесценция, муть или хлопчатый осадок. Эта проба выявляет сывороточный белок и альбумозу. Последняя растворяется при кипячении и вновь появляется после охлаждения.

Эта проба может быть видоизменена следующим образом. Непосредственно перед исследованием смешивают в равных объемах 10%-ный раствор уксусной кислоты и 10%-ный раствор железосинеродистого калия и на эту смесь наслаивается прозрачная разбавленная пополам моча. Положительная реакция характеризуется появлением белого хлопчатого осадка на границе двух жидкостей. Проба с железосинеродистым калием обнаруживает белок в количестве 0,002% (моча не должна содержать цинка).

Проба Танрета. Реактив состоит из 1,35 сулемы, 3,32 йодистого калия, 20,0 уксусной кислоты и 60,0 дистиллированной воды. Реактив добавляют к профильтрованной моче по каплям. Положительная реакция характеризуется появлением мути или белого хлопчатого осадка. Пробой с сулемой выявляется сывороточный белок и альбумоза. Если при нагревании мочи осадок исчезает, а после охлаждения появляется вновь, то это говорит о наличии в моче альбумозы. Проба с сулемой особенно пригодна для обнаружения в моче альбумозы.

Проба Роча и Вильяма. В качестве реактива используется 20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты (по нашим наблюдениям, вполне пригоден для использования и 10%-ный раствор). В профильтрованную мочу реактив добавляют по каплям. При наличии сывороточного белка получается муть или выпадает белый хлопчатый осадок. Эта проба обладает большой чувствительностью, давая положительную реакцию при разведении белка в моче 1 : 50 000.

Рухлядев эту пробу особенно рекомендует для исследования мочи лошади. Ют реактива растворяются углекислые соли, находящиеся в большом количестве в моче лошади, моча просветляется, избавляя тем самым от предварительного фильтрования или отстаивания в спешных случаях.

Количественное определение белка.

Приблизительное определение количества белка в моче возможно при известном навыке по интенсивности получаемой реакции. Более точные результаты получаются при проведении количественных проб. Аналитический способ по весу хлопотлив для клинической практики и требует большой осмотрительности.

Наиболее простым и широко распространенным способом количественного определения белка является метод Эсбаха и скоростной метод Ауфрехта.

Метод Эсбаха. Для определения количества белка по этому методу необходимо иметь специальный альбуминометр, предложенный автором, который представляет собой толстостенную, градуированную, с закруглен ым или коническим дном пробирку на ножке или в специальной подставке. Кроме альбуминометра, необходимо иметь также реактив Эсбаха следующего состава: 1,0 пикриновой кислоты, 2,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

Моча высокого удельного веса разбавляется пополам дистиллированной водой, моча щелочная подкисляется раствором виннокаменной кислоты.

Испытуемая моча наливается до метки—И (метка И—моча) и затем до метки Р наливается реактив. Альбуминометр затем закрывается резиновой пробкой и осторожно, чтобы не вспенивать мочу, поворачивается несколько раз (2—3 минуты). В присутствии белка получается или помутнение или взвешенный в жидкости рыхлый белый осадок. После этого альбуминометр оставляют стоять при комнатной температуре на 24 часа, после чего количество белка определяется по шкале, нанесенной на стенке альбуминометра.

Каждое деление нижнего конца альбуминометр а соответствует разведению белка 1 : 1 000. Если проба ставилась с мочой, разведенной водой, то показания альбуминометра следует умножить на степень разведения.

Следует учесть, что при лечении хинином, антипирином и бальзамическими веществами может выпадать осадок и при отсутствии в моче белка.

Метод Ауфрехта является ускоренным методом определения количества белка в моче. Для постановки пробы необходимо иметь альбуминометр Ауфрехта, представляющий собой градуированную центрифужную пробирку, центрифугу и реактив следующего состава: 1,5 пикриновой кислоты, 3,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

В альбуминометр наливают 4 мл кислореагирующей или подкисленной мочи и 3 мл реактива. Пробирка закрывается резиновой пробкой и медленно несколько раз переворачивается. Центрифугирование производится в течение 2—3 минут, после чего определяется количество выпавшего осадка. Разведения мочи водой при этом методе не требуется.

В практическом отношении очень удобной является следующая количественная проба: в градуированную центрифужную пробирку наливают 10 мл профильтрованной и подкисленной мочи и затем последовательно добавляют 1 мл уксусной кислоты, 1 мл воды и 3 мл 10%-ного раствора желтой кровяной соли. После 3-минутного центрифугирования при 2 000 оборот определяется процент содержания белка из расчета 0,5% белка на каждые 0,25 мл осадка.

Из других методов определение количества белка в моче заслуживает внимания метод Робертса—Стольникова.

Метод Робертса — Стольников а. Метод количественного определения белка по Стольникову основан на наблюдении над предельной чувствительностью пробы с концентрированной азотной кислотой, по которой ровно через 3 минуты после наслаивания мочи на реактив появляется белое кольцо. Количество белка, при котором появляется положительная реакция, равняется 0,033%. Задача заключается в том, чтобы приготовить такое разведение мочи, которое дало бы положительную реакцию ровно через 3 минуты после наслаивания. В этом разведении количество белка и будет равно 0,033%.

Техника определения. В один ряд пробирок набирают по 2 мл крепкой азотной кислоты, а в другой по 2 мл мочи, разведенной в 10 раз (1 мл мочи на 9 мл воды). Затем делается новое разведение мочи добавлением дистиллированной мочи в количествах, указанных в таблице. После этого разбавленная моча наслаивается на кислоту и по часам учитывается разведение, которое дает положительную реакцию ровно через 3 минуты. По прилагаемой таблице нетрудно найти содержание белка в неразбавленной моче.

Содержание белка в процентах можно определить и по формуле: К+Х/30+К,

В которой К Равно количеству взятой для исследования мочи, разбавленной 1 : 10 дистиллированной водой, и X—количество прилитой воды до начала выявления реакции Геллера.

Контрольные опыты показали, что ошибка в сравнении с другими приемами бывает незначительной: она не превышает 0,206% в ту или другую сторону.