Моноклональные антитела

Налнем с рассмотрения особенностей иммунного ответа и определения эпитопов. Эпитопы (антигенные детерминанты) – отдельные участки молекул антигенов. определяют способность белковых молекул индуцировать в организме биосинтез антител. Они обладают наибольшим родством к активным центром антитела и образованы обычно гидрофобными аминокислотами.

Эпитопы в составе иммуногенной белковой молекулы, находящихся на поверхности вируса частицы или бактериальной клетки, узнаются определенными клонами лимфоцитом, обеспечивающих в дальнейшем биосинтез антител против данного эпитопа.

Стадии иммунного ответа

1.  При воздействии на организм антигена, содержащего много эпитопов, активируются клетки иммунной системы и продуцируют антитела, обладающие способностью тех эпитопов, молекулы антигенного фактора которых индуцировали биосинтез антител соответствующей специфичностью.

2.  Синтезированные антитела с помощью рецепторов распознают соответствующие эпитопы антигена и взаимодействую с ними, в результате образуется нейтральный комплекс антиген-антитело

3.  Элиминация (разрушение) молекулы антигена.

Каждый эпитоп, входящий в антиген, активирует образование клона антителобразующих клеток, предшественником которых является один единственный В-лимфоцит.

Продуктом этого В-лимфоцита является один вид совершенно идентичных по всем параметрам антител одного эпитопа или Моноклональных антител.

Биотехнология получения моноклональных антител

1.  Иммунизация животных – производят иммунизацию животных (мышей), от которых в дальнейшем получают селезеночные клетки (спленоциты), синтезирующие иммуноглобулины (антитела)

2.  Гибридизация – создание гибридных клеток, образующих антитела.

После иммунизации необходимо изолировать антителообразующие клетки и размножить в клеточной культуре. Но плазматические клетки, продуцирующие антитела, не способны к размножению и продолжительной жизни в клеточной культуре. Этот барьер преодолевают созданием гибридных клеток, образующих антитела.

Исходным материалом для получения гибридов являются антителообразующая клетка селезенки и быстро делящаяся раковая клетка.

В результате образуется продукт слияния, который обладает способностью к беспредельному размножению в клеточной культуре и биосинтезу одного вида антител.

3. Селекция – производят выделение гибридов путем высева на селективную среду.

4. Клонирование – происходит идентификация и отбор гибридов, продуцирующих специфические иммуноглобулины.

5. Массовое культивирование отселектированного клона гибридом:

2 метода:

1.  В виде перевиваемой культуры клеток

2.  В виде развития асцитной опухоли, которая развивается в результате введения гибридомной клеточной взвеси мышам в\брюшинно.

В дальнейшем получают асцитную жидкость, из которой выделяют моноклональные антитела.

Концентрация моноклональных антител в клеточной культуре составляет 10³, при втором пути – 105-106 моноклонального антитела в 1мл жидкости.

Применение моноклональных антител

1.  При получении препаратов для диагностики вирусных инфекций (африканская чума свиней, респираторно-синцивиальной инфекции, лейкоза, бешенства, гриппа, ПГ-3 и др.). Достигается высокая специфичность, чувствительность, это позволяет идентифицировать не только возбудителя, но и серотип. Более дешевое производство. Повышается эффективность ИФА, реакции пассивной гемагглютинации, иммунофлюоресцирующего метода (РИФ).

2.  Для проведения пассивной иммунизации (бешенство, клещевой энцефалит).

3.  Использование иммоблизированны моноклональных антител как иммуносорбентов (при очистке инсулина, IFN, СТГ, получаемым методом рекомбинантной ДНК)

4.  Для разделения детерминированных по полу спермиев (использование моноклональных антител к антигенным детерминантам мембранных белков спермиев, меченных флуоресцирующими веществами)

5.  Доставка лекарственных веществ в клетку, содержащую соответствующий эпитов. Это повышает эффективность лекарственных препаратов против инфекционных и раковых болезней. Используя моноклональные антитела, полученные в результате иммунизации животных лекарственными препаратами, сложно определить дозы этих препаратов.

6.  При аутоиммунных болезнях – моноклональные антитела могут связывать антитела, повреждающие организм.

7.  Создание антидиопатических вакцин.

Сущность: полученные при иммунизации животных антител (АТ-1), после их выделения из сыворотки и введения животным индуцируют синтез новых антител (АТ-2). АТ-2 связывали только АТ-1 и не взаимодействовали с другими антителами.

В результате: эпитоп АТ-1 назвали Идиотопом, а АТ-2, полученные в результате индуцированного влияния антигенных детерминант идиотипа АТ-1 - антиидиотипом

В дальнейшем было установлено родство между АТ-2 и антигеном, поэтому возникла идея о возможности использования АТ-2 как вакцинирующего препарата. Основной «+» - оставаясь препаратом высокой специфичности, антидиотипические вакцины Не вызывают заболевания.