Инструкционная карта для проведения лабораторно-практического занятия по теме: Технология приготовления разбавителей
ПРЕДМЕТ: Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных.
ТЕМА: Технология приготовления разбавителей.
ЦЕЛЬ: Изучить технологию приготовления разбавителей.
МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ: лаборатория.
Время: 2 часа
Оборудование: микроскопы, предметные и покровные стекла, химические реактивы, лабораторная посуда, инструкционные карты.
Литература: В. А. Яблонський. Практичне акушерство, гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. (с. 72-76)
Вводный инструктаж и правила ТБ.
Ход работы
1. Ознакомьтесь с компонентами синтетических сред.
2. Изучите особенности приготовления разбавителей для животных разных видов.
3. Изучите основные требования к разбавлению спермы животных.
4. Освойте методику оценки качества разбавленной спермы на подвижность спермиев.
Текущий инструктаж – контроль за ходом работы студентов и оказание необходимой помощи.
1. Разбавители состоят из нескольких компонетов:
1. сахара (глюкоза, фруктоза, лактоза) и аминокслоты являются питательными веществами для спермиев.
2. буферирующие соли (соли слабых кислот – лимонной, фосфорной). Поддерживают рН среды и уплотняют поверхностный слой спермиев.
3. антибиотики – задерживают развитие микроорганизмов.
4. яичный желток – содержит лицетин, который предохраняет спермиев от повреждений низкой температурой.
5. глицерин – используют при замораживании, так как вода с глицерином не образует кристаллов, повреждающих спермиев.
При изготовлении разбавителей следует придерживаться ряда требований:
1. разбавители должны быть изотоническими.
2. приготовление разбавителей осуществляют только в стерильной стеклянной посуде.
3. разбавитель готовят непосредственно перед получением спермы от производителя.
4. температура разбавителя должна быть 30-35°С для спермы быка, хряка, жеребца и 25-30°С – для спермы барана.
5. для угнетения микрофлоры на 100 мл жидкости добавляют: стрептоцид – 120 мг, пенициллин или стрептомицин – 25-50 тыс МО.
6. при разбавлении разбавитель добавляют к сперме, а не наоборот.
7. перед разбавлением и после него определяют подвижность спермиев.
2. Используя практикум (практикум с. 73-75) изучите и запишите методику приготовления глюкозо-желточно-цитратного разбавителя спермы быка, глюкозо-фосфатно-желточной среды для спермы барана, глюкозо-хелато-цитратно-сульфатной среды для разбавления спермы хряка.
3. Изучите основные требования к разбавлению спермы животных.
Посуду для разбавления спермы нагревают в термостате или водяной бане до 30-35°С. Вначале разбавляют сперму в спермоприемнике в соотношении 1:1, а затем в смесителе. После доливания каждой порции разбавителя тщательно смешивают его со спермой.
Сперму быков разбавляют в 5-50 раз (чаще в 20-50 раз, но в одной дозе должно быть не менее 15 млн спермиев с прямолинейно-поступательным движением в 4 балла (40%).
Сперму барана разбавляют в 2-4 раза (80 млн спермиев), жеребца – в 2-4 раза (3 млрд спермиев).
4. Оценка качества разбавленной спермы на подвижность проводится таким же методом, как и свежеполученной (с. 57-58).
Однако, после размораживания сперма быка должна соответствовать минимальным требованиям качества: подвижность – 4 балла, живых – 40%.
Оттаянную сперму повторно замораживать нельзя.
ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЙ ИНСТРУКТАЖ И ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ
Занесите результаты исследований в тетрадь Ответьте на поставленные вопросы
Литература:
1. В. А. Яблонський. Практичне акушерство, гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. – К.: Мета, 2002. – 319 с.
2. Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. Под ред. Н. Н. Михайлова. – М.: Агропромиздат. – 527 с.
После выполнений студент должен:
ЗНАТЬ: технологию приготовления разбавителей.
УМЕТЬ: проводить разбавление и оценку качества спермы.
Контрольные вопросы
1. Какие компоненты применяют для изготовления разбавителей?
2. Назовите состав основных разбавителей, применяемых для разных видов животных?
3. Каковы требования к разбавлению спермы животных?
4. Укажите минимальные требования качества, которым должна соответствовать разбавленная сперма?