Этапы изготовления и контрастирования гистологических препаратов:

1) Отбор материала из различных органов и тканей осуществляется с учётом особенностей их анатомического и гистологического строения.

2) Фиксация материала обеспечивает стабилизацию клеточных и неклеточных структур, предотвращает их саморазрушение (аутолиз).

Фиксаторами могут быть различные жидкие химические вещества. Различают фиксаторы простые (спирты: этиловый и метиловый, раствор формальдегида, глутаральдегид, кислоты осмиевая, пикриновая, уксусная, растворы некоторых солей тяжелых металлов) и сложные, которые состоят из нескольких простых фиксаторов (жидкость Карнуа, Буэна и др.).

3) Уплотнение материала достигается тем, что материал пропитывают более плотным веществом для предотвращения деформации структур исследуемого объекта при изготовлении из него очень тонких срезов. Для этого в световой микроскопии пропитывание производят растворённым в ароматических углеводородах и расплавленным парафином, целлоидином или замораживают объект в криостате.

В электронной микроскопии уплотнение объекта достигается пропитыванием его эпоксидными смолами.

4) Изготовление срезов проводится на микротомах (санных, роторных, замораживающих) и ультратомах. Для этого используются стальные микротомные ножи, изготовленные из высококачественной закалённой стали. Для получения ультратонких срезов применяют ножи из специального шведского стекла или алмазов.

5) Контрастирование гистологических срезов осуществляется специальными красителями, которые подразделяются на 3 основные группы:

·  основные (щелочные) красители (гематоксилин, азур, сафранин, основной коричневый, толуидиновый синий, галлоцианин, тионин, метиловый зелёный, метилвиолет и др.);

·  кислые красители (эозин, эритрозин, кислый фуксин, пикриновая кислота, светлый зелёный и другие);

·  специальные красители окрашивают только определённые структуры клеток или отдельные химические соединения в клетках и межклеточном веществе (осмиевая кислота, азотнокислое серебро, хлорное золото, суданы III и IV, орсеин, муцикармин и др.).

Способность различных цито - и гистологических структур окрашиваться теми или иными красителями называется Тинкториальным свойством (от лат. tinctura – настойка).

6) Заключение окрашенных срезов осуществляется при приготовлении временных микропрепаратов в воду, глицерин, глицерин-желатину, а для приготовления постоянных препаратов - в бальзам, полистирол, специальные смолы (дамар-лак и др.).