Об'єкти і методи дослідження Гістологія
Основними об'єктами дослідження є гістологічні препарати, а головним методом дослідження - мікроскопування.
Гістологічний препарат повинен бути достатньо прозорим (тонким) і контрастним. Він виготовляється як з живих, так і з мертвих (фіксованих) структур. Препарат може бути суспензією клітин, мазком, відбитком, плівкою, тотальним препаратом і тонким зрізом.
Процес виготовлення гістологічних препаратів для мікроскопічних досліджень включає наступні основні етапи: 1) узяття матеріалу і його фіксація; 2) уплотнение матеріалу; 3) приготування зрізів; 4)окрашивание, або контрастування зрізів; 5) висновок зрізів.
Для фарбування застосовуються спеціальні гістологічні фарбники з різним значенням рН: кислі, нейтральні і основні. Структури, що забарвлюються ними, відповідно, називаються оксифільнимі, нейтрофільними (гетерофільнимі) і базофільнимі.
Якими ж методами користується гістологічна наука? Вони досить численні і різноманітні:
Мікроскопірування. Світлова мікроскопія. Сучасні мікроскопи володіють високодозволяючою здатністю. Роздільна здатність визначається якнайменшою відстанню (d) між двома рядом розташованими крапками, які можна бачити роздільно. Ця відстань залежить від довжини світлової хвилі (λ) і виражається формулою: d = 1/2 λ. Мінімальна довжина хвилі видимої частини спектру 0,4 мкм. Отже, дозволяюча здатність світлового мікроскопа складає 0,2 мкм, а загальне збільшення досягає 2500 разів.
Ультрафіолетова мікроскопія. Довжина хвилі ультрафіолетового світла - 0,2 мкм, отже, дозволяюча здатність ультрафіолетового мікроскопа 0,1 мкм, але оскільки ультрафіолетове випромінювання є невидимим, то для спостереження досліджуваного об'єкту необхідний люмінесцентний екран.
Флюоресцентна (люмінесцентна) мікроскопія. Короткохвильове (невидиме) випромінювання, поглинаючись рядом речовин, порушує їх електрони, які випромінюють світло з більшою довжиною хвилі, стаючи видимою частиною спектру. Таким чином, добиваються підвищення дозволяючої здатності мікроскопа.
Фазовоконтрастная мікроскопія дозволяє випромінювати незабарвлені об'єкти.
Поляризаційна мікроскопія застосовується для вивчення архітектоніки гістологічних структур, наприклад, колагенового волокна.
Електронна мікроскопія дає можливості вивчати об'єкти, збільшені в десятки тисяч раз.
Мікрофотозйомка і мікрокінозйомка. Ці методи дозволяють вивчати фіксовані об'єкти на фотографіях і живі мікроскопічні об'єкти в русі.
Методи якісних і кількісних досліджень. Гісто - і цитохімія, зокрема кількісна, дозволяє проводити якісний аналіз досліджуваних об'єктів на тканинному, клітинному і субклітинному рівнях.
Цитоспектрофотометрія дає можливість вивчати кількісний зміст тих або інших біологічних речовин в клітинах і тканинах на основі поглинання світла певної довжини хвилі фарбником, який ними зв'язаний.
Диференціальне центрифугування дозволяє розділяти вміст клітин, відмінних між собою своєю масою.
Радіографія заснована на включенні радіоактивної мітки (наприклад, радіоактивного йоду, Н³-тимидина та ін.) в обмінний процес.
Морфометрія дозволяє виробляти вимірювання площ і об'ємів клітин, їх ядер і органел за допомогою окулярів об'єкт-мікрометрів і спеціальних сіток.
Застосування ЕОМ для автоматичної обробки цифрового матеріалу.
Метод культури тканин. Метод культури тканин є підтримкою життєздатності і поділ клітин і тканин поза організмом. Для цього використовують спеціальні контейнери з живильним середовищем, в яких створюються всі необхідні уязика для життєдіяльності клітин. За допомогою цього методу можна вивчати диференціювання і функціональне становлення клітин, закономірності їх злоякісного переродження і розвитку пухлинного процесу, міжклітинну взаємодію, поразку клітин і тканин вірусами і мікроорганізмами, вплив лікарських препаратів на обмінні процеси в клітинах і тканинах і т. п.
Прижиттєве (вітальне) фарбування використовується для вивчення явищ фагоцитозу і активності макрофагів, здатності фільтрації ниркових канальців та ін.
Метод трансплантації тканин. Цей метод застосовують з метою вивчення поведінки клітин і їх морфофукціонального стану при їх пересадці в інший організм. Наприклад, цей метод використовується для підтримки життя тварин, схильних до опромінювання смертельною дозою.
Мікроманіпуляції. Даний метод одержав застосування в молекулярнній біології, генній інженерії, а також при клонуванні, коли за допомогою мікроманіпулятора видаляють ядро з яйцеклітини з гаплоїдним набором хромосом і пересаджують в неї ядро соматичної клітини з діплоїдним набором хромосом.