Как известно, лабораторные методы диагностики являются достаточно ценными методами при инфекционных болезнях в постановке этиологического диагноза. Во всех случаях при подозрении на инфекционную болезнь для лабораторной диагностики необходимо наличие биологического или патологического материала, который соответственно, отбирается от больного, убитого или погибшего животного. Такими материалами могут быть молоко, фекалии, моча, секрет из носа, рта, гортани, трахеальная слизь, смывы из влагалища, препуциального мешка, содержимое афт, абсцессов, язв, соскобы кожи, кусочки паренхиматозных органов, лимфатических узлов, трубчатая кость, сердце, головной и спинной мозг, пораженные участки тканей или органов и другое. При некоторых инфекционных болезнях (ботулизм, пищевые токсикоинфекции) в качестве материала для исследования в лабораторию направляют корм.
Наиболее употребляемыми методами лабораторной диагностики инфекционных болезней являются бактериологический и вирусологический методы исследования.
Во всех случаях отбора и пересылки биологического или патологического материала необходимо руководствоваться рядом правил и соответствующих инструкций по борьбе с инфекционными болезнями животных. Основными из этих правил являются:
¾ необходимость отбора патматериала как можно раньше после смерти животного;
¾ недопущение загрязнения материала посторонней микрофлорой при его отборе (берут стерильным инструментом и помещают в стерильную посуду);
¾ исключение возможности рассеивания возбудителя инфекции при транспортировке материала (герметичная, водонепроницаемая упаковка, деревянные или металлические пеналы);
¾ необходимость консервирования материала в случае невозможности его быстрой доставки в лабораторию.
Материал в лабораторию присылают, как правило, в стеклянной посуде, поскольку стекло не имеет токсичных свойств и легко стерилизуется. Тару (банки, флаконы, пробирки, пипетки и т. п.), в которой пересылают материал, тщательно моют в теплой воде с мылом, споласкивают и стерилизуют в автоклаве при температуре 120оС в течение 15 минут. Резиновые пробки стерилизуют в течение 10 минут в 0,5% растворе фенола или другого антисептика. Предметные стекла сначала 10 минут кипятят в 1-2% растворе соды, тщательно моют в воде, высушивают и хранят в спирт-эфире (1:1). Кроме стеклянной посуды часто используют полиэтиленовые мешочки, пластиковые или металлические пеналы, деревянные ящички, и другое. Но такая тара должна соответствовать требованиям по герметичности, а при необходимости, еще и стерильности.
Следует также помнить, что в одной посуде нельзя располагать материал, из которого предполагается выделение возбудителя, взятый из разных частей организма, или от разных животных (исключением является материал, который консервируется непосредственно на месте, взятый от одного животного и направляется только для гистологического исследования).
Условно весь материал, который направляется в лабораторию для исследования, можно разделить на Прижизненный, т.е. взятый от больных животных и Посмертный - взятый от забитых с диагностической целью животных и трупов.
Материалом, который берут для исследования при жизни, у животного являются:
Молоко - берут для бактериологического исследования при подозрении на бруцеллез отдельно из каждой доли вымени отбирают по 10-15 мл и 100-150 мл (из пораженной доли) при подозрении на туберкулез. Вымя предварительно обмывают теплой водой и дезинфицируют 700 спиртом. Первые порции молока сдаивают отдельно и для исследования не берут. В случае длительной транспортировки молоко можно консервировать 1%-м раствором борной кислоты, или 1%-м раствором генцианвиолета в соотношении 1:25000.
Фекалии - берут во время акта дефекации, или непосредственно из прямой кишки в количестве 100-150 г с помощью стерильной ложки. Если в фекалиях находят слизь, сгустки крови, или клочки слизистой оболочки кишок - их отбирают отдельно.
Секрет из носа, глотки, гортани - берут с помощью стерильного ватно-марлевого тампона, который помещают в стерильные пробирки с 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида.
Кроме этого, из ротовой полости и глотки, для исследования может отбираться слюна, содержимое афт, эпителий, слизь.
Трахеальная слизь - берут для исследования с помощью трахеотубуса, или через специальный носо-трахеальный зонд. Это небольшого диаметра (до 0,5-0,6 см) резиновая трубка, внутрь которой вставлен металлический стержень с кусочком стерильной марли на конце. Зонд через носовую полость вводят в трахею и двигают металлический стержень вперед. В этом случае кусочек марли раздражает слизистую оболочку трахеи, животное кашляет и слизь попадает на марлю, которую после вывода зонда из трахеи помещают в стерильную посуду, с небольшим количеством физиологического раствора.
Содержимое абсцессов, язв, ран - берут в зависимости от характера объекта и его локализации чаще с помощью стерильных пастеровских пипеток или шприцев.
Соскобы - отбирают при поражениях кожи или слизистых оболочек. Их делают с помощью скальпеля на границе пораженного и здорового участка кожи или слизистой оболочки. Если одновременно с поражением кожи наблюдают поражение и волосяного покрова, его тоже отбирают для исследования.
Патологическим материалом, в зависимости от характера подозреваемой болезни, могут быть различные органы, ткани, жидкости (кусочки органов, пунктаты).
Как правило, трупы птиц и небольших животных присылают в лабораторию целыми. Трупы крупных животных вскрывают в специально отведенных местах в хозяйстве и отбирают необходимые органы или образцы.
Каждую пробу отбирают стерильным инструментом и помещают в отдельную стерильную посуду. При необходимости отбора части органа для исследования поверхность его разреза прижигают нагретым над пламенем спиртовки шпателем.
Часть кишки вместе с содержимым отбирают, перерезая ее между двойными лигатурами, наложенными с обоих концов. Кровь и другие жидкости организма отбирают в пастеровские пипетки, концы которых запаивают с обеих сторон.
В каждом конкретном случае при подозрении на инфекционную болезнь в лабораторию необходимо отправлять тот патологический материал, который перечислен в Ветеринарном Законодательстве при том инфекционном заболевании, на которое возникло подозрение.
Предостережение!!! Трупы животных, гибель которых вызвана спорообразующими микроорганизмами, вскрывать строго запрещено!
Патматериал для лабораторного исследования необходимо отбирать и доставлять в лабораторию как можно раньше после гибели животного, чтобы свести к минимуму влияние постмортальных изменений, которые наступают в органах и тканях, на результаты исследований. При невозможности доставки материала в лабораторию или его исследования в первые 20-30 часов после гибели животных или птиц его консервируют и отправляют в лабораторию только консервированным.
Наиболее часто применяемым консервантом патматериала для бактериологического исследования является стерильное вазелиновое масло и 30%-й водный раствор химически чистого глицерина. Воду для приготовления консерванта предварительно кипятят в течение 30 минут. Объем консерванта должен превышать объем патматериала в 4-5 раз.
Патматериал для вирусологических исследований консервируют 30-50%-м раствором химически чистого глицерина, приготовленного на физиологическом растворе, предварительно простерилизованном в автоклаве при температуре 1200С в течение 30 минут.
Для бактерио- и вирусологического исследований консервировать материал можно также и низкими температурами, используя с этой целью сухой лед, или его смесь с этиловым спиртом; снег, лед и их смеси с поваренной солью.
При использовании холода в качестве консерванта необходимо помнить, что в этом случае недопустимы значительные перепады температуры (замораживание-оттаивание), которые приводят к разрушению как микробных клеток, так и вирусов.
Консервантом при гистологических исследованиях чаще всего служит 10%-й водный раствор формальдегида, а при его отсутствии - 96о спирт.
К материалу, который присылают в лабораторию для исследований, обязательно добавляют сопроводительный документ, где, по возможности, отмечают как можно больше информации как об исследуемом материале, так и о больном, забитом или погибшем животном (из какого хозяйства; вид, пол, возраст больного животного или группы животных; краткое описание клинических признаков и патолого-анатомических изменений; характер проведенного лечения, или его отсутствие; количество проб материала и т.д.), а также просьба о необходимости проведения соответствующих диагностических исследований с целью подтвержден Сопроводительный документ составляет и подписывает ветеринарный специалист и направляет в лабораторию вместе с биологическим или патологическим материалом, как правило, специальным посланцем (нарочным) или по почте.