После инокуляции восприимчивых эмбрионов или 1 —14-дневных восприимчивых цыплят (например, линии 151) стандартным штаммом вируса RPL12, В15, F42 или RAV-1 лимфоидный лейкоз появляется в возрасте 14—30 недель. Ранее 14-недельного возраста это случается крайне редко. Некоторые из полученных в лаборатории рекомбинантных вирусов способны вызывать лимфоидный лейкоз в интервале 5—7 недель, хотя такой короткий инкубационный период не встречается в полевых условиях. При полевых вспышках случаи лимфоидного лейкоза могут быть в любое время после 14-недельного возраста. Но наибольшая заболеваемость приходится обычно на период половой зрелости. Внешние признаки болезни не являются специфическими. Гребень может стать бледным, сморщенным, а иногда—синюшным. Часто наблюдается потеря аппетита, истощение и слабость. Брюшко часто бывает увеличенным, а перья иногда покрываются пятнами уратного и желчного пигмента. Увеличение печени, фабрициевой сумки и почек можно иногда определить с помощью пальпации. Порой можно выявить и узелковый характер опухолей печени. Когда начинают развиваться клинические признаки, ход болезни обычно становится очень быстрым.
Макроскопические поражения. Хорошо видимые опухоли почти неизменно наблюдаются в печени, селезенке и фабрициевой сумке. Размер опухолей сильно разнится в зависимости от количества вовлеченных в поражение органов. Помимо печени и селезенки, в патологический процесс могут быть также вовлечены почки, легкие, гонада, сердце, костный мозг и брыжейка.
Опухоли мягкие на ощупь, гладкие и блестящие. На срезе цвет поверхности может быть от слегка сероватого до светло-кремового. Иногда может наблюдаться некроз. Новообразование может быть узловатым, милиарным, диффузным или иметь сочетание этих форм. При узелковой форме опухоли могут варьироваться от 0,5 мм до 5 см в диаметре, могут быть единичными или множественными. В основном они шаровидные, но могут быть уплощенными, когда находятся близко к поверхности органа. Гранулярная или милиарная форма, которая в большей степени проявляется в печени, состоит из множества небольших узелков диаметром менее 2 мм и одинаково распределенных по всей паренхиме. При диффузной форме орган приобретает слегка сероватый цвет, становится непропорционально увеличенным и, как правило, очень рыхлым. Но иногда печень становится твердой, фиброзной и приобретает почти песчаный цвет.
Гистопатология. При исследовании под микроскопом можно видеть, что все опухоли имеют очаговый характер. Даже в опухолях диффузной формы проявляется та же очаговая природа. Когда происходит пролиферация опухолевых клеток, они замещают и уплотняют клетки органа, а не инфильтруют между ними. Узелки в печени обычно окружены полосой похожих на фибробласты клеток, которые представляют собой остатки синусоидальных клеток эпителия. Опухоли состоят из множества больших лимфоидных клеток, которые могут немного варьироваться по размеру, но все находятся на одной и той же начальной стадии развития. У них имеется плохо определяемая цитоплазматическая оболочка, много базофильной цитоплазмы и везикулярные ядра, в которых присутствует скопление лейкоцитов по краю, а также скопление хроматина и одного или более заметных ацидофильных ядрышек.
В цитоплазме большинства опухолевых клеток содержится большое количество РНК, что приводит к окрашиванию в красный цвет пиронина с метиловым зеленым. Это показывает, что клетки еще не развились до конца и быстро делятся. Преобладающими клетками являются лимфобласты. Характерные особенности этих клеток лучше всего наблюдать во влажнозафиксированных мазках свежих образцов, которые были окрашены по методу Мэя-Грюнвальда-Гимзы, пиронином с метиловым зеленым или другими цитологическими красителями.
Вакуоли можно иногда обнаружить в лимфоидных клетках птиц, пораженных лимфоидным лейкозом. Тем не менее наблюдалось почкование некоторых вирусных частиц от плазматических мембран лимфобластов. В миокарде инфицированных ВЛП взрослых кур наблюдались тельца-включения во внутриплазматическом вирусном матриксе. В клеточных элементах циркулирующей крови нет устойчивых или значительных изменений. Редко бывают случаи лейкоза, в которых преобладают лимфобласты. Они характеризуются крупным размером, большими аномальными ядрами с рыхлым хроматином и умеренным количеством сильно базофильной цитоплазмы.
Патогенез. Большие поражения обнаруживаются в селезенке, сердце и семеннике, а микроскопические поражения — в печени и других внутренних органах, а также в спинномозговых узлах. Селезенка была немного или умеренно увеличенной и, как правило, пятнистой. В семеннике и сердце имелось одно и более небольших (до 1 мм в диаметре), серых полупрозрачных областей. При исследовании под микроскопом поражения оказались небольшими, обособленными очагами или более крупными диффузными областями лимфобластов. Эти поражения были кратковременными и у птиц после десятинедельного возраста они были не очень заметны. Микроскопические поражения также оказались заметно меньше. Эти поражения имели в основном воспалительный характер, и, возможно, были связаны с процессами других неопухолевых заболеваний, вызванных вирусами лейкоза птиц, например, анемией, гепатитом и истощением. У индеек, инфицированных ВЛП, были отмечены сходные ранние поражения.
Есть данные, говорящие о лимфоидном лейкозе как о злокачественном заболевании лимфоидной системы, зависящей от бурсы. Во-первых, удаление бурсы предотвращает развитие этого заболевания. Но он случается у птиц с удаленной химически бурсой, которым трансплантировали жизнеспособные клетки от генетически восприимчивых кур, а не от кур с генетической устойчивостью к развитию опухолей. Следующие виды лечения птиц, инфицированных ВЛП, эффективно разрушают фабрициевую сумку и не допускают развития лимфоидного лейкоза: удаление хирургическим путем бурсы в возрасте от 1 дня до 5 месяцев, лечение эмбрионов или вылупившихся цыплят андрогенами посредством инокуляции или добавления в корм, кормление андрогенными аналогами (миболерон), имеющими небольшое или не имеющими вообще никакого воздействия, химической бурсэктомии с помощью циклофосфамида, а также заражение вирусом инфекционной бурсальной болезни на 2 или 8-й неделе. Удаление тимуса не оказывает никакого влияния на ход болезни.
Во-вторых, гистопатологическое обследование фабрициевой сумки показало следующее. Изменения в отдельных фолликулах бурсы можно наблюдать еще до достижения птицей 2-недельного возраста. К седьмой неделе аномальные фолликулы присутствуют в фабрициевой сумке большинства инфицированных кур. Большинство опухолевых узелков появляются вследствие трансформации ограниченного количества клеток, т. е. они являются клональными. Когда происходит пролиферация трансформированных клеток, пораженные фолликулы наполняются одинаковыми бластными клетками с пиронинофильной цитоплазмой. Кроме того, теряется различие между корковым и мозговым слоем. Аномальные фолликулы расширяются и замещают находящиеся рядом нормальные фолликулы бурсы до тех пор, пока в 16—24-недельном возрасте не становится заметной опухоль бурсы. Клетки аномальных фолликул сходны с клетками опухолей лимфоидного лейкоза в бурсе и других внутренних органах. Метастатические опухоли во внутренних органах обычно имеют те же самые фрагменты ДНК, что и опухоли фабрициевой сумки от тех же самых птиц. Это подтверждает мнение, что эти фрагменты происходят из бурсы. При проведении аутопсии на курах, погибших от лимфоидного лейкоза, были выявлены макроскопические опухоли бурсы почти в каждом наблюдаемом случае.
Еще одно свидетельство, подтверждающее связь злокачественности лимфоидного лейкоза с бурсой, получено при проведении флуоресцентных исследований. Клетки опухолей лимфоидного лейкоза, трансплантабельные опухоли и лимфоидные клеточные линии, чьи культуры получены in vitro, имеют на поверхности маркеры В-кле-ток и IgM.
Несмотря на то, что клетки-мишени могут трансформироваться в бурсе большинства птиц, лишь у немногих развивается лимфоидный лейкоз. Следовательно, некоторые опухоли на раннем этапе должны подвергаться регрессу. Другие опухоли увеличиваются, в сосудистой системе происходит разрушение клеток и в других внутренних органах начинается образование метастатических очагов. Приблизительно в момент полового созревания (14-16-недельный возраст) развитие опухоли становится таким значительным, что птицы погибают.
Следовательно, даже несмотря на возможность размножения ВЛП в большинстве тканей и органов, дольше всего по сравнению с гемопоэтическими тканями инфекция сохраняется в лимфоцитах фабрициевой сумки. При этом клетки бурсы становятся клетками-мишенями, которые подвергаются неопластической трансформации. Очень важными в передаче инфекции лимфоидным клеткам могут быть медуллярные макрофаги. Клетки-мишени должны в определенной степени дифференцироваться (т. е. они не являются стволовыми клетками), так как частичная химическая бурсэк-томия приводит к разрушению клеток-мишеней лимфоидного лейкоза раньше стволовых клеток для создания иммунной реакции. Однако клетки-мишени должны постоянно находиться в бурсе, потому что бурсэктомия вплоть до пятимесячного возраста приводит к устранению заболевания.
Исследования молекулярной биологии показывают, что вирусный ген-промотор активизирует ген С-тус Хозяина в В-клетках и приводит одновременно к неопластической трансформации и помехе нормальному внутриклональному переключению производства иммуноглобулина В-клетокс IgM на IgG. Ген С-тус Хозяина присутствует у всех животных. Он является клеточной копией гена, выявленного сначала у вируса миелоцитоматоза МС29. Однако экспериментальная инокуляция вируса лейкоза птиц RAV-1 девяти - и тринадцатидневным куриным эмбрионам может вызвать быстрое развитие лимфоидного лейкоза. При этом провирусная вставка активизирует экспрессию гена С-тус. Стимулирование может быть вызвано также другими вирусами, такими, как вирусы ретикулоэндотелиоза или происходит самопроизвольно в некоторых безвирусных стаях. Следовательно, опухолевые клетки лимфоидного лейкоза имеют на поверхности IgM, а не IgG или IgA. IgM может быть гетерогенным и продуцируется в чрезмерном количестве, особенно на более поздних этапах заболевания. Кроме того, вирусы подгруппы В (но не подгруппы А) вызывают иммуносупрессию Т-клеток.
Вирус болезни Марека серотипа 2 усиливает развитие лимфоидного лейкоза у некоторых линий кур при заражении вирусом лейкоза. Анализ молекулярной гибридизации или гибридизации in situ фабрициевой сумки кур, зараженных одновременно ВЛП и вирусом болезни Марека (ВБМ) серотипа 2 позволил установить, что ВБМ тесно связан с трансформированными клетками бурсы. Недавние исследования in vitro также показали, что ВБМ серотипа 2 может увеличить экспрессию гена ВЛП и вируса саркомы Рауса.