Лейкоз птиц

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 4.25 (2 Голоса)

[Leukosisgallinarum (лат.); Gefluggelleukose, Leukemiedes Huhnes, Aviare Leukosen (нем.); Avian leukosis (англ.); Leukose aviare (франц.); Leukosis aviar (исп.)]

Лейкоз (гематолимфоматоз, диффузный остеопороз, лимфоидный лейкоз, эри-тробластоз, миелобластоз) — злокачественная болезнь, вызываемая вирусами и характеризующаяся поражением, главным образом, органов кроветворения. Лейкозно-саркомная группа заболеваний включает в себя множество передаваемых доброкачественных и злокачественных новообразований кур, вызванных членами рода птичьих ретровирусов, принадлежащих к семейству Retroviridae. В естественных условиях самым распространенным, безусловно, является лимфоидный лейкоз. Неоплазмы и их синонимы представлены в табл. 11.2. Эти вирусы птиц характеризуются по наличию у них фермента обратной транскриптазы, который направляет синтез провирусной ДНК-овой формы РНК-вого вируса. ДНК-овая форма является одной из составных частей жизненного цикла ретровируса. Именно благодаря ей семейство вирусов получило свое название. Лейкозные заболевания были известны, по-видимому, уже давно. Так, Ролофф сообщал о случае лимфосаркомата в 1868 г., а Капарини описал лейкемию домашней птицы в 1896 г. В 1905 г. Буттер-филд поставил диагноз нелейкозного лимфаденоза у трех кур в США. Эллерманн в L921 г. описал три типа лейкемии: эритроидную (внутрисосудистый лимфоидныи лейкоз), миелоидную (лейкоз костного мозга) и лимфоидную (лимфатический лейкоз).

Таблица 11.2 Неоплазмы, вызванные вирусами лейкозно-саркомной группы

Новообразования

Синонимы

Лейкозы

 

Лимфоидныи лейкоз

Болезнь большой печени, лимфатический лейкоз,

 

Висцеральная лимфома, лимфоцитома, лимфоматоз,

 

Висцеральный лимфоматоз, лимфоидныи лейкоз

Эритробластоз

Лейкемия, внутрисосудистый лимфоидныи лейкоз,

 

Эритролейкоз, эритромиелоз, эритробластоз,

 

Эритроидныи лейкоз

Миелобластоз

Лейкозный миелоидный лейкоз, лейкомиелоз,

 

Миеломатоз, миелобластоз, гранулемабластоз,

 

Миелоидный лейкоз

Миелоцитома(тоз)

Миелоцитома, нелейкозный миелоидный лейкоз,

 

Леикохлорома, миеломатоз

Опухоли соединительных тканей

 

Фиброма и фибросаркома

 

Миксома и миксосаркома

 

Гистиоцитная саркома

 

Хондрома

 

Остеома и остеогенная саркома

 

Эпителиальные опухоли

 

Нефробластома

Эмбриональная нефрома, аденокарцинома почки,

 

Аденосаркома, нефробластома, цистаденома

Нефрома

 

Гепатокарцинома

Сосочковая цистаденома, карцинома почки

Аденокарцинома поджелудочной

Аденокарцинома семенников

Железы Текома

 

Плоскоклеточная карцинома

 

Семинома

 

Эндотелиальные опухоли

 

Гемангиома

Гемангиоматоз, эндотелиома, гемангиобластомы,

Ангиосаркома

Гемангиоэндотелиомы

Эндотелиома

 

Мезотелиома

 

Родственные опухоли

 

Остеопетроз

Мраморная болезнь, болезнь толстых ног,

Менингиома

Спорадический диффузный остеопериостит,

Глиома

Остеопетроз домашних птиц

Лейкоз птиц распространен повсеместно. При обследовании некоторых птицехо-зяйств нашей страны установлено, что до 80 % проб сыворотки крови положительны в отношении вирусов лейкоза. При лейкозе наблюдают истощение, бледность гребешка, диарею, снижение яйценоскости. Различают три формы лейкоза: лимфоматоз (лимфоидный лейкоз), эри-тробластоз и миелобластоз.

При миелоидной и эритроидной формах лейкоза характерно появление в периферической крови значительного количества миело - и эритробластов. Содержание гемоглобина понижается до 15—20 %. Лимфоидный лейкоз — самая распространенная форма лейкоза птиц (92—97 % по отношению ко всем другим формам). Классические лабораторные штаммы вируса лимфоидного лейкоза птиц (RPL-12, L-29, L-31), выделенные и изученные на курах породы белый леггорн высокоин-бредной линии 15, вызывают разные формы неоплазий: лимфоидную, эритроид-ную, саркомы и др. У кур иногда можно наблюдать появление в мышечной и соединительной тканях опухолей, главным образом, сарком. Опухоли по гистологическим критериям могут быть идентифицированы как низкодифференцированные рабдомиосаркомы.

Вирусы лейкоза птиц (ALV) продуцируют различные опухоли, и классифицированы в субгруппы от А до J. Их свойства определяются белком вирусной оболочки. Изолированы ALV при вспышке гемангиомы среди цыплят отдельных ферм Турции. Используя специфические сыворотки к подгруппам А, В, С и J не удалось нейтрализовать этот вирус. Анализ частичной нуклеотидной последовательности гена env показал тесную гомологию с вирусом гемангиомы (AHV), изолированным при спонтанной инфекции AHV, однако имелись филогенетические отличия в отдельных аминокислотных замещениях. В противоположность АН V, продуцирующим большие ци-топатические изменения, изучаемый изолятне обнаруживал каких-либо цитоцидных изменений. Повреждений было больше всего на лицевой части, груди, голени или пальцах ног и состояли из больших циститных областей с обильным кровотечением и массивными геморрагическими повреждениями печени, легких, почек, сердца или яичников.

При лейкозах бывают изменены печень, селезенка, яичники, реже сердце и легкие. Пораженные органы увеличены в объеме. В брюшной полости видно скопление светло-желтого экссудата. На поверхности печени — серовато-белые и саркомопо-добные узлы различной величины. В органах заметно очаговое разрастание лимфоб-ластических клеток.

Сообщается о развитии аномального оперения у бройлеров, связанного с вирусом птичьего лейкоза (ALV) субгруппы J. Повреждения сводились к утончению и увеличенной прозрачности полой части пера и изреженности оперения крыльев. Световая микроскопия не обнаружила аномалий. Иммуногистохимия выявила значительное окрашивание анти-р27 в центральной области пульпы пера. Электронная микроскопия показала присутствие ретровирусных частиц в различных структурах пера и больше всего в местах, обнаруженных иммуногистохимией. Вирус птичьего лейкоза подгруппы J (ALV-J), изолированный в конце 80-х годов, вызывает преимущественно миелоидный лейкоз у цыплят мясного типа. Недавно в ALV-J инфицированном стаде кур был изолирован штамм, индуцирующий эрит-робластоз. В трех изолятах от этих кур оказались остро трансформирующиеся вирусы, судя по их способности трансформировать культуры костного мозга. Трансформированные клетки были очень похожи на миелоидные клетки, трансформированные ALV-J штаммом 966. Однако инфекция цыплят мясного типа или однодневных куриных эмбрионов привела к развитию эритробластоза. также как и миелоцитоматоза. Кроме этого, у инокулированной птицы были обнаружены хо-лангиома, тестикулярая опухоль и лимфомиелоидная гиперплазия. Полученные данные показали, что высокоонкогенные ALV-J могут индуцировать, кроме миело-цитоматоза, и другие поражения.

У молодых кур, индеек и диких куриц, зараженных некоторыми вирусами лейкоза (RAV-1, RAV-60, MAV-2 (0) и вирусы подгрупп В и D), развивается анемия, гепатит, имунодепрессия и истощение. Некоторые из них могут погибнуть. У кур, инокулиро-ванных вирусом лейкоза птиц RAV-1, отмечалось развитие миокардита и хроническое расстройство кровообращения. У кур, зараженных RAV-7, развиваются неврологические признаки, в том числе атаксия, заторможенность и нарушение равновесия из-за негнойного менингоэнцефаломиелита. После инфицирования in ovo штаммом RAV-1 наблюдается устойчивая инфекция центральной нервной системы с воспалительными поражениями и клиническими признаками. Анемия является следствием апластиче-ского кризиса в костном мозге, где эритроциты не могут внедрять железо в гемоглобин и проявляют уменьшенное время выживания. Введение антивирусных антител предотвращает развитие анемии.

Подавление иммунитета может приводить к атрофии или аплазии лимфоидных органов, гипергаммаглобулинемии, пониженному бластогенезу, вызванному митогеном, и уменьшенной реакции антител. Изменения в иммунной системе, вероятно, являются следствием прекращения созревания В-клеток и блокады в развитии Т-кпе ток супрессора из-за синтеза функционального интерлейкина-2. В дополнение к остановке развития и атрофии лимфоидных органов, RAV-7 вызывает ожирение, высокие уровни триглицерида и холестерина, пониженные уровни тироксина (гипотиреоз) и повышенные уровни инсулина. Частые случаи остановки развития могут быть связаны с подавлением вирусом деятельности щитовидной железы. Несмотря на отсутствие обширных исследований, известно, что вирусы лейкоза имеют сходные физиологические воздействия в полевых условиях. Субклинические физиологические воздействия, вероятно, вносят свой вклад в пониженную продуктивность, описанную ниже.

Вирусная инфекция в отсутствие явных признаков заболевания может неблагоприятно воздействовать на продуктивность кур-несушек. Куры, являющиеся разносчиками вируса, несут на 20—35 меньше яиц на курицу при содержании в птичнике до 497-дневного возраста, позже становятся половозрелыми, у их яиц тоньше скорлупа. Смертность таких кур от причин, не связанных с новообразованиями, выше на 5—15%, половая способность на 2,4 % ниже, выводимость цыплят меньше на 12,4 %. Эти вирусы имеют сходное воздействие на бройлерные породы кур, но, помимо этого, вызывают устойчивое, пусть и небольшое (до 5 %) замедление скорости роста. Рассмотрены другие исследования пониженной продуктивности кур, пораженных вирусом лейкоза птиц, а также генетические последствия такого поражения. Снижение выработки спермы не связывают с присутствием в ней ВЛП, тем не менее имеется ряд доказательств воздействия ВЛП на качество спермы и способность к оплодотворению.

 Морфология и химический состав. Все вирусы лейкоза имеют сферическую форму диаметром около 100 нм, мол. м. РНК составляет 10—12 МД, содержание Г 25—30; А 19—26; Ц 22—27; У 22—29 %. Тип симметрии нуклеокапсида не установлен. Наружная мембрана вирионов формируется в процессе почкования их на мембранах клетки. Оболочки вирусов лейкозов птиц содержат липиды, а также белки и углеводы. Ли-пиды обусловливают низкую величину плавучей плотности (1,14—1,20 г/см3) и чувствительность вируса к фосфолипазе и растворителям липидов. РНК-зависимая ДНК-полимераза, обеспечивающая синтез ДНК-интермедиата, способного к интеграции в клеточный геном. Вирус миелобластоза содержит 2 обратные транскриптазы. Одна состоит из а-, другая из (3-субъединиц. Для данного вируса характерно присутствие АТФ-азы. Кроме обратной транскриптазы и АТФ-азы, в очищенных препаратах вируса саркомы Рауса обнаружена РНК-аза. Причем этот фермент в вирусной частице разобщен с РНК. Кроме ДНК-полимеразы, в онкорнавирусах птиц найдено более 10 ферментов, которые могут иметь непосредственное отношение к репродукции этих вирусов в чувствительных клетках. Вирионная РНК обладает матричной активностью в бесклеточных системах биосинтеза белка из бактерий и животных клеток.

На ранней стадии инфекции ФЭК вирусом саркомы Рауса выделена вирусспеци-фическая ДНК 2 форм: А (мол. м. 7МД) и В (мол. мЛМД). Плавучая плотность этих форм в CsCI 1,605 и 1,570 г/см3 соответственно. Форма А, в основном, представлена замкнутыми кольцами, а форма В — неполными линейными молекулами. ДНК, обнаруженная в онкорнавирусах птиц, ассоциирована с ядром вириона и не является контаминацией со стороны клеток хозяина, причем она имеется только у трансформирующего вириона RSV (SR-RSV-t) и нет ее у дефектного по трансформации вируса (SR-RSV-td). Видимо, присутствие ДНК в ядре только трансформирующих вирусов объясняется тем, что ДНК играет какую-то роль в трансформации клеток, либо включается в вирион только в трансформированных клетках.

Несмотря на то, что вирус саркомы Рауса был выделен еще в 1911 г., до сих пор нет однозначных сведений относительно структуры и размера его РНК - генома. Ни одна из молекул РНК, экстрагированная из вирионов этого вируса, не является репродук-тивно инфекционной. Большинство авторов склонны считать, что 60—70S РНК является агрегатом субъединиц, т. е. геном вируса саркомы Рауса сегментирован. Имеется и другая точка зрения, что 30—35S РНК служит предшественником 60—70S РНК. Вторичная структура идентифицированного сигнала упаковки MW(160h.) вируса лейкоза-саркомы птиц установлена с использованием филогенетического анализа, компьютерного моделирования и гетерологичной упаковки точечных мутантов. Данные, полученные in vivo, хорошо согласуются с компьютерной моделью. Изучение упаковки показало, что для эффективной упаковки важны несколько структур, включая однонитевой выступ, содержащий инициирующий кодон короткой открытой рамки считывания uORF3, и смежные структуры стебля, и не нужна шпилька L3 на З'-кон-це MW. Таким образом, минимальный сигнал упаковки MW имеет длину 82 н. м. и состоит из шпильки ОЗ. В геноме цыплят обнаружен новый родственный эндогенным ретровирусам птиц (ЭРВП) элемент EAV-HP, у которого ген env гораздо более идентичен гену env прототипного штамма HPRS-103 ВЛП подгруппы J, чем ранее описанный ЭРВП Е51 (75 %). Саузерн-блот-гибридизация показала, что родственные EAV-HP последовательности отличаются от ЭРВП EAV-0 и присутствуют во всех изученных линиях цыплят, а также у кустарниковых диких кур, но отсутствуют у нескольких других видов птиц. Возможна определенная роль этих эндогенных последовательностей в эволюции ВЛП подгруппы J. Диаметр вирусов составляет 80—145 нм. Характерное значение плавучей плотности в сахарозе для ретровирусов типа С составляет 1,15-1.17 г/мл.

В состав вируса миелобластоза птиц входят 30—35 % липидов, 60—65 % белков, 2,2 % РНК и небольшое количество ДНК, возможно, клеточного происхождения.

РНК основных размеров проходят седиментацию при 60—70S. Это вирусные геномы. В то же время, РНК с 4—5S в основном являются тРНК носителя. Как полагают, эти РНК случайно включены в вирион и не играют никакой роли в репликации вируса. Однако встречается тРНК-затравка, связанная с 70S РНК, которая играет свою роль в жизненном цикле вируса. Присутствует также небольшое количество 18S и 28S рибосомных РНК, вирусных и клеточных мРНК и ДНК. 60—70S геномная РНК является димером и может расщепляться на две субъединицы по 34—38S, которые, как полагают, представляют собой диплоидный геном. Эти субъединицы геномной РНК являются мРНК. Проведено картирование генов у нескольких ретровирусов птиц. Последовательности структурных генов вируса лейкоза птиц от 5'- до З'-конца молекулы РНК представлены четырьмя генами gag, pro, pol, env. Эти гены кодируют соответственно белки группоспецифичных антигенов вириона, протеазу, РНК-зависимую ДНК-полимеразу (обратную транскриптазу) и гликопротеины наружной оболочки вирионов. Структурные гены фланкируются концевыми геномными последовательностями, связанными с репликацией и трансляцией вирусной РНК. Геном состоит из 7,2 тысячи пар нуклеотидов. Сильно трансформирующие вирусы имеют дополнительные геномные последовательности, связанные с онкогенной трансформацией.

Недефектный вирус саркомы Рауса (ВСР) имеет генетический состав gag/ pro-pol-env-src. Дополнительный ген src, ответственный за саркомную трансформацию, был первоначально захвачен из нормального клеточного гена, клеточного src. Включение в состав этого гена привело к небольшому укрупнению приблизительно 35S субъединиц ВСР по сравнению с такими же субъединицами медленно трансформирующих вирусов лейкоза. Ген src — это один из ряда генов клеток хозяина, названных прото-онкогенами или генами one. Они связаны с сильной трансформацией. Клеточные и вирусные варианты генов one, а также их специфические вариации, такие, как ген src, различаются по приставке v - и с-. Специфичные гены v-onc вместе с копиями с-onc в нормальных клетках присутствуют в других сильно трансформирующих вирусах, например, erbA, erbB (ВЭП) myb (ВМП), tyc (вирус миелоцитоматоза птиц), fps (вирусы сарком Фуджинами и PRCII), yes (вирусы сарком Y73 и Эша), sea (вирус S13) и ros (вирус UR2).

Вирус эндотелиомы МН2 имеет два онкогена, туе и mil, a E26-myb. Медленная трансформация, как при лимфоидном лейкозе (ЛЛ), вызвана побочным механизмом, который зависит не от v-onc, а от активации с-опс. При лимфоидном лейкозе в качестве такого гена выступает с-тус. В настоящее время определены и клонированы ДНК многих вирусов лейкозно-саркомной группы. Причем для ряда вирусов последовательности оснований ДНК были определены полностью.

Сердцевина вириона содержит пять негликозилированных белков, кодированных геном Gag. Полагают, что р27, главный антиген gs (27 кД), являющийся компонентом капсидного антигена (КА) (капсула сердцевины), а также р19 (матрица МА) и р]2 (нуклеокапсид НК) вовлечены в процессинг и упаковку РНК. В то же время р15 и протеаза (ПР) вовлечены в расщепление предшественников белков и р10. Имеются также другие менее значимые полипептиды. В оболочке вириона содержится два гли-копротеина, кодированных геном Env. Это gp85 (su), представляющий собой структуры в виде закругленных головок на поверхности вируса, которые определяют специфичность подгруппы ретровирусов птиц, а также gp37 (TM), представляющий трансоболочковую структуру, которая прикрепляет головки к оболочке. Два этих белка оболочки связаны таким образом, что образуют димер, названный вирионным глико-протеином (ВГП).

Обратная транскриптаза находится в сердечнике. Она кодируется геном Pol. Это комплекс, состоящий из субъединиц 95 кД и субъединиц 63 кД. Он обладает активностями РНК - и ДНК-зависимой полимеразы и ДНК-РНК гибрид-специфичной рибо-нуклеазы Н. Еще одним ферментом, кодируемым вирусом, является геном р32 (IN). Это белок интегразы, необходимый для интеграции вирусной ДНК в клетку хозяина. В вирионах были выявлены и другие виды ферментов, которые могут быть клеточными примесями. С практической точки зрения, важным явл'яется присутствие в вирусе миелобластоза птиц (извлеченном из крови инфицированных кур или из культур миелобласт) аденозинтрифосфатазы, происходящей из клеточной мембраны и включенной в оболочку вирусной частицы в процессе развития. Этот фермент дефосфори-лирует аденозинтрифосфат, поэтому такая активность может использоваться для исследования вируса. Клетки, не имеющие на своей поверхности этот фермент, высвобождают вирус, который лишен активности.

При проведении полимеразной цепной реакции с праймерами для консервативных участков ретровирусных генов протеазы и обратной транскриптазы в геноме курицы обнаружен новый эндогенный ретровирус. Он гомологичен MLV-родственным ретровирусам, встречающимся в геноме многих позвоночных, но не родствен экзогенным MLV-родственным ретровирусам, инфицирующим кур. Это первое сообщение о курином эндогенном ретровирусе, не принадлежащем к роду ALV (вирус лейкоза птиц). Новый ретровирус экспрессируется в эмбриональных фибробластах.

Репликация вируса. Так же, как и у других ретровирусов, репликация вирусов лейкозно-саркомной группы характеризуется образованием ДНК-провируса, который интегрируется линейно в геном клетки хозяина. Это происходит под управлением обратной транскриптазы. Впоследствии гены провируса транскрибируются в вирусные РНК, которые транслируются для продуцирования предшественника и созревания белков, из которых состоит вирион. Проникновение в клетки зависит от наличия (преимущественно в клеточной оболочке) кодированных геном хозяина рецепторов, характерных для каждой вирусной подгруппы. Идентифицировали и охарактеризовали клеточные рецепторы для ВЛП подгрупп А, В, D и Е. Рецептор Tva для подгруппы А ВЛ П является членом рецептора липопротеина малой плотности из семейства белков. Этот рецептор связывается специфически с белками оболочки (env) вируса и индуцирует конформационные изменения в белках env, которые сходны с таковыми, определяющими активную форму слияния вирусного гликопротеина. В отличие от рецептоpa Tva, рецепторы Tvb для подгрупп В, D и Е вируса являются членами семейства белка-рецептора фактора некроза опухоли (рФНО). Подобно другим членам этого семейства белков, белки Tvb обладают доменом цитоплазматической гибели и способны индуцировать гибель клеток после связывания с растворимым реагентом, специфичным для env подгруппы В. Получена модель, в которой взаимодействия между белками env подгрупп В и D и их рецепторов Tvb участвуют в действии на цитоплазму, которое связано с инфекцией клеток ВЛП-В или D.

Уникальными особенностями ретровирусов, характеризующими вирусную репликацию, являются образование (под влиянием вирусной обратной транскриптазы) ре-тровирусной ДНК из матрицы вирусной РНК, интеграция вирусной ДНК (провиру-са) в геном клетки хозяина и образование новой вирусной РНК из матрицы прови-русной ДНК. Основные этапы формирования ретровирусной ДНК следующие:

1) синтез первой (минус) цепи вирусной ДНК, образование гибрида РНКДНК;

2) удаление РНК из гибрида РНК-азой-Н и образование на матрице минус-цепи ДНК второй (плюс) цепи ДНК, в результате чего образуется линейная двухнитчатой ДНК (эти двойные молекулы можно выявить в цитоплазме клетки через несколько часов после инфицирования); 3) миграция линейной ДНК к ядру клетки.

Линейная вирусная ДНК линейно интегрируется в ДНК хозяина под влиянием фермента интегразы. Такая интеграция может происходить во многих местах, причем, инфицированные клетки могут иметь до 20 копий вирусных ДНК. Гены прови-руса могут находиться в том же порядке, как копии их РНК в вирионе. На каждой из сторон этих генов имеются одинаковые последовательности нуклеотидов — длинные концевые повторы (ДКП). Они состоят из повторяющихся последовательностей, происходящих из краевых участков вирусной РНК, и содержат последовательности промоторов и энхансеров, обеспечивающих транскрипцию вирусной ДНК в РНК. Длинные концевые повторы могут также вызывать аномальную транскрипцию генов хозяина (обычно в нижних участках ДНК), что ведет к онкогенезу.

Образование новых вирионов в инфицированных клетках является результатом транскрипции и трансляции провирусной ДНК. Транскрипция вирусной РНК на матрице провирусной ДНК под влиянием РНК-полимеразы хозяина. Молекулы вирусных РНК дают начало РНК вместе с полирибосомами. Кроме того, они служат в качестве геномной РНК во вновь образованных вирионах. Новую вирусную РНК можно определить через 24 ч после инфицирования. Транскрипция мРНК, связанных с полирибосомами. При этом происходит образование белков, кодированных генами gag, pol и env. Такие белки составляют вирион.

Продукт из генов gag и pol представляет собой большой белковый предшественник (180 кД) PR180, который расщепляется с образованием полипротеина предшественника Рг76 (76 кД). Из этого полипротеина происходят белки сердцевины вириона: р39 (MA), p27 (CA), pl2 (NC), pl5 (PR) и рЮ. Кроме того, полипротеин Рг180 приводит к появлению ферментов обратной транскриптазы ОТ (рбЗ и р95) и интегразы (ИН) (р32). Продуктом гена env является белок предшественника (92 кД) gPr92, из которого происходят белки вирусной оболочки gp85 (SU) и gp37 (TM). Вирусные белки локализованы в плазматической мембране клетки. Там можно увидеть структуры в виде полумесяца, которые развиваются в вирионы, отпочковывающиеся от клетки.

Присутствие генов ev в клетках приводит к положительным реакциям при выполнении твердофазного иммуно-ферментного анализа (ELISA), реакции связывания комплемента для вирусов лейкоза птиц (COFAL) и теста на хелперный фактор цыплят (chf). Передача генов ev от родителей к потомству была названа генетической передачей вируса лейкоза, что отличается от вертикальной (врожденной) и горизонтальной (контактной) передачи вирусов в инфекционной форме. Анализ частичной нуклеотидной последовательности гена env вируса, выделенного в Турции, показал тесную гомологию с вирусом гемангиомы (AHV), изолированным при спонтанной инфекции AHV, однако имелись филогенетические отличия в отдельных аминокислотных замещениях. В противоположность AHV, продуцирующим большие цитопа-тические изменения, изучаемый изолят не обнаруживал каких-либо цитоцидных изменений. Повреждений, обусловленных этим вирусом, было больше всего на лицевой части, груди, голени или пальцах ног и состояли из больших циститных областей с обильным кровотечением и массивными геморрагическими повреждениями печени, легких, почек, сердца или яичников.

Вирусы лейкозов птиц чувствительны к эфиру, актиномицину Д, быстро инактивируется при 46 °С и выше, погибают при 37 °С в течение 2 суток, при 4 °С — через 3—4 недели. При 60 °С инактивация происходит за 1 '/2 — 2 ч, при 100 °С — за 5—10 мин. Под действием УФ-лучей вирусы инактивируются за 45—60 мин. Мгновенная гибель их происходит под действием 30 %-ного раствора хлорамина и 5 %-ного раствора карболовой кислоты. В лиофилизированном состоянии вирусы лейкоза птиц сохраняют активность до 9 лет.

Антигенная структура. В состав онкорнавирусов птиц входят типо - и группоспеци-фические АГ. Типоспецифический АГ обусловлен белковыми компонентами вирусной оболочки и характерен для каждого из 4 известных вирусов лейкоза. Вирусы с различными типоспецифическими АГ имеют гликопротеидный компонент с различной РНК.

Вирусы ретикулоэндотелиоза — это самостоятельная группа онкорнавирусов птиц. Помимо вируса ретикулоэндотелиоза, в новую группу онкогенных вирусов птиц включены выделенные недавно куриный синцитиальный вирус, вирус инфекционной анемии уток и вирус некроза селезенки. В РН эти вирусы серологически родственны, но не идентичны. Наиболее вирулентным для цыплят оказался вирус некроза селезенки.

Все вирусы лейкозно-саркоматозного комплекса (ALV) разделены на шесть АГ-подгрупп: A (RSV-RAV-1, RSV-RIF-1, RSV-FAV-1, AWV-1, RPL-12, MH-RSV, SR-RV-1); В (RSV-RAV-2, SR-RSV-2, AWV-2, RSV-RIF-2, HA-RSV, RAV); С (RSV-RAV-3, PR-RSV); D (CZ-RSV, RSV-RAV); Е и F (RAV-50, RPL-22, RAV-5 и др). Разделение вирусов на АГ-подгрупы основано на различии оболочек вирионов, интерфирирующей активности в отношении вируса саркомы Рауса и способности поражать определенные фенотипы клеток. В природе наиболее распространены вирусы подгруппы А, реже В и С и почти не встречаются представители остальных подгрупп (D, E, F). Правда, недавно описана новая группа вирусов саркомо-лейкозного комплекса птиц, относящихся к подгруппе D (вирус золотистых фазанов). Разделение выполнено на основе диапазона их носителей в куриных эмбриональных фибробластах различных генетических типов, образцов интерференции с другими членами тех же или иных подгрупп, а также на основе антигенов вирусной оболочки, чья идентификация выполнена посредством реакции нейтрализации вируса или сыворотки (табл. 11.3). Различие в свойствах связано с гликопротеинами оболочки, присутствующими на вирусе.

Вирусы подгрупп А и В встречаются в полевых условиях так же часто, как обычные экзогенные вирусы. А вирусы подгрупп С и D встречаются в полевых условиях гораздо реже. Вирусы подгруппы Е включают распространенные повсюду экзогенные вирусы лейкоза низкой патогенности. Вирусы подгруппы J были выделены недавно от кур мясных пород. Вирусы двух дополнительных подгрупп (F и G) были получены от обыкновенных, золотых и алмазных фазанов. Считается, что вирусы подгруппы G отличаются от куриных вирусов. Эндогенный вирус подгруппы Н был выделен от венгерской куропатки, а вирус подгруппы I — от шлемоносного хохлатого перепела. Ряд лабораторных штаммов вирусов птиц лейкозно-саркомной группы являются генетически дефектными, у них отсутствует ген вирусной оболочки. Они относятся к той же группе, что и вирусы-помощники лейкоза, использующиеся для их размножения.

В связи с разнообразием АГ свойств онкорнавирусов птиц для индикации их в исследуемом материале и изучения распространения в хозяйствах следует использовать штаммы наиболее ярких подгрупп: A (RSV-RAV-1), В (RSV-RAV-2), С (PR-RSV) и D (CZ-RSV).

С помощью РН штаммы вируса саркомы Рауса удалось разделить на четыре серологические подгруппы: A (RSV-RAV-1 и Бриан), родственные в АГ отношении вирусу лимфоидного лейкоза, миелобластоза и эритробластоза; В (RSV-RAV-2 и Шмидт-Руппин-Shmidt-Ruppin-SR), родственные вирусу миелобластоза; С (Карр); D (Бриан С, PRL-22, Энгельберт-Холм, Дядькова). Возможен переход представителей одной подгруппы вируса саркомы Рауса в другую. Так, в экспериментальных условиях показано превращение шт. RSV-RAV-1, RSV-RIF-1 в шт. RSV-RAV-2, RSV-R1F-2 и наоборот.

Установлено, что в плазме крови кур, больных лейкозом, вызванным вирусом миелобластоза, содержится два вируса (VMP-1 и VNP-2), различающихся между собой по АГ-структуре. Первый относится к подгруппе А, второй — к подгруппе В.

В 1960 г. выделен в культуре фибробластов КЭ вирус, который обладал свойством ингибировать репродукцию вируса саркомы Рауса. Он был назван вирусом RIF (Resistence inducidi factor — фактор, вызывающий резистентность). Вирус саркомы Рауса, размножаясь в течение нескольких дней, трансформирует культуру фибробластов КЭ в опухолевые очаги. В естественных условиях вирус RIF встречается в эмбрионах достаточно часто. Считают, что вирус R1F сходен с возбудителем лимфоидного' лейкоза. Клетки КЭ, зараженные этим вирусом, становятся частично или полностью устойчивыми к повторному заражению вирусом саркомы Рауса. Этот метод положен в основу индикации возбудителей лейкоза птиц, поскольку установлено, что хотя вирусы лейкоза птиц весьма разнообразны в АГ отношении, однако феномен интерференции между ними и вирусом саркомы Рауса иммунологически строго специфичен: трансформирующая активность вируса Рауса подавляется только таким штаммом вируса лейкоза контаминанта ФЭК, который соответствует ему в АГ отношении и принадлежит к одной группе. Вирусы внутри подгруппы нейтрализуются перекрестно в различной степени, однако вирусы других подгрупп не подвергаются такой нейтрализации. Исключение составляет частичная перекрестная нейтрализация между подгруппами В и D. Антисыворотка против определенного штамма вируса имеет тенденцию нейтрализовать гомологичный вирус сильнее, чем гетерологичные вирусы той же самой подгруппы. Вирусы внутри подгруппы имеют различную способность индуцировать иммунологическую толерантность к другим членам подгруппы. Это показывает наличие внутри подгруппы различных антигенных типов. В целом вирусы подгруппы В более гетерогенны, чем члены подгруппы А (табл. 11.3).

Онкогенные свойства. В Составе генома вируса саркомы птиц (ASV) обнаружен специфический трансформирующий ген (DNAsarc). Все штаммы ASV содержат sarc (специфические последовательности), РНКлейкозных вирусов птиц, РНК саркоматозных вирусов мышей и геноме ДНК-содержащих онкогенных вирусов. Групповой специфический АГ (gs-АГ), открытый Хюбнером и др. в 1964 г., является основным белком с различной электрофоретической подвижностью.

Штаммы вирусов леикозно-саркомной группы болезней птиц

Таблица 11.3Класс вируса

Класс вируса согласно подгруппе

Вирусы

Неустановленной

Подгруппы

(дефектные вирусы)

А

В

С

D

E

J

Вирус лимфоидного лейкоза (ВЛЛ)

RAV-1,RIF-1, MAV-1.RPL-1, HPRS-F42

RAV-2, RAV-6, MAV-2

RAV-7, RAV-49

RAV-50, CZAV

RAV-60

   

Вирус эритробластоза птиц (ВЭП)

           

AEV-ES4 AEV-R

Вирус миелобластоза птиц (ВМП)

           

AMV-BA1-A, Е26

Вирус саркомы птиц

SR-RSV-A, PR-RAV-A, EN-RSV, RSV29

SR-RSV-B, PR-RSV-B, HA-RSV

B77, PR-RSV-C

SR-RSV-D, CZ-RSV

SR-RSV-E, PR-RSV-E

 

BH-RSV, BS-RSV, FuSV, PRCll, PRCIV, ESV, Y73, UR1, UR2

Вирус миелоцитомы (эндотелиомы)

         

HPRS-

103

MC29,

MH2, СМИ, ОК10

Эндогенный вирус (ЭВ) (отсутствие новообразований)

       

RAV-0, ILV

EAV

 

Он присутствует в опухолях птиц, индуцированных вирусом саркомы Рауса или другими лейкозогенными вирусами кур; gs-АГ строго специфичен для всей группы птичьих РНК-содержащих онко-генных вирусов, что облегчает прижизненную диагностику лейкоза птиц. Он постоянно синтезируется в клетках раусовских опухолей. Вероятно, генетическая информация вируса, ответственная за его синтез, присутствует в геноме опухолевой клетки, причем в интегрированной с ним форме. В gs-АГ онкорнавирусов птиц содержится два различных АГ-компонента — gs-a и gs-b. Если учесть, что gs-АГ обнаруживается в нормальных безлейкозных эмбрионах, то этот факт подтверждает гипотезу Хюбне-ра-Тодаро о наличии во всех нормальных клетках онкогенных вирусов, находящихся в интегрированном состоянии с геномами клеток.

Группоспецифический gs-АГ передается при скрещивании кур как аутосомальный ген, подчиняющийся менделевскому распределению. Относительно связи между находками gs-АГ, вируса и AT имеется интересное сообщение. В яичном белке кур, в крови которых обнаружен вирус лейкоза, но нет AT, gs-АГ обнаружен в 100 % случаев, тогда как в белке яиц, снесенными курами, в крови которых обнаружены AT, gs-АГ выявлен лишь в 29 % случаев. В белке яиц кур, в крови которых вирус не обнаруживается, gs-АГ находят редко.

По типоспецифическому АГ вирусы миелобластоза и эритробластоза отличаются от вирусов лимфоматоза и саркомы Рауса. В состав первых двух вирусов входят специфический для вируса АГ, проявляющий свою активность в организме хозяина, и АГ, идентичный АГ нормальной куриной ткани, активный только в гетерологичном организме. Кроме того, в состав вируса миелобластоза входит форсмановский АГ. Метод гнездовой ПЦР использован для анализа интеграции провирусов в гены c-tyc и с-егЬВ на ранней стадии индукции опухолей после заражения эмбрионов цыплят вирусом лейкоза птиц (ВЛП). Из фабрициевых сумок зараженных цыплят в возрасте 35 дней амплифицировали от 5 до 8 разных провирусных интеграции в c-tyc. Оценено, что одна из 300 клеток бурсы имеет интеграцию ВЛП в этот ген. Эти интеграции сгруппированы в З'-половине интрона 1 c-tyc, как и в лимфомах бурсы. Такие же число и распределение интеграции ВЛП в интрон 1 c-tyc обнаружены в костном мозге и селезенке. Область c-tyc является обычной мишенью для интеграции. Хотя все ткани имеют одинаковый уровень заражения ВЛП, клетки с интеграциями в c-tyc гораздо чаще встречаются в бурсе. Анализ интеграции ВЛП в ген с-erbB обнаружил кластер вставок в интроне 14, ассоциированный с эритробластозом. Провирусные вставки в с-егЬВ встречаются с одинаковой частотой в костном мозге, селезенке и бурсе и распределены случайным образом перед экзоном 15. Это показало, что клетки с интеграцией ВЛП в интрон 14 подвергаются селекции во время индукции эритробластоза.

Сильно трансформирующие вирусы несут отличающие их гены V-Onc (происходящие из обычных клеточных последовательностей), которые ответственны за раннее начало неопластической трансформации. Вирус саркомы Рауса несет ген src, который кодирует характерный для трансформации фосфопротеин (60 кД) рбО и обладает протеинкиназной активностью. Считается, что именно фенотипное изменение, связанное с высокими уровнями рбО, является ответственным за трансформированное состояние. Гены One, Связанные с другими сильно трансформирующими вирусами, кодируют характерные для трансформации белки. Если говорить в целом, продукты онкогенов попадают в четыре класса: факторы роста, рецепторы факторов роста, преобразователи сигнала и факторы транскрипции ДНК.

Медленно трансформирующие вирусы, например, те, которые вызывают лимфоидный лейкоз, не имеют гена V-Onc. Тем не менее они трансформируют клетки косвенно посредством активации клеточного гена V-Onc. Молекулярные исследования показывают, что провирус ВЛП интегрируется внутри локуса С-тус Хозяина, а затем экспрессируется под влиянием промоторной последовательности вирусной ДКП. Генетические делеции — это особенность интегрированного проируса при индуцирро-вании лимфомы. Полагают, что усиленная экспрессия гена с-тус посредством «включения этого промотера» приводит к инициации лимфомагенного процесса. Однако многошаговая активация других трансформирующих генов, таких, как В-Lym и С-тус, Может оказаться необходимой для полного развития лимфоидного лейкоза. Ряд рет-ровирусов птиц имеют дефектные геномы. Они появляются спонтанно или в результате экспериментального мутагенеза. Некоторые сильно трансформирующие вирусы, например, ряд штаммов вируса саркомы Рауса, потеряли свой ген V-Onc и способность быстро трансформироваться. Они называются дефектными мутантами трансформации (Id) И имеют онкогенный потенциал, подобно тому, что наблюдается у недефектных вирусов лейкоза. Другие вирусы (вирусы острой лейкемии) являются дефектными для генов, необходимых для репликации. Это дефектные мутанты репликации (Rd). Они трансформируют клетки, но при этом им требуется присутствие вируса-помощника, чтобы они могли размножаться. Например, у BH-RSVh вируса миелобла-стоза птиц отсутствует ген Env, А у вируса эритробластоза птиц и МС29 нет генов Ро/ И Env. Мутанты Id и Rd являются дефектными в любых условиях (безусловные мутанты). Условные мутанты действуют лишь при позволительных условиях и служат примером чувствительных к температуре мутантов (Ts).

Обычный куриный геном содержит несколько классов или семейств птичьих рет-ровирусоподобных элементов. Они включают эндогенные вирусные локусы (ev), выявленные около 30 лет назад, недавно открытые умеренно повторяющиеся элементы EAV и ART-CH, а также часто повторяющийся элемент CRI. Генетические последовательности локуса ev связаны с вирусами лейкоза птиц подгруппы Е. Они присутствуют в виде полных или дефектных геномов почти у всех обычных кур. Некоторые локусы ev расположены на отдельных хромосомах, встречаются в соматических клетках и скоплениях гаплоидных клеток и передаются генетически их потомству одного и другого пола в соответствии с правилом Менделя. К настоящему времени идентифицировано 29 локусов ev, но очевидно, что их существует больше. Каждая курица имеет в среднем 5 локусов. Фенотипичная экспрессия этих локусов изменяется в зависимости от присутствующих вирусных генов. Однако механизм такого изменения изучен недостаточно.

Антигенная активность. У кур, зараженных вирусами лейкоза, вырабатываются ВНА. Наибольшей АГ активностью обладает вирус саркомы Рауса, поэтому его используют для изготовления специфических сывороток с целью идентификации вновь выделенных вирусов лейкоза. Остальные вирусы лейкоза индуцируют у птиц AT в незначительном титре.

При постоянной циркуляции вирусов в стаде кур у вновь попавших особей через 2—3 недели титр AT в крови достигает 1:8 — 1:10. Кб месяцам пребывания в таком стаде, если у этих кур не развивается лейкоз, титр AT составляет 1:100, достигая к концу года Г: 120 — 1:150. Такие птицы регулярно передают AT потомству, предохраняя его от заражения лейкозом в течение 2 недель с момента вылупления.

Антигенная вариабельность и родство. В Настоящее время у птиц обнаружены две группы ретикулоэндотелиоза (REV). Вирусы обеих групп сходны между собой по наличию 60—70S ДНК и обратной транскриптазы. Они реплицируются через ДНК-про-вирус. Различия между вирусами состоят в том, что ALV имеют эндогенную РНК-зависимую ДНК-полимеразную активность, а в REV ее нет. Предполагают, что онкорнавирусы птиц возникли из части клеточного генома последовательным переносом информации с ДНК. Sarc найдены и в нормальных клетках птиц (цыплят, перепелок, уток). Они находятся в неповторяющейся части ДНК и представляют собой одну (или несколько) копию на каждый гаплоидный набор ДНК клеток птиц. Транскрипция sarc идет на низком уровне в нормальных клетках (1—3 копии на клетку) и лишь незначительно возрастает в клетках, трансформированных химическими канцерогенами (3—8 копий).

В экспериментальных условиях вирусы лейкоза практически патогенны для птиц всех видов. Наиболее онкогенен вирус саркомы Рауса. При парентеральном введении его птицам происходит индукция быстрорастущих опухолей. В зависимости от штамма, дозы, породы и возраста гибель цыплят наступает на 30—60-й день с момента введения возбудителя. Особенно восприимчивы молодые особи. Поданным отечественных исследователей, в РА наиболее чувствительны к вирусу саркомы Рауса куры породы бурый и белый леггорн, наиболее резистентны куры породы Суссекс, корниш и московская.

Известно, что чувствительность или резистентность той или иной породы кур к вирусу саркомы Рауса может быть обусловлена присутствием AT к вирусам лейкоз-но-саркоматозного комплекса (ALV) и передачей их потомству; интерференцией между возбудителем лимфоматоза, контаминирующим эмбрионы (и вылупившихся цыплят), вирусом саркомы Рауса и генетическими особенностями клеток организма птицы. Основную роль, ответственную за резистентность или чувствительность птицы к вирусу саркомы Рауса, играют генетические особенности организма. Благодаря этому, при оценке чувствительности линий и пород кур к лейкозу можно использовать в качестве разрешающего агента вирус саркомы Рауса. Если культуры той или иной линии резистентны к нему, они невосприимчивы к лейкозу. Используя этот принцип за рубежом выведены резистентные и чувствительные к лейкозу линии и породы кур. Куры линии 15 породы бурый леггорн и куры эдинбургской породы высокочувствительны (до 100 %) к вирусам лейкозно-саркоматозного комплекса, а куры линии 7 и 8 породы белый леггорн резистентны. Вирус саркомы Рауса оказался способным преодолевать межвидовые барьеры, проявляя онкогенную активность на пресмыкающих (змеи, удавы, ящерицы) и млекопитающих (кролики, крысы, хомяки, морские свинки, детеныши обезьян). Кроме того, он способен трансформировать диплоидные клетки и фибробласты человека.

При совместном культивировании клеток безвирусных перепелиных опухолей с заведомо инфицированным лейкозом материалом, клетки саркомы перепелок теряют свой первоначальный признак (безвирусность) и приобретают способность реплицировать активный вирус саркомы Рауса. Этот феномен может служить одним из методов индикации опухолеродных вирусов птиц.

У больных птиц вирусы лейкозов локализуются в опухолях, в крови, паренхиматозных органах, главным образом в печени. В организме конгенинтально зараженных петухов вирус накапливается в большем количестве в печени и тестикулах, чем в крови. В то же время петухи не передают вирус со спермой. Вирус миелобластоза встречается в высоких концентрациях в плазме больных миелобластозом птиц. В крови пораженных лимфатическим лейкозом кур вирус может достигать значительных концентраций (до 106 вир. частиц/1 мл). У кур, инфицированных вирусом лейкоза, в первые 2—3 суток наблюдается интенсивное размножение в крови возбудителя, однако птицы не выделяют его во внешнюю среду. Вирусемию сменяет вирусоносительство в течение всей жизни. Вирусовыделение начинается с момента размножения возбудителя в паренхиматозных органах и продолжается до гибели птицы. От больной птицы вирус выделяется со слюной, экскрементами и яйцами. АЬУбыл изолирован почти из всех инокулированных птиц и 40 % контактирующих птиц. ПЦР показала, что вирусные изоляты относятся к субгруппе J. Массовое присутствие вируса обнаружено в тканях пера инфицированных птиц, который впоследствии может передаваться и диагносцироваться.

Метод гнездовой ПЦР использован для анализа интеграции провирусов в гены с-тус и с-erbB на ранней стадии индукции опухолей после заражения эмбрионов цыплят вирусом лейкоза птиц (ВЛП). Из фабрициевых сумок (ФС) зараженных цыплят в возрасте 35 дней амплифицировали от 5 до 8 разных провирусных интеграции в с-тус. Оценено, что одна из 300 клеток ФС имеет интеграцию ВЛП в этот ген. Эти интеграции сгруппированы в З'-половине интрона 1 Мус, как и в лимфомах ФС. Такие же число и распределение интеграции ВЛП в интрон 1 с-тус обнаружены в костном мозге и селезенке, так что эта область с-тус является обычной мишенью для интеграции. Хотя все ткани имеют одинаковый уровень заражения ВЛП, клетки с инте-грациями в с-тус гораздо чаще встречаются в СФ. Анализ интеграции ВЛП в ген с-erbB обнаружил кластер вставок в интроне 14, ассоциированный с эритробластозом. Провирусные вставки в с-erbB встречаются с одинаковой частотой в костном мозге, селезенке и ФС и распределены случайным образом перед экзоном 15. Это показало, что клетки с интеграцией ВЛП в интрон 14 подвергаются селекции во время индукции эритробластоза.

Культивирование. Вирус саркомы Рауса можно культивировать на цылятах породы белый леггорн. Суспензию вируса вводят в перепонку крыла цыпленка в дозе 0,1—0,2 мл. Через 8—12 дней на месте введения вируса появляются опухоли. Вирус саркомы Рауса титруют на 10—14-дневных цыплятах также инъекцией в перепонку крыла.

Вирус саркомы Рауса и другие вирусы приводят к развитию опухолей при подкожном (ПК), внутримышечном (ВМ) и внутрибрюшинном (ВБ) введении или при контакте с зараженными курами. Подкожное введение в перепонку крыла может использоваться для оценки ТД 50 запасов вирусов саркомы Рауса. Кроме того, этот маршрут введения или внутримышечная инокуляция применяются для выделения и размножения вируса. Для выявления генетической устойчивости к вирусу применялась интра-церебральная (ИЦ) инокуляция однодневных цыплят. После введения в перепонку крыла больших доз вируса опухоли впервые можно было прощупать спустя приблизительно три дня. У восприимчивых кур опухоли могут развиваться быстрее. При этом происходит образование язв и появляются метастазы. При введении малых доз вируса опухоли могут начать появляться лишь спустя 35 дней после инокуляции и позже. Имеется много работ по методам анализа и интерпретации результатов.

При внутрибрюшном введении штамма RPL12 вируса лимфоидного лейкоза однодневным восприимчивым цыплятам линии 151 получена реакция на лимфоид-ный лейкоз через 200—270 дней. Эта процедура применялась для начального выделения вируса при полевых случаях заболевания. Время, необходимое для количественной оценки некоторых штаммов, пассаж которых проводился в лаборатории, сократилось до 63 дней при использовании менее чувствительной реакции на эритробластоз. В этих экспериментах по передаче возбудителя заболевания все источники вируса, которые вызывали лимфоидный лейкоз, также вызывали эритробластоз. У птиц некоторых пород и при определенном пассаже, помимо указанного выше, наблюдались также остеопетроз, гемангиомы и фибросаркомы. Взаимосвязь между вирусом и носителем подробно изучена Бурместером и его коллегами. Вирус миелобластоза птиц (ВМП) может титроваться у цыплят посредством внутривенной инокуляции в 1 —3-дневном зозрасте. ВМП в плазме кур можно оценить по активности аденозинтрифосфа тазы. Последний из указанных методов полезен как при обычных, так и при крупномасштабных исследованиях. Активность некоторых штаммов вируса по индуцированию остеопетроза можно исследовать с помощью внутривенной инокуляции однодневных цыплят или внутримышечного введения инфекционного материала. Цесарки особенно восприимчивы к вызванному штаммом MAV-2 (0) остеопетрозу.

Когда ВСР и другие саркомные вирусы инокулируются ХАО одиннадцатидневных чувствительных эмбрионов, развиваются опухолевые пустулы, которые можно сосчитать спустя 8 дней. Количество пустул находится в линейной зависимости от дозы вируса. Такой метод также полезен для определения генетической резистентности к инфекции. Опухоли можно вызвать и с помощью внутривенной инокуляции на 10—13-й день инкубации или посредством инокуляции желточного мешка на 5—8-й день инкубации.

Количество вирусов лейкоза можно подсчитать с помощью внутривенной инокуляции этих вирусов в 11 - дневные восприимчивые куриные эмбрионы. В течение двух недель инкубирования случается большое количество новообразований {в основном, эритробластоз), хотя могут развиваться также кровотечения и плотные опухоли, в том числе фибросаркомы, эндотелиальные опухоли, нефробластомы и хондромы. У большинства кур, переживших острые неоплазмы, спустя 100 дней после инокуляции развивается лимфоидный лейкоз. При внутривенном введении чувствительным эмбрионам вирус миелобластоза птиц вызывает миелобластозную реакцию в течение нескольких недель.

Вирус саркомы Рауса и другие саркомные вирусы вызывают быструю неопластическую трансформацию клеток при их инокуляции на монослойные культуры фибробластов куриных эмбрионов. Происходит пролиферация трансформированных клеток и в течение нескольких дней образуются разрозненные колонии или очаги трансформированных клеток, которые могут использоваться для количественной оценки вируса.

Репликация большинства штаммов вирусов лейкоза проходит в культурах фибробластов без продуцирования какого-либо очевидного цитопатического воздействия. Их присутствие можно определить с помощью разнообразных тестов. Вирусы лейкоза подгрупп В и D могут вызывать развитие цитопатических бляшек, которые могут использоваться для исследования вирусов. Помимо этого, отмечались морфологические изменения после продолжительного пассажа фибробластов, инфицированных вирусом лейкоза.

Дефектные вирусы лейкемии трансформируют кроветворные клетки in vitro. При инфицировании вирусом миелобластоза птиц клетки желточного мешка и костного мозга трансформируются в культуре в неопластические миелобласты при инфицировании вирусом миелобластоза птиц, а при инфицировании вирусом эритробла-соза птиц клетки костного мозга трансформируются в эритробласты. Трансформация кроветворных клеток под воздействием вирусов МН2, МС29 и ОК10, наблюдались Графом и Бюгом. Такие сильно трансформирующие вирусы лейкоза птиц широко использовались для исследования последовательностей поколений кроветворных клеток птиц и их дифференцировки. Трансформация in vitro В-лимфоцитов под воздействием недефектного вируса лейкоза птиц еще не отмечалась. Были созданы линии опухолевых клеток, полученные из новообразований, индуцированных in vivo ретровирусами птиц, включая лимфоидный лейкоз, миелобластоз, эритробластомие-лоцитому.

Титр рассчитывают по Риду и Менчу. Этот вирус можно культивировать также на КЭ 6—12-дневного возраста при заражении внутривенно, на ХАО, в амнион и в культуре фибробластов КЭ. Вирус вызывает опухоли у цыплят, бляшки на ХАО и очаги малигнизации в культуре клеток.

На ХАО зараженных КЭ вирус индуцирует поражения трех типов: крупные единичные узлы, возникающие вследствие прямого проникновения вируса в мезодерму через повреждение на оболочке, средние повреждения размером ] ,0—1,5 мм и мелкие очаги размером 0,4—0,5 мм с разной степенью четкости. Наиболее чувствительны к вирусу саркомы Рауса эмбрионы кур бурый леггорн.

По размеру бляшек в культуре ФКЭ штаммы вируса саркомы Рауса делят на 2 группы: крупнобляшечную (RSV-RAV-1, RSV-RAV-2, Бриан, RPL-22 и Дядькова, средний диаметр пятен составляет 0,8—1 мм) и мелкобляшечную (средний диаметр колеблется от 0,44 до 0,55 мм). Шт. RSV-RAV-1 вируса размножается на определенных фенотипах куриных фибробластов. Штаммы подгруппы А размножаются в клетках С/В и С/О, подгруппы В — С/А и С/О, подгруппы С — С/О. Чувствительность различных фенотипов куриных клеток к данному вирусу — один из тестов классификации возбудителей лейкозно-саркоматозного комплекса. Эмбрионы и эмбриональная культура ткани японских перепелок рекомендованы в качестве новой безлейкозной клеточной системы для производства вирусных и риккетсиозных вакцин и в научно-исследовательской работе.

Вирус лимфоматоза (шт. RPL-12) культивируют в суточных цыплятах, которых через 3—6 месяцев убивают и проводят гистологическое исследование органов. Вирус лимфоматоза размножается также в культуре ткани куриных фибробластов (не вызывая ЦПИ) и в КЭ при заражении в желточный мешок.

Вирус миелобластоза культивируют на 11-дневных КЭ, заражая их внутривенно плазмой и клеточной суспензией из тканей больных миелобластозом птиц. У 100 % вылупившихся цыплят развивается лейкоз, главным образом миелобластоз. Вируссо-держащие миелобласты, выделенные из крови больной птицы, можно длительно культивировать in vitro, при этом вирус миелобластоза переходит в культуральную среду, не нарушая жизнедеятельности клеток. Размножение их in vitro продолжается неопределенно долго без каких-либо выраженных морфологических изменений. Необходимым для поддержания культуры миелобластов является высокая концентрация фолиевой кислоты в питательной среде.

Вирусом эритробластоза (вируссодержащий материал костного мозга больных птиц) удается заразить 10—11-суточных КЭ, инокулируя материал на ХАО. К 20-му дню инкубации у '/з зараженных эмбрионов развивается типичный эритробластоз. Далее можно последовательно пассировать вирус на ХАО КЭ. Вирус также удается культивировать in vitro в культуре нормальных куриных фибробластов, нормального и эри-тробластического костного мозга. При синтезе вируса эритробластоза складываются иные взаимоотношения между клеткой и вирусом, чем при миелобластозе: инфицированные эритробласты в культуре in vitro относительно быстро изменяются (вакуолизация цитоплазмы, скучивание хроматина ядра), и с 90-го дня культивирования происходит гибель клеток.

Особенности внутриклеточной репродукции. Репродукция РНК-содержащих онко-генны? Гвирусов может идти двумя путями: 1-й характерен только для данной группы вирусов и происходит через стадию синтеза ДНК; 2-й характерен для инфекционных РНК-содержащих вирусов и происходит через 2-нитевую РНК. Большинство исследователей считают, что РНК вирусного потомства синтезируется на материале вирусо-специфической ДНК.

Инфекция вызывает резкое увеличение количества ДНК-синтезируюших клеток, так как ДНК-клетки принимают активное участие в репликации вируса. Транскрипция вирусного генома саркомы Рауса в стационарных клетках (фибробластах КЭ) начинается только после вхождения клеток в стадию деления, которая необходима для начала транскрипции вирусного генома, но не для поддержания активности этого процесса. Синтез РНК вируса находится в прямой зависимости от деления клеток и синтеза клеточной ДНК. Вирус саркомы Рауса использует клеточные транспортные РНК как затравку для вирионной обратной транскриптазы при синтезе ДНК на матрице вирусной РНК. Клеточные транспортные РНК тесно ассоциированы с вирусным геномом.

После синтеза РНК проходит формирование возбудителя (у вируса саркомы Рауса эту роль выполняет вирус-помощник). Зараженная вирусами клетка превращается в злокачественную (трансформация). По существующим представлениям трансформационное изменение клетки возникает и поддерживается за счет строго определенных вируспродуцирующих белков. Ген, ответственный за синтез белков, можно обозначить как раковый ген, или онкоген. Для репродукции лейковирусов онкоген не нужен. Он, вероятно, имеет разную локализацию в геноме вирусов птичьих неопла-зий. Онкоген имеет клеточное происхождение и совершенно случайно включается в состав вируса при его репликации. Случайность включения онкогена (точнее, РНК-овых копий желточных генов) в состав вируса согласуется с относительной редкостью высокотрансформирующих возбудителей в природе. Трансформирующее действие онкорнавирусов — результат трансдукции определенных клеточных генов.

Клетки, пораженные онкорнавирусами птиц, можно разделить на 3 типа: вирус - продуцирующие, вирогенные и вируснепродуцирующие. Вируспродуцирующие клетки регулярно выделяют вирус во внешнюю среду. В вирогенных клетках зрелые частицы возбудителей лейкоза обнаружить не удается. Однако из таких клеток можно освободить вирус при контакте их с крупными клетками. Механизм «освобожне-ния» вируса из генома вирогенной клетки неизвестен. Вируснепродуцирующие клетки — трансформированные, из которых всеми известными методами не удается активировать инфекционный вирус. Особый случай представляет «освобождение» вируса из опухоли хомячков, индуцированной шт. Бриан вируса саркомы Рауса. Для «освобождения» вируса из таких клеток требовалась еще и дополнительная суперинфекция вирусом-помощником. Активация вируса, находящегося в интегрированном состоянии, может быть осуществлена совместным культивированием трансформированных клеток со здоровыми, радиационным облучением клеток и добавлением к клеткам любого вируса-помощника.

В 1974 г. Балтимор предложил простую модель действия онкорнавирусов. Интегрированный с помощью обратной транскриптазы геном может существовать или в латентном полностью (продукция вируса клеткой) или частично репрессированном состоянии. Отсутствие точных данных, когда и как интегрируется вирус в геном клетки, позволяет предположить несколько вариантов, включающих обычную инфекцию, инфекцию с помощью переносчика и возможность постоянного персистирова-ния вирусного генома. Выяснение этого вопроса позволит успешно бороться с контаминацией онкорнавирусами эмбрионов, клеточных культур и самих птиц.

Для штаммов вируса саркомы Рауса характерна дефектность. Оказалось, что вирус для своего созревания нуждается в вирусе-помощнике. Вирус-помощник ответствен за специфичность РН, определяет чувствительность к интерферирующему действию куриных лейкозных вирусов, чувствительность генетически различных линий кур, патогенность для млекопитающих и кинетику образования вируса при индукции. Однако самое интересное и важное то, что вирус-помощнк оказался типичным представителем группы лейкозов птиц. Благодаря этому вирус саркомы Рауса из лабораторной модели стал надежным индикатором при изучении степени распространения возбудителей лейкоза в птицехозяйствах, индикации их в исследуемом биологическом материале, контроле биопрепаратов на онкогенную безопасность и выведения устойчивых и чувствительных к неопластическим заболеваниям линий кур. Вирус саркомы Рауса во всем зависит от своего помощника. В связи с этим, предполагают, что первоначально выделенный Раусом возбудитель был свободен от вируса-помощника и не нуждался в нем для своего созревания. Однако в процессе многолетних пассажей на виремических цыплятах вирус саркомы Рауса изменил свои биологические свойства и стал использовать в качестве помощника лейкозогенных возбудителей.

В составе штаммов вируса саркомы Рауса-Бриан вируса-помощника содержится в 15—20 раз больше, чем основного хозяина. Однако недавно была выделена нулевая форма вируса саркомы Рауса (RSV-0). Инфицирование куриных фибробластов строго одной частицей вируса RSV-0 трансформирует их. Такие клетки выделяют инфекционный вирус, не нуждающийся в помощнике. Этот вирус резко отличался от представителей 3 подгрупп (А, В, С) лейкозно-саркоматозного комплекса птиц: трансформировал клетки типа С/А и, следовательно, не был членом подгруппы А, превращал клетки эмбрионов японской перепелки в злокачественные, значит не входил в подгруппу В, к нему обнаружилась низкая чувствительность клеток С/О и, наконец, он оказался патогенным для млекопитающих. Вирус RSV-0, видимо, существует в тесной связи с геномом клетки и передается по наследству аутосомным доминантным геном. Единственным проявлением его присутствия в клетке служит продукция им gs-АГ, улавливаемого с помощью КОФАЛ-теста.

Недавно геном онкорнавирусов птиц был обнаружен в нормальных клетках КЭ, не продуцирующих частиц онкорнавирусов. В таких клетках содержится специфический генетический фактор, сходный с геномом вирусов птичьих лейкозов, получивший название хельперного фактора, ассоциированного с клетками (chf). Он характеризуется в клеточной хромосоме в интегрированной форме и не может созревать в зрелый вирион. В процессе заражения таких «нормальных» клеток лейковирусом птиц (за исключением типа шт. Бриан — вируса саркомы Рауса) chf может быть выявлен, так как он дает зрелое инфекционное потомство. И наконец, установлено, что вирусы лейкоза птиц рекомбинируют с высокой частотой и недефектными вирусами саркомы птиц. Рекомбинанты возникают путем кросс \; шера.

Источники и пути передачи инфекции. Экономические потери от болезней лейкоз-но-саркомной группы проистекают из двух источников. Во-первых, смертность от болезней этой группы составляет примерно 1—2 % птиц, а в некоторых случаях эта цифра достигает значения 20 % и более. Во-вторых, вызванная вирусом лейкоза птиц субклиническая инфекция, воздействию которой подвергаются большинство птичьих стай, вызывает угнетающее воздействие на ряд важных элементов деятельности, особенно производство и качество яиц.

Для здоровья людей лейкозно-саркомные вирусы птиц не представляют очевидной угрозы. Источником инфекции служит больная птица. Существует горизонтальный (через зараженный корм, воду, подстилку, воздух и т. д.) и вертикальный (от больной матери в яйцо, следовательно, в эмбрионы и цыплят) пути передачи инфекции. Вирус передается по материнской линии. Петухи не передают вирус потомству. Таким образом, больная птица инфицирует здоровых кур и передает вирус потомству.

У зрелых кур имеется четыре серологических класса инфекций, вызванных вирусом лейкоза птиц: отсутствие виремии, отсутствие антител (V-A-); отсутствие вире-мии, наличие антител (V-A+); наличие виремии, наличие антител (V+A+); наличие виремии, отсутствие антител (V+A-). Птицы в стаях, свободных от инфекции, и генетически устойчивые птицы попадают в категорию V-A-. Генетически восприимчивые птицы в инфицированных стаях попадают в одну из трех других категорий. Большинство — в категорию V-A+, а меньшинство (обычно менее 10 %) — в категорию V+A-. Преобладающее количество кур категории V+A - передают вирус лейкоза птиц разной, но сравнительно большой доле своего потомства. Из кур, относящихся к классу V-A+, лишь небольшая часть передает вирус потомству. К тому же это происходит не всегда. Было установлено, что среди кур этой категории чаще передают вирус лейкоза те особи, которые имеют низкий титр антител. У врожденно инфицированных эмбрионов развивается иммунологическая толерантность к вирусу, и после вылупления они попадают в класс V+A - с высоким уровнем вируса в крови и отсутствием антител.

Куры более старшего возраста (2 или 3 года) передают вирус в свои яйца реже и меньшими дозами, чем птицы, возраст которых менее 18 месяцев. Инфицирование петухов, по-видимому, не влияет на степень врожденного инфицирования потомства. На распространение и врожденную передачу после горизонтального инфицирования оказывают влияние генетика носителя и штамма вируса лейкоза птиц. При использовании электронного микроскопа можно наблюдать почкование вируса на всех структурах репродуктивных органов петухов, за исключением терминальных клеток. Это показывает, что вирус не размножается в этих клетках. Следовательно, петух выступает лишь как носитель вируса и источник контактного или полового инфицирования других птиц. Врожденное инфицирование эмбрионов тесно связано с распространением курами вируса лейкоза в яичном альбумине и с присутствием вируса в вагине курицы. Кроме того, эти особенности имеют сильную корреляцию с виремией.

Распространение вируса в яичном альбумине и передача его эмбриону является результатом продуцирования вируса железами яйцевода, выделяющими альбумин. У большинства куриц, передающих вирус лейкоза птиц своему потомству, самые высокие титры вируса были обнаружены в ампуле яйцевода. Это дает основание предполагать, что инфицирование эмбриона тесно связано с ВЛП, переданного с других частей тела. Почкование вируса также случается в различных типах клеток в яичнике, но не фолликулярных клетках и не зародышевых клетках курицы. При этом полагают, что инфицирование через яичник не является очень важным маршрутом передачи вируса. Не все яйца, имеющие вирус лейкоза птиц в альбумине, приводят к развитию инфицированных эмбрионов или птенцов. В исследованиях ряда авторов только 1/2—Vs эмбрионов оказались инфицированными из яиц, имевших вирус в альбумине. Перерывы в передаче вируса потомству могут быть следствием нейтрализации вируса антителами в желтке и результатом потерь от термоинактивации. Передача ВЛП потомству наблюдалась в отсутствие выявленного распространения группоспецифиче-ского антигена.

При исследовании под микроскопом можно обнаружить вирусные частицы во многих органах инфицированных куриных эмбрионов. Вирус почковался и накапливался в большом количестве в клетках поджелудочной железы эмбриона. Эти сильно инфекционные частицы распространяются в помете вылупившихся цыплят. Обычно лишь у небольшого количества инфицированных ВЛП птиц развивается лимфоид-ный лейкоз. Другие остаются носителями и распространителями вируса. Установлено, что вероятность гибели виремически-толерантных птиц (V+A-) от лимфоидного лейкоза гораздо выше, чем тех, которые имеют антитела (V-A+). Частота заболевания лейкозом быстро уменьшается при естественных маршрутах инфицирования птенцов, достигших возраста нескольких недель. Имеются генетические различия в чувствительности к развитию лимфоидного лейкоза у кур, которые в равной степени восприимчивы к вирусной инфекции.

Эндогенные вирусы лейкоза птиц обычно передаются генетически в зародышевых клетках обоих полов. Многие из них являются генетически дефективными. Именно поэтому они не могут привести к развитию инфекционных вирионов. Однако некоторые из них могут экспрессироваться в инфекционную форму в эмбрионах или у вылупившихся птенцов. В этой форме они передаются впоследствии экзогенным вирусам, хотя большинство кур являются генетически устойчивыми к такой экзогенной инфекции. Эндогенные вирусы имеют лишь небольшую онкогенность или вообще ее не имеют. Однако они могут оказывать влияние на реакцию птиц на инфекцию, вызванную вирусом лейкоза птиц. Подавление иммунитета, вызванное вирусом инфекционной бурсальной болезни, увеличивает интенсивность распространения ВЛП.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирусы лейкозно-саркоматозного комплекса часто поражают молодых кур. Болезнь зарегистрирована среди гусей, голубей, индюков, попугаев, канареек и птиц других видов. Реже лейкозом страдают домашние утки и японские перепелки. Секвенированы гены gag изолятов вирусов саркомы и лейкоза птиц (ВСЛП) у 26 видов куриных птиц из Северной и Центральной Америки, Западной Европы. Азии и Африки. У 19 из этих видов птиц ВСЛП обнаружены впервые. Установлено соответствие между филогениями ВСЛП, основанными на последовательностях gag, и филогениями их хозяев, основанными на последовательностях митохондриальной рДНК 16S и ND2. Широкое распределение ВСЛП среди разнообразных эндемичных видов птиц позволило предположить их древнюю ассоциацию. Согласующиеся филогении ВСЛП и их хозяев для 2 видов Perdix, 2 видов Gallus и Lagopus lagopus и L. mutus указывают на давнюю вертикальную передачу и совместное видообразование ВСЛП и их хозяев. Горизонтальная передача ВСЛП среди некоторых членов подсемейства Tetaoninae (шотландских и белых куропаток) подтверждается монофилетическими группами ВСЛП, отражающими географическое распределение и близость хозяев, а не филогению видов хозяев. Предложена предварительная филогенетическая таксономия новых ВСЛП, в которой таксоны соответствуют монофилетическим группам.

Несколько подгрупп J-подобных вирусов Л П (ВЛ П-J) были выделены из стад племенных бройлеров и коммерческих цыплят бройлеров 4-недельного возраста и старше, неблагополучных в отношении миелоидного лейкоза (МЛ). Во всех случаях диагноз на МЛ был основан на выделении типичных макро - и микропоражений в тканях. Изоляты были классифицированы как ВЛП-J по: их способности размножаться в фибробластах куриных эмбрионов (ФКЭ), которые устойчивы к ВЛП подгруппы А и Е; положительному результату в ПЦР с праймерами, специфичными ВЛП-J. Прототип-ным штаммом этих изолятов являлся изолят ADOL-HC1, полученный от племенных бройлеров из стада, неблагополучного в отношении МЛ. ADOL-HC1 был изолирован и получен в к/АЕ ФКЭ. Он антигенно отличался от ВЛП подгруппы А, В, С, D и Е, что было установлено с помощью РН.

Антитела к ADOL-HC1 нейтрализовали штамм HPRS-103 прототипный ВЛП, изолированный от цыплят мясного типа в Великобритании, но антитела к HPRS-103 не нейтрализовали штамм ADOL-HC1.

Распространение ВЛП-.1-инфекции в пораженных стадах оказалось высоким (87 %), что было установлено по наличию виремии и антител. Уровень виремии у однодневных цыплят 3 различных выводков из стада племенных бройлеров, инфицированных ВЛП-J, варьировал от 4 до 25 %, в двух из выводков 100 % цыплят были тестированы при вылуплении как свободные от вируса, но в 8-недельном возрасте у них была отмечена виремия. ВЛП-J был выделен от цыплят мясного типа моложе 4-не-дельного возраста из стада, неблагополучного в отношении МЛ. Результатами подтверждено, что штамм ADPL-HC1 является антигенно родственным, но не идентичным штамму HPRS-103. Кроме того, установлена контактная передача ВЛП-J, которая может привести к установлению толерантной инфекции

Иммунитет и специфическая профилактика. Изучено влияние инфекции in ovo свободных от специфического патогена (SPF) бройлерных цыплят выделенным в Нидерландах штаммом вируса лейкоза птиц подгруппы J. Выявили иммунодепрессивное действие ВЛП-J с помощью измерения гиперчувствительности замедленного типа, активности естественных киллеров, продукции радикалов окиси азота (N0) макрофагами, гуморального иммунного ответа против вируса болезни Ньюкасла и вакцины против ИББ.

Куры, переболевшие лейкозом, вызванным вирусом подгруппы А, восприимчивы к представителям других подгрупп. Как правило, больные лейкозом куры погибают.

Для борьбы с лимфоидным лейкозом и эритробластозом птиц предложена живая вакцина. Ее вводят перорально. Однако она прерывает лишь горизонтальный способ передачи возбудителей. Поэтому, применяя ее, можно предохранить от заболевания не все поголовье. Учитывая, что больная птица контаминирует большинство яиц вирусами лейкоза, можно полагать, что иммунизированное вакциной стадо будет представлять постоянно «дремлющий» очаг инфекции. С профилактической целью при лейкозе птиц следует соблюдать санитарные правила, строго изолировать и своевременно отбраковывать больных птиц, закладывать эмбрионы только от старых кур. Борьба с лейкозом может быть успешной лишь при использовании профилактических препаратов (вакцины против псевдочумы, оспы, ларинготрахеита), неконтаминированных опухолеродными вирусами птиц. Кроме того, нужно постоянно обновлять маточные стада кур особями, генетически резистентными к лейкозу. Резистентную линию кур можно вывести в специализированных безлейкозных хозяйствах.

Воронин и сотрудники в 1973 г. предложили новый принцип формирования без-лейкозного стада кур и использование эмбрионов и эмбриональной культуры ткани японских перепелок для изготовления живых противовирусных вакцин против НБ, инфекционного ларинготрахеита, инфекционного бронхита птиц. Группа из 503 бройлерных цыплят с начальной степенью инфекции 4,6 % выращивалась в 48 малых группах (по 10—12 особей) до 4-недельного возраста. Эта группа была негативной по ALV-J в течение 4—32 недель, не передавала инфекции потомству и у нее не было опухолей. Контрольная группа из 377 цыплят выращивалась как единая группа. В этой группе вирус передавался потомству (5,7 %) и у 5 % кур наблюдались опухоли. Применение приема выращивания бройлеров небольшими группами успешно искореняло инфекцию ALV-J в одной генерации в лабораторных условиях.

Запатентована противоопухолевая вакцина на основе РНК Представляет собой липосомы, содержащие вирусную РНК, преимущественно РНК, кодирующую опухо-леассоциированные антигены. Ее можно использовать для индукции нормальных клеток хозяина к экспрессии опухолеассоциированных антигенов.

До сих пор не найдено никаких практических терапевтических средств для лечения леикозного комплекса птиц. При оценке потенциальных терапевтических агентов надо помнить, что временная ремиссия клинических признаков может происходить самопроизвольно. Все попытки лечить вызванную вирусом неоплазию имели негативные или невоспроизводимые результаты.

Экзогенные вирусы лейкоза птиц можно устранить из птичьих стад. Вплоть до 1977 г эта процедура была применима только для экспериментальных или специальных, SPF стад. Это было связано с тем, что применявшиеся методы были длительными по времени, сложными и дорогостоящими. Но затем, благодаря применению методов Спенсера, такие процедуры стали возможными и для коммерческих стай.

Искоренение инфекции, вызванной ВЛП, зависит от устранения вертикальной передачи вируса от курицы к ее потомству. Чтобы сделать стаю свободной от лейкоза, надо выводить, выращивать и содержать в изоляции группу кур, у которых отсутствует врожденная инфекция. Для достижения этого эмбрионы надо получать от кур, которые не передают вирус своему потомству. В ранних работах по получению стай, свободных от ВЛП, применялись и рекомендовались несколько методов отбора кур. Они заключались втом, что курицы, отобранные для производства последующего поколения, свободного от вируса, имели ряд свойств:

1) обладали иммунитетом, не являлись распространителями вируса. Курицы с антителами выбирались исходя из предположения, что они с меньшей вероятностью, чем курицы без антител могут распространять вирус. Цыплята выводились от тех кур, которые не передавали вирус своим эмбрионам. При этом решение принималось на основе проверки, по крайней мере, трех эмбрионов от каждой курицы;

2) не обладали иммунитетом, не являлись распространителями вируса. Курицы без антител выбирались на том предположении, что они никогда не инфицировались и с меньшей вероятностью, чем курицы с антителами, могли стать промежуточными распространителями вируса;

3) не имели вирусемии вне зависимости от состояния иммунитета. Эти куры использовались для замен, однако требовалось проверить до четырех поколений перед тем, как подтвердить отсутствие виремичных кур в стае. При этом не исключалось инфицирование невиремичных кур.

Применение процедур искоренения инфекции в коммерческих птицеводческих хозяйствах зависело от связей между вирусными инфекциями у кур, яиц, эмбрионов и цыплят. Яичный альбумин может содержать экзогенный вирус лейкоза птиц и антиген gs, причем, оба этих фактора обычно присутствуют вместе. Имеется сильная связь между ВЛП или антигеном gs в яичном альбумине и ВЛП во влагалищных мазках. Имеется сильная связь между ВЛП в влагалищных мазках или яичном альбумине и ВЛП в куриных эмбрионах и у только что вылупившихся цыплят. Следовательно, курицы с низкой вероятностью продуцирования инфицированных эмбрионов — это курицы, отрицательные на вирус (или антигену) при исследовании влагалищных мазков, либо курицы с альбумином, свободным от вируса или антигена Gs.

Обычно вирус во влагалищных мазках или мазках из клоаки может быть выявлен с помощью таких тестов, как ELISA, НП или ФС, а в яичном альбумине — с помощью ELISA или прямого РСКЛП. Маловероятно, что с помощью единственного теста можно определить всех потенциальных куриц-распространителей вируса. Проблема, возникающая при выполнении теста ELISA для альбумина или мазков, заключается в необходимости отличать положительные реакции из-за присутствия антигена gs, происходящего из эндогенного ВЛП или локусов, от реакций, обусловленных наличием инфекции, вызванной ВЛП. Реакции, связанные с последним из указанных факторов, обычно заметно сильнее, но иногда бывает трудно установить границы между инфекциями вызванными эндогенными и экзогенными вирусами, к тому же делается это в определенной степени произвольно. Сильные реакции, обусловленные экзогенным вирусом, дают более ясные результаты с образцами альбумина, чем с мазками. В дальнейшем при выполнении тестов ELISA для проведения различий между инфекциями, вызванными эндогенными и экзогенными вирусами, возможно, будут применяться моноклинальные антитела, развившиеся против белка р27. Кроме того, будут полезными методы полимеразных цепных реакций, использующие специальные праймеры. Процедура устранения вируса лейкоза птиц включает:

Отбор способных к оплодотворению яиц от куриц, показавших негативную реакцию в тестах с использованием яичного альбумина или влагалищных мазков;

Выведение цыплят в изоляции небольшими группами по 25—50 голов в клетках с проволочным полом, отказ от ручного метода определения пола цыплят путем исследования клоаки и проведения вакцинации обычной иглой для предотвращения механического распространения какой-либо остаточной инфекции;

Проверку цыплят на ВЛП с помощью биологических тестов или ГЩР на крови и отбраковывание цыплят с положительной реакцией и других находящихся с ними в контакте цыплят;

Выращивание в изоляции свободных от ВЛП групп. На практике отбор куриц с низкой степенью распространения вируса проще для выполнения, чем последующая проверка цыплят и выращивание их в изоляции для достижения полного устранения инфекции. Поэтому некоторые коммерческие птицеводческие организации концентрируют свое внимание только на уменьшении степени инфицирования посредством проверки куриц. Для многих линий кур заметен прогресс в уменьшении степени распространения вируса, но некоторые линии плохо реагировали на отбор. Такое реагирование не связано с породами кур, а обусловлено, по-видимому, факторами окружающей среды.

Куры больше всего чувствительны к контактному инфицированию вирусом лейкоза птиц сразу же после вылупления. Хотя основным источником инфекции являются, по-видимому, другие цыплята, врожденно инфицированные ВЛП, но имеется ряд процедур, позволяющих уменьшить или исключить инфекцию, оставшуюся от предыдущих популяций птиц. Инкубаторы, выводные отделения, брудерные птичники и все оборудование надо чистить и дезинфицировать перед каждым новым их использованием. Нельзя повторно использовать ящики для цыплят, а на каждой ферме в идеале должны быть цыплята только одного возраста. Опасность попадания в стаю штаммов вируса, еще не присутствующих в популяции, можно исключить, если не смешивать яйца или цыплят из различных источников и если выращивать цыплят в изолированных условиях, позволяющих предотвратить перекрестное заражение стад.

Сообщалось, что вакцинация цыплят в восьминедельном возрасте вирулентным ВЛП предотвращает распространение вируса на яйца и облегчает устранение вирусов лейкоза. Есть данные, позволяющие говорить о том, что вакцинация цыплят в 8-не-дельном или более старшем возрасте обычно не предотвращает распространение вируса на яйца. В то же время, вирус может находиться у цыплят в скрытом состоянии, особенно в лейкоцитах и селезенке.

Запатентованная противоопухолевая вакцина на основе РНК представляет собой липосомы, содержащие вирусную РНК, преимущественно РНК, кодирующую опухо-леассоциированные антигены. Ее можно использовать для индукции нормальных клеток хозяина к экспрессии опухолеассоциированных антигенов.

Частота аллелей, кодирующих чувствительность и резистентность к инфицированию вирусами лейкозно-саркомной группы среди коммерческих линий кур, очень сильно различается. У некоторых линий высокую частоту резистентных аллелей можно обнаружить естественным образом. У других линий частота резистентных аллелей может быть увеличена искусственным отбором. На практике ударение делается на резистентность к преобладающему вирусу подгруппы А, а иногда также к вирусу подгруппы В.

При искусственном отборе генотипы неизвестных родителей можно определить с помощью испытания по потомству посредством спаривания их с рецессивными лабораторными птицами нужной подгруппы (например, агаг для вируса подгруппы А). В зависимости от сегрегации чувствительного и резистентного потомства при отдельном спаривании можно определить генотип неизвестных родителей. Фенотипичес-кая идентификация потомства при испытании может быть выполнена с помощью инокуляции ВСР в хориоалантоисную оболочку с последующим подсчетом чувствительных и резистентных эмбрионов на основе количества пустул. Кроме этого, идентификацию можно осуществить с помощью внутричерепной инокуляции вируса саркомы Рауса вылупившимся цыплятам с последующим подсчетом погибших и выживших цыплят. Первый из описанных методов является более предпочтительным. Он имеет много преимуществ.

У вирусов-мутантов больше вероятность преодолеть резистентность от единственного гена, чем резистентность, связанную с воздействием множества генов. Поэтому такие вирусы могут представлять интерес. В популяции особей, резистентных к проникновению вируса, может не получиться эффективного отбора на резистентность к развитию неоплазмов. По этой причине основными агентами могут стать вирусы-мутанты. Есть вероятность, что проведенный отбор на жизнеспособность может увеличить резистентность инфицированных птиц к развитию неоплазмов. Такой тип резистентности плохо изучен. Однако известно, что он может контролироваться рядом генов, вследствие чего вирусным мутантам труднее преодолеть их влияние. Есть предположение о возможности контроля инфекций, вызванных ВЛП, посредством развития устойчивых популяций кур с помощью трансгенеза.

Возможность использования антивирусных вакцин для повышения резистентности кур является очень привлекательной. Однако этот вопрос не такой простой. Предпринят ряд безрезультатных попыток по инактивации вирусов лейкоза с помощью различных средств. Несмотря на некоторые успехи по инактивации вируса, применяющиеся для этого процедуры не подходят для их использования в полевых условиях. Не увенчались успехом попытки производства ослабленных штаммов вируса, не вызывающих заболевание. Некоторые положительные результаты были достигнуты в увеличении резистентности птиц к ВСР за счет иммунизации вирусными или клеточными антигенами. Схожие подходы предпринимаются и в отношении исследований лимфоидного лейкоза.

Недавно были созданы рекомбинантные ВЛП, под воздействием которых происходит экспрессия оболочковых гликопротеинов подгруппы А. В перспективе их можно будет использовать в качестве вакцин.

Врожденно инфицированные цыплята являются иммунологически толерантными. Поэтому их нельзя иммунизировать даже при наличии подходящих вакцин. К сожалению, именно они представляют собой основной источник передачи вируса. К тому же у них наибольшая вероятность развития новообразований.

В бакуловирусной экспрессионной системе продуцирована и очищена растворимая форма sTva гликопротеина Tva, являющегося рецептором вирусов саркомы и лейкоза птиц подгруппы А. Из 1 л культуры клеток SF9 получено 7—10 мг очищенного sTva. В нем дифференциально используется три сайта N-гликозилирования, но не наблюдается О-гликозилирование, типичное для нерастворимого Tva в клетках млекопитающих и птиц. Очищенные препараты sTva обладают биологической активностью и блокируют заражение ВСЛП-А. Методом ELISA показано, что растворимый глико-протеин имеет высокое сродство к гликопротеину envA. После образования комплекс растворимого и нерастворимого гликопротеинов очень стабилен (период полураспада = 6 ч).

 


Лейкоз птиц - 4.0 out of 5 based on 2 votes

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить