Вирусные инфекции
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 5.00 (1 Голос)

Калицивирусная (пикорнавирусная) инфекция кошек — респираторная болезнь, протекающая у молодых кошек остро, у взрослых — хронически (латентно). Распространена повсеместно. Калицивирусы были выделены от кошек с заболеванием органов дыхания.

Вирус впервые выделил и описал Фостьер в 1957 г. в США. Кошачий калицивирус (FCV) — главный оральный и респираторный патоген кошек, вызывающий как субклиническую инфекцию, так и острое заболевание. FCV — безоболочечный икосаэдральный РНК-вирус, диаметром 30—40 нм, характеризующийся высокой степенью антигенных вариаций.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Пикорнавирусы кошек слабовирулентны, и болезнь обычно протекает латентно. Однако в сочетании с другими агентами бактериальной, вирусной и микоплазмозной природы пикорнаинфекция может вызывать гибель кошек (86 %). Болезнь характеризуется поражением верхних дыхательных путей. У больных отмечают серозный конъюнктивит, ринит, одышку, кашель, депрессию, лихорадку, пневмонию, а также изъязвление слизистой оболочки языка, неба, ноздрей.

Патологоанатомические изменения ограничиваются верхними дыхательными путями и проявляются неспецифическим катаральным воспалением.

Морфология и химический состав. Вирус содержит РНК. Вирионы диаметром 45 нм, имеют 32 капсомера кубической симметрии, диаметр сердцевины 20 нм. У калицивирусов кошек выявлено 7 эпитопов нейтрализации, 4 из которых располагаются на капсидном белке мол. м. ~67 кД. Полные вирионы и 156S субъединичные частицы содержат основной капсидный белок, а также общие эпитопы нейтрализации. Как основные вирионы, так и 156S частицы индуцируют ВНА. Капсидный белок калицивируса кошек (КВК) содержит гипервариабельные области (ГВО) С и Е, считающиеся главными антигенными детерминантами КВК. Сконструированы замены ГВО-Е трех антигенно различных родительских штаммов КВК (CFI, KCD и NADC) на эквивалентные последовательности из инфекционного клона кДНК штамма Urbana. Две из трех конструкций дали жизнеспособные химерные вирусы. Еще в 6 конструкциях, три из которых дали жизнеспособные вирусы, ГВО-Е родительского вируса разделили на N - и С-концевые половины, встроенные в инфекционный клон. Последняя жизнеспособная конструкция содержала ГВО С, D и Е штамма NADC. При использовании гипериммунных сывороток к родительским КВК полученные химерные вирусы проявили заметные антигенные отличия от родительских штаммов. Эти данные показали, что ГВО-Е капсидный белок играет главную роль в образовании антигенной структуры вириона, в которой для нейтрализации КВК более важны конформа-ционные, чем линейные эпитопы.

Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, гуанидину, дезоксихолату натрия, гидрокси-бензил-бензимидазолу (НВВ), а также к рН 4 — 5, что отличает его от рино - и энте-ровирусов; чувствителен к нагреванию — инактивируется при 50 °С в течение 30 мин; MgS04 и MgCh не стабилизируют его. Однако имеется сообщение, что соли натрия частично стабилизируют калицивирусы кошек против термо - и рН инактивации, причем стабилизирующее действие солей по отношению к разным типам этого вируса не одинаково. Выделенная из вируса РНК инфекционна и более устойчива, чем сам вирус (последний в условиях 60 °С теряет патогенность через 10 мин, тогда как препарат РНК из того же вируса разрушается в тот же срок при 65 °С). Антигенная структура не изучена.

Антигенная активность, вариабельность и Родство. У переболевших кошек обнаруживают ВНА. Штаммы калицивируса кошек в антигенном отношении родственны. Они не имеют антигенного родства с пикорнавирусами человека, хотя по некоторым биологическим свойствам сходны с пикорнавирусами групп Коксаки и ECHO. Определялись биотипы FCV Изучали 8 французских. 9 британских и 9 американских изо-лятов. Антигенные профили оценивали методом непрямой иммунофлуоресценции с большой панелью МАт. Перекрестную РН проводили со специфическими кошачьими антисыворотками, собранными через 30 дней после инфицирования. Все изоля-ты вызывали острую инфекцию верхнего респираторного тракта у котят, инфицированных Fcv ороназальио. Антигенные профили различались и не коррелировались с их географическим или патологическим происхождением. Проведенные анализы позволили различать изоляты, вызывающие хронические и острые случаи заболевания. Существование биотипов Fcv не подтверждено, но показано, что состояние хронического носительства связано с возникновением далеких вирусов. Определена полная геномная последовательность калицивирусов кошек (КВК) из Великобритании и Австралии и сравнены с опубликованными последовательностями КВК, выделенных в 1957—95 гг., в различных странах от кошек с разными клиническими симптомами.

Все штаммы проявляют одинаковую вариацию последовательности в генах ORF1 (неструктурный полипротеин) и ORF2 (главный капсидный белок) с расстояниями на аминокислотном уровне, равными 7,7—13,0 % и 8,8—18,6 % Соответственно. В гене ORF3 (минорный структурный белок) обнаружено более гетерогенное распределение родства КВК (расстояния 1,9—17,9 %). Филогенетический анализ показал, что все изоляты КВК относятся к одной неоднородной геногруппе. В этой группе отсутствие географических, и временных кластеров связано с эпидемиологией инфекций KB у кошек. Вариабельные домены обнаружены не только в ORF2, но в меньшей степени и в ORF1 и ORF3. В ORF1 вариабельные домены расположены между функциональными доменами неструктурных белков. Гемагглютинируюгдие свойства вируса не выявлены.

Культивирование. Вирус размножается в культуре клеток почки котят, где через 24—36 ч вызывает ЦПИ. В первичных, перевиваемых и диплоидных культурах клеток Fc3Tg титр вируса достигает 106—10s ТЦДзо/мл - Он не размножается в культурах клеток почки КРС, в фибробластах КЭ и перевиваемых клетках HeLa. Особенности внутриклеточной репродукции изучены недостаточно. В культуре клеток эмбриона кошек вирус выявляется в цитоплазме пораженных клеток — связан с микрофибриллами цитоплазмы. В зараженных клетках характерно присутствие телец-включений. Источником болезни служат больные животные. Инфекция передается при непосредственном контакте.

Иммунитет и специфическая профилактика. Переболевшие кошки приобретают иммунитет продолжительностью до 6 месяцев. В США для профилактики болезни применяют живые инактивированные вакцины. Для изготовления инактивирован-ной вакцины вирус инактивировали глицинальдегидом и готовили водно-масляную эмульсию. 2—3-кратное внутримышечное введение вакцины сопровождалось образованием специфических гуморальных AT (IgM и IgG), а также секреторных (IgA) AT в респираторном тракте. По иммуногенности инактивированные вакцины не уступали живым, полученным из аттенуированных штаммов. Нуклеотидные последовательности, полученные из капсидного гена калицивируса кошек (FCV), штамм 2280, модифицировали путем делеции или инактивации сайтов сплайсинга. Такие последовательности способны транскрибироваться в ядре эукариотической клетки без помощи природного механизма сплайсинга клеток, а аминокислотная последовательность кодируемого капсидного белка не изменена. Рекомбинантные молекулы можно встраивать в векторы на основе герпесвируса кошек FHV-1, которыми инфицируют культуры клеток для получения вакцин против FCV. Представлены методы получения модифицированных последовательностей.

Иммунные препараты и инактивированные вакцины, эффективные против кали-цивироза кошек, включают инактивированный вирус FCV штамма 431, такой, который находится в коллекции 2166, или одного из его эквивалентов, или индиферентного вещества, доступного в ветеринарном плане, главным образом соединенного с вирусом FCV, полученного от другого штамма FCV, в частности штамма G1, под номером 2167 коллекции.

Калицивирусная инфекция собак. Протекает, по-видимому, аналогично таковому у кошек. Возбудитель выделяется многими исследователями и активно изучается в плане изучения биологических свойств вируса и создания эффективных препаратов для профилактики лечения животных. В 1990 г. в Японии выделен калицивирус собак (КВС). По нуклеотидной последовательности, организации и филогенетическому положению этот изолят КВС оказался наиболее близок к калицивирусу кошек и вирусу морских львов Сан-Мигеля, но отличался от них. Высказано предположение, что выделенный изолят КВС представляет новый клон калицивирусов животных и является членом нового рода Vesivirus. Идентифицирован продукт гена ORF2 КВС и изучен его процессинг в клетках млекопитающих. Иммуноблот обнаружил присутствие белка-предшественника 75 кД (I) и образующихся из него капсидного белка 57 кД (II) и N-концевого полипептида 22 кД (III). При экспрессии гена ORF2 КВС в экспрессионной системе млекопитающих найден только белок-предшественник, так что в этой системе он не процессируется. Коэкспрессия ORF2 КВС и гена проте-иназы (IV) калицивируса кошек сопровождается процессингом белка-предшественника на фоне процессинга капсидного белка и N-концевого полипептида. Процессинг блокируется сайт-направленным мутагенезом предполагаемого сайта расщепления белка-предшественника. Эти данные показали, что: протеиназа КВК может расщеплять белок-предшественник КВС с образованием зрелого капсидного белка; КВС может иметь аналогичную протеиназу.