(опыт и перспективы организации противолейкозных и профилактических мероприятий)
Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, наносящая животноводству значительный экономический ущерб, который складывается из нарушения планомерного ведения племенной работы, снижения количества и качества молочной и мясной продукции, вынужденного омоложения стада, недополучения приплода, вынужденного убоя телок, падежа коров, заболевания инфицированных коров, не поддающимися лечению маститами и метритами, снижения эффективности вакцинопрофилактики в стадах, неблагополучных по лейкозу. Кроме того, в хозяйствах, при установлении лейкоза крупного рогатого скота, расходуются средства на проведение ветеринарно-санитарных, зоотехнических и хозяйственных оздоровительных мероприятий [4].
Целью нашей работы было изучить состояние и перспективы организации и проведения противолейкозных и профилактических мероприятий в животноводческих хозяйствах Украины.
Основной задачей профилактических и оздоровительных мероприятий является создание стойкого благополучия по лейкозу крупного рогатого скота в животноводстве. Возможность профилактики и ликвидации этой инфекции основывается на следующих теоретических положениях:
- лейкоз крупного рогатого скота – медленная (хроническая) инфекция;
- этиологический фактор – РНК-содержащий вирус;
- природные резервуары ВЛКРС до настоящего времени не выявлены;
- стадийность течения болезни;
- у инфицированных ВЛКРС животных, в сыворотке крови обнаруживаются антитела к вирусу лейкоза;
- зараженное вирусом лейкоза животное, начиная с 3 дня после инфицирования, может служить источником инфекции;
- лейкоз крупного рогатого скота – инаппарантная инфекция (ВЛКРС и антитела к нему персистируют в организме одновременно);
- контроль за животными, зараженными ВЛКРС, можно осуществлять серологическими методами [6].
При лейкозе крупного рогатого скота источником возбудителя выступает инфицированное животное. Поэтому, удаление из стада всего скомпрометированного по лейкозу скота является важным этапом проведения оздоровительных мероприятий, эффективность которых в значительной степени зависит от используемых диагностических тестов. В 1960-1970 гг. при оздоровлении крупного рогатого скота от лейкоза широко применялся гематологический метод. Благодаря этому своевременно выявляли и выводили из стад животных с сублейкемической и лейкемической стадиями лейкоза, что заметно снизило количество случаев опухолевого проявления болезни. Использование этого метода позволяет в первые 2-3 года уменьшить заболеваемость, стабилизировать ее, снизить до минимального уровня и даже ликвидировать лейкоз в течение 4-5 лет. Однако в дальнейшем в оздоровленных хозяйствах вновь обнаруживали больных лейкозом животных [5].
С выяснением вирусной этиологии, в ветеринарную практику вошли серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющие выявлять животных на более ранних стадиях течения болезни. Начиная с 1992 г. противолейкозные мероприятия в Украине регламентируются «Інструкцією по профілактиці та оздоровленню великої рогатої худоби від лейкозу». При этом основным методом прижизненной диагностики лейкоза является реакция иммунодиффузии в геле агара с лейкозным антигеном. В неблагополучных хозяйствах проводят серологические исследования поголовья старше 4 – 6-месячного возраста с интервалом 30-45 дней. При инфицированности коров до 6% - оздоровление проводят путем сдачи всех серопозитивных животных на убой. Если инфицированность больше 6% - путем разделения стада на серопозитивных и серонегативных животных, выращиванием свободных от ВЛКРС телок и нетелей для последующей замены инфицированных животных. Используя этот метод диагностики в комплексе с выполнением ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, значительному количеству хозяйств удалось оздоровить свое поголовье от этого заболевания [2]. Для повышения эффективности проводимых мероприятий предложен ускоренный метод оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза, который заключается в сокращении интервала между серологическими исследованиями до 10 дней, позволяющий создать серонегативное стадо в течение 2-3 месяцев [3].
Однако притом, что реакция иммунодиффузии обладает надежностью и доступностью, она имеет ограниченный диапазон чувствительности, трудоемкая в постановке, учет результатов только визуальный, то есть в определенной мере зависящий от навыков и опыта исследователя. Поэтому во многих странах мира отдают предпочтение твердофазному иммуноферментному анализу (ИФА, ELISA).
ИФА применяется для индивидуальной и групповой диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, доступностью и стабильностью реагентов, экспрессностью, возможностью автоматизации при проведении массовых исследований, имеет два формата постановки реакции: скрининг и верификацию (подтверждение), дает объективную оценку результатов. Кроме этого, в ИФА можно исследовать не только сыворотку или плазму крови, но и образцы молока, что позволяет избежать стрессовых явлений у животных в период взятия крови, а также распространения ВЛКРС в окружающей среде инфицированной кровью.
В Украине в 2002 г. зарегистрирована тест-система BLV ELISA для иммуноферментной диагностики лейкоза крупного рогатого скота (HerdChek BLV antibody Test kits) фирмы IDEXX (США), которая основывается на специфических моноклональных антителах к gp 51 вируса лейкоза крупного рогатого скота [10]. Проводится значительная работа по созданию и внедрению в практику отечественных диагностических наборов для ИФА. Сравнительные исследования иммуноферментных тест-систем «Bovine Leukemia Virus Antibody Test Kit» (IDEXX Laboratories, США), «DIA-BLV-Ab» (АОЗТ « Диапроф Мед», Украина) и «ІФА-Лейко-АВ» (ОАО ПНП Укрзооветпромснаб, Украина) показали, что отечественные тест-системы по своим качественным характеристикам не уступают своему зарубежному аналогу; тест-система «DIA-BLV-Ab» превосходит тест-систему «Bovine Leukemia Virus Antibody Test Kit» по специфичности, а тест-набор «ІФА-Лейко-АВ» - по чувствительности [9].
В настоящее время наиболее достоверным диагностическим методом считается полимеразная цепная реакция (ПЦР). Это высоко чувствительный и специфичный метод, основанный на прямой индикации инфекционного агента и не требующий иммунологического ответа на проникновение возбудителя в организм хозяина, что дает возможность следить за ранними стадиями развития инфекции. С помощью ПЦР удается выявить фрагмент генома бычьего лейкозного вируса в образцах крови через 1-2 недели после заражения. Реакция позволяет обнаружить провирусную ДНК в крови большинства экспериментально инфицированных животных, которые считались отрицательными по данным серологических реакций.
С помощью полимеразной цепной реакции можно изучать изменения в высокополиморфных локусах хромосом крупного рогатого скота под мутагенным влиянием вируса лейкоза, одновременно определять пол предимплантационных эмбрионов и выявлять вирус лейкоза крупного рогатого скота в их геноме и среде для культивирования. Разработка новых методик и условий проведения ПЦР позволяет выявлять провирус ВЛКРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах (цельная кровь, молоко, носовые истечения, сперма). Метод полимеразной цепной реакции успешно используется в научных лабораториях, занимающихся проблемами лейкоза, может применяться в племенных хозяйствах, где разводят элитный скот, выступать арбитражным методом в сомнительных случаях. Еще более значимо применение ПЦР при производстве препаратов и вакцин из цельной крови так, как на постановку биопробы необходимо около 4-х месяцев. Следует отметить, что, несмотря на проводимую серьезную работу в этом направлении, доля ПЦР в рутинных исследованиях остается крайне незначительной. Постановка полимеразной цепной реакции требует дорогостоящего оборудования и реагентов, определенных профессиональных навыков персонала [7].
Проводятся поисковые исследования в направлении разработки аллергического метода диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Основанием для таких исследований является проявление реакции замедленного действия у животных при хронических инфекциях в случае внутрикожной инокуляции антигена или продуктов метаболизма возбудителя в условиях соответствующей сенсибилизации организма. Установлено, что более выраженная реактивность отмечается у сенсибилизованных вирусом лейкоза животных. Перспективность таких исследований определяется степенью очистки аллергена [1].
В любом регионе страны есть хозяйства, характеризующиеся, как правило, низкой организацией труда, неблагоприятными условиями содержания животных и высокой инфицированностью скота, где процесс оздоровления затягивается на длительное время. Оптимальным в таких хозяйствах явилось бы использование средств специфической профилактики. Вакцинация обеспечивает условия, при которых замедляется или прекращается распространение возбудителя среди восприимчивых животных, что ускоряет сроки оздоровления хозяйств от инфекции [8].
В настоящее время проводится значительная работа по подбору субстратов, наиболее приспособленных для получения специфических антигенов при производстве противолейкозных вакцин, разрабатываются методы вакцинации, проводятся апробации вакцин в условиях производства. На сегодня в Украине разработаны и изучаются на разных этапах производственного внедрения три противолейкозные препарата – вакцина «Лейкопол», «Лейкозав», «Вакцина інактивована проти лейкозу великої рогатої худоби», противолейкозный препарат из краткосрочно культивированных лейкоцитов больного лейкозом крупного рогатого скота КЛК. Однако ни одно из предложенных средств специфической профилактики пока не нашло широкого внедрения в ветеринарную практику, как часть противолейкозных мероприятий.
В настоящее время существующие системы борьбы с лейкозом основываются на следующих принципах:
1. Недопущение выхода за пределы неблагополучного хозяйства источников инфекции. Этого добиваются путем наложения ограничений на неблагополучное хозяйство, в котором поставлен первичный диагноз на лейкоз крупного рогатого скота.
2. Профилактические и оздоровительные мероприятия, направленные на получение племенного и ремонтного молодняка, свободного от ВЛКРС.
3. Мероприятия, направленные на ослабление и прекращение эпизоотического процесса. Это осуществляется путем разрыва эпизоотической цепи в направлениях изоляции восприимчивого здорового поголовья и блокирования факторов передачи.
При этом следует учитывать, что данные о сроках инкубационного периода, путях и факторах передачи ВЛКРС восприимчивому поголовью, особенностях возрастной и индивидуальной чувствительности животных к возбудителю инфекции, разработке и внедрению новых методов диагностики пополняются новыми знаниями. Поэтому, разработаные комплексы противолейкозных мероприятий требуют постоянно коррекции.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Изготовление и лабораторные испытания экспериментальных серий лейкозных антигенов / С. К. Горбатенко, В. И. Цимбал, А. В. Клочко, Н. В. Зданевич // Ветеринарная медицина: межведомств. темат. наук. сб. - Харьков, 2003 - № 82 - С.181-184.
2. Княгницкий Р., Сербенюк И. Из опыта оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза // Ветеринарная медицина Украины - 1997 - № 4 - С. 8-9.
3. Мандигра М. С., Рудь А. Г. Ускоренный метод оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринарная медицина: межведомств. темат. наук. сб. - Харьков, 2003 - № 82 - С.373-376.
4. Нахмансон В. М. Лейкоз крупного рогатого скота - М.: Россельхозиздат, 1986 - 221 с.
5. Нахмансон В. М. Система противолейкозных мероприятий Эпизоотологическая оценка серологического метода диагностики // Ветеринарная газета - 1997 - № 3 - С 3.
6. Практика оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации / М. И. Гулюкин, Л. А. Иванова, Н. В. Замараева, К. П. Грек // Ветеринарная медицина: межведомств. темат. наук. сб. - Харьков, 2003 - № 82 - С.718-726.
7. Применение ПЦР для раннего выявления провируса лейкоза крупного рогатого скота у экспериментально инфицированных животных / Л. Б. Прохватилова, С. Н. Колосов, А. И. Ломакин, В. В. Дрыгин и др. // Ветеринария - 2001 - № 8 - С. 17-21.
8. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота / М. И. Гулюкин, Л. А. Иванова, Н. В. Замараева и др. // Ветеринария. 2002 - № 12 - С. 3-8.
9. Сравнительный аспект серодиагностики лейкемии крупного рогатого скота иммуноферментным анализом и реакцией иммунодиффузии в агаре / Н. Я. Спивак, Л. А. Ганова, Г. Е. Раевская, В. Г. Пилипенко и др. // Ветеринарная медицина: межведомств. темат. науч. сб. по мат. междунар. науч.-пр. конфер. "Ветеринарная медицина - 2005: современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства" (30.05-04.06.2005 г., АР Крым, г. Ялта) - Харьков, 2005 - № 85 - Т. - 2 - С. 1295-1299.
10. Современный метод лабораторной диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Л. А. Абрамова, Ю. А. Собко, И. А. Собко, В. А. Прискока // Ветеринарная медицина Украины - 2003 - № 9 - С. 39-41.
Гавджа М.