Окраска мазков

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 0.00 (0 Голоса)

Окрашивание мазков крови требует внимания и известного опыта со стороны исследователя. Прекрасно приготовленный и хорошо зафиксированный мазок может быть испорчен плохим окрашиванием. Причинами неудачного окрашивания может быть плохое качество краски или же несоблюдение правил окрашивания.

Окрашивание мазков крови должно быть прогрессивным и паноптическим. под прогрессивным окрашиванием понимают продолжительное окрашивание слабыми растворами краски. Окраска зависит от прямого сродства элементов крови к краске. Паноптическим окрашиванием выявляется возможно большее число элементов крови с мельчайшими нюансами тонов окраски. В отличие от комбинированного метода, паноптический требует применения нейтральных красок, а не смеси основных и кислых красок.

Рис. Приспособление для окрашивания мазков.

Приспособление для окрашивания мазков

Среди нейтральных, паноптических красок наиболее важное место занимают азур-эозиновые смеси, изготовляемые по принципу Романовского (1891 г.).

В СССР в настоящее время выпускается готовый раствор азур-эозина (по Романовскому), в Германии широкое распространение нашла краска Гимза, выпускаемая в продажу под названием «Giemsa's Losung fur Romanowsky farbung», состоящая из: азур 2-эозина—3,0, Азур 2—0,8, глицерина химически чистого 125 мл, метилового алкоголя химически чистого 375 мл.

Окраска по Романовскому— Гимза. Для окрашивания используется готовый раствор краски.

Перед употреблением краска разводится из расчета 1—2 капли на 1 мл дистиллированной Зафиксированный препарат помещают мазком вверх на стеклянные палочки над чашкой ипокрывают поверхность мазка высоким слоем разведенной краски. Окрашивание можно производить также в кюветах, наполненных раствором краски. Окрашивание продолжается 15—30 минут; для свежих мазков и в сухую жаркую погоду времени требуется меньше, чем при окраске старых мазков или при окраске в сырую и холодную погоду. По истечении определенного времени краску смывают, лучше дистиллированной водой, мазок для высушивания ставят вертикально на пропускную бумагу. Высушивание мазка можно производить подогреванием на руке.

При окрашивании по методу Романовского—Гимза необходимо соблюдать ряд предосторожностей, чтобы получить правильную окраску:

1) вода должна иметь рН=6,6—6,8;

2) посуда, в которой разводится краска, должна быть чистой;

3) раствор краски готовится ex tempore, перед окраской, а не заранее,

Так как наилучшее окрашивание получается в момент разбавления алкогольного раствора водой;

4) краску следует добавлять в воду по каплям, а не наливать сразу;

5) концентрация раствора не должна превышать три капли на 1 мл;

6) для получения красивой дифференциальной окраски рекомендуется
оставлять дистиллированную воду на мазке после промывки в течение 1 минуты.

Правильная окраска узнается по внешнему виду. Макроскопически мазок должен быть окрашен в розоватый цвете незначительным фиолетовым оттенком. Серые или серо-голубые мазки указывают на избыток щелочи, яркокрасные— на избыток кислоты или слишком кратковременное окрашивание.

Метод Романовского—Гимза особенно хорош при окрашивании мазков на кровепаразитов, а также при окрашивании одновременно нескольких мазков.

Модификация окраски мазков крови краской Романовского — Г имза по Филипсону. Для окрашивания по этому методу требуется особое приготовление краски, которое можно производить заранее, но можно и в момент окрашивания. Берется одна часть жидкой краски Романовского и три части этилового спирта (ректификата). После смешивания со спиртом краска сразу же пригодна для употребления.

На нефиксированный мазок крови наносится 10—15 капель приготовленной вышеуказанным способом краски. Через 10—15 минут, необходимых для фиксации мазка, наливается примерно 0,5—1 мл дистиллированной воды, которая тщательно смешивается с краской. Окрашивание мазка продолжается в течение 20—30 минут (длительность периода окрашивания изменяется в зависимости от температуры воздуха, качества краски и некоторых других причин и может быть установлена в каждой лаборатории самостоятельно). Затем краска смывается дистиллированной водой и мазок высушивается. Высохший мазок годен для исследования.

Окраска по Лейшману. Окраска производится готовым раствором краски Лейшмана. Метод не требует предварительной фиксации, а потому считается быстрым и сравнительно удобным.

На нефиксированный мазок крови наслаивают 15—20 капель краски Лейшмана и оставляют на 3 минуты. Краска, содержащая метиловый алкоголь, фиксирует мазок и одновременно окрашивает клетки крови. По истечении определенного времени в краску добавляется такое же количество дистиллированной воды (15—20 капель) и при помощи стеклянной палочки или пипетки осторожно перемешивают краску с водой. Через 7—15 минут разведенную краску смывают дистиллированной водой. Так же, как и при окрашивании по Романовскому—Гимза, дистиллированную воду лучше в течение 1 минуты оставить на мазке. Затем мазок ставится в вертикальное положение или же высушивается на руке. Краска Лейшмана дает очень хорошие результаты при окрашивании мазков из костного мозга.

Окраска по Ма й-Г рюнвальд. Окрашивание производится готовым раствором краски Май-Грюнвальд. На нефиксированный мазок: крови наносится 15—20 капель краски и оставляют на нем 3 минуты. По истечении указанного времени на мазок наслаивают такое же количество капель дистиллированной воды (15—20 капель). Краска хорошо перемешивается с водой при помощи стеклянной палочки и докрашивается еще 10—15 минут. Дальше препарат промывается дистиллированной водой и высушивается.

Окраска по Паппенгейму. Этот метод соединяет преимущества окраски по Май-Грюнвальду и Романовскому—Гимза. Окраска является комбинированной и заключается в том, что мазок вначале окрашивается по методу Май-Грюнвальда, а затем докрашивается по методу Романовского— Гимза.

На нефиксированный мазок крови наносится 15—20 капель краски Май-Грюнвальда и выдерживается в течение 3 минут. После этого к краске добавляется такое же количество дистиллированной воды и после перемешивания оставляют еще на 3 минуты. Затем краска сливается, стекло ставится краем на пропускную бумагу, чтобы стекла вода. После этого на невысохший еще мазок наслаивается свежеприготовленная краска Романовского—Гимза (15— 20 капель краски на 10 мл воды) и мазок докрашивается дополнительно 15— 30 минут, смотря по давности мазка. По истечении указанного времени краска смывается и мазок высушивается. Если мазки окрашиваются интенсивно, их можно раскрасить дистиллированной водой в течение 1 минуты, а затем высушить.

Витальная окраска мазков крови для выявления гра-нулофиламентозной субстанции в эритроцитах. Для витального окрашивания используются бриллианткрезилбляу, толлуидинбляу, нейтральрот, азур и некоторые другие краски. Самой употребительной является бриллианткрезилбляу, которая окрашивает быстрее других красок и вместе с тем дает более четкий рисунок субстанции. Для окрашивания применяется спиртовой раствор краски в разведении 1 :80. Используется для этой цели абсолютный алкоголь.

На слегка подогретое предметное стекло стеклянной палочкой наносится капля краски и быстро размазывается наподобие мазка крови. На стекле образуется едва заметный серовато-фиолетовый налет краски. Окрашенные таким образом стекла могут храниться продолжительное время в сухом месте. На окрашенной поверхности стекла делают в дальнейшем мазки крови, которые тотчас же вносятся во влажную камеру на 3—5 минут. Влажную камеру можно приготовить из бактериологических чашек. В нижнюю чашку по окружности кладется фильтровальная бумага, смоченная в воде; в центр чашки можно положить две спички, на которые и помещается предметное стекло мазком вверх, после чего чашка закрывается другой чашкой. По истечении определенного времени мазок вынимают из влажной камеры и высушивают.

Витально окрашенные мазки можно дополнительно окрасить краской Романовского—Гимза или Лейшмана. Дополнительное окрашивание дает очень красивые мазки, но часть субстанции при этом исчезает. Для устранения этого недостатка витально окрашенный мазок мы докрашиваем предварительно 1%-ным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 1—2 минут с последующей докраской по Лейшману. Субстанция при таком окрашивании количественно не уменьшается и становится рельефнее.