Подсчет форменных элементов крови

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 0.00 (0 Голоса)

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывается в 1 мм3 крови, а количество кровяных пластинок определяется на тысячу подсчитанных эритроцитов.

Кровь для подсчета может быть взята как из артерии, так и из вены. Сравнение показателей крови из артерий и вен у сельскохозяйственных животных, проведенное Даниловым, показало, что количественной разницы между соответствующими форменными элементами крови артерий и вен не имеется.

Принцип подсчета. Даже в маленькой капле крови форменные элементы тесно прилегают друг к другу, делая невозможным их подсчет. Для подсчета их необходимо разъединить, сделать промежутки между ними настолько большими, чтобы форменные элементы не налегали один на другой. Для этой цели используются изотонические растворы, в которых форменные элементы сохраняют свою форму, и измерительные трубки, позволяющие отмеривать небольшое, но точное количество крови и растворителя. Разведенная кровь помещается дальше в специальные счетные камеры, в которых и производится подсчет форменных элементов.

Смесители, или меланжеры, представляют собой капиллярные трубочки около 10 см длиной, с шаровидным или грушевидным расширением, внутри которого находится стеклянный! шарик, способствующий лучшему смешиванию. На капиллярной части смесителя нанесены деления, обозначенные цифрами 0,5 и 1,0, а за расширением на трубочке—101 или 11. Смеситель с меткой 101 предназначается для подсчета эритроцитов, а с меткой 11—для лейкоцитов. Резервуар эритроцитарных смесителей в 10 раз больше, чем у лейкоцитарных. На смеситель надевается резиновая трубочка с костяным или стеклянным мундштуком. Кровь насасывается ртом. В 'смесителях Паппенгейма кровь насасывается при помощи поршня, который находится на расширенной части сме сителя.

Разведение для подсчета эритроцитов делают из расчета 1 : 100 или 1 : 200, а для лейкоцитов 1 : 10 или 1 : 20.

Для подсчета эритроцитов используется раствор поваренной соли 0,9%, 3%-ный раствор (Фрейфельд), или жидкость Гайема (сулемы 0,1, хлористого натрия 1,0, сернокислого натрия 5,0 и дистиллированной воды 200,0).

Можно также использовать жидкость ИПК (хлористого натрия 7,0, хлористого калия 0,2, лимоннокислого натрия 5,0, сернокислой магнезии 0,04 и дистиллированной воды 1000,0).

Для подсчета лейкоцитов употребляется 1 %-ный раствор уксусной кислоты с примесью краски (3—4 капли 1%-ного раствора генцианвиолет).

Для подсчета лейкоцитов у кур используется изотонический раствор, подкрашенный генцианвиолетом.

Кровь и растворяющая жидкость набираются точно до соответствующей метки. При наполнении смесителей необходимо следить, за тем, чтобы во время насасывания крови или разводящей жидкости не попадали пузырьки воздуха.

Когда смеситель наполнен кровью и соответствующей жидкостью, концы его зажимают между большим и указательным пальцами и несколько раз энергично встряхивают, заставляя перекатываться шарик в резервуаре для смешивания крови с жидкостью. Перемешивание жидкости повторяется перед заряжением камеры до получения равномерной мутной жидкости (гомогенной взвеси).

Счетные камеры. Первая счетная камера была сконструирована в 1884 г. Алферовым. Эта камера не получила распространения и в дальнейшем была видоизменена Бюркером.

Счетные камеры представляют собой толстое предметное стекло, на котором укреплены три стеклянные пластинки; на одной из них нанесена сетка. Имеются также камеры из цельного стекла. В камерах типа Бюркера средняя пластинка разделена желобком на две половины, на каждой из которых выгравировано по сетке.

Средняя пластинка, на которой нанесена сетка, ниже боковых пластинок на 0,1 мм. Если на боковые пластинки наложить покровное стекло, то между ними и средней пластинкой образуется щель, равная 0,1 мм. В эту щель и вводится кровь для подсчета форменных элементов.

Чтобы высота камеры не изменялась, покровное стекло или притирается, или же прижимается с помощью специальных клемм. Критерием плотного прилегания покровного стекла служит появление радужных колец (кольца Ньютона).

четные камерыСмесители

Рис. Смесители:

1—для эритроцитов; 2—Для лейко-цитов.

Рис. Счетные камеры:

А—камера Горяева; Б—Тома—Цейса

В— Бюркера.

После тщательного перемешивания крови в смесителе и удаления 3—4 капель на фильтровальную бумагу, кровь в виде маленькой капли вносится под покровное стекло. В силу капиллярности капля втягивается в просвет между пластинками. Величина капли должна быть такой, чтобы она покрывала всю среднюю пластинку, на которую нанесена сетка, но не выступала за боковые пластинки и покровное стекло.

Заряженная камера помещается на столик микроскопа и устанавливается так, чтобы деления сетки и форменные элементы, лежащие на ней, были отчетливо видны. После того как форменные элементы осядут и станут отчетливо видны на фоне сетки, приступают к подсчету.

Сетки в счетных камерах различных авторов неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

Предтеченский предложил оригинальную сетку, общей площадью 4 мм2 Вся сетка Предтеченского разбита на 100 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 маленьких квадратиков, 50 разбиты на прямоугольники и 25 являются чистыми. Сторона маленького квадрата равна 1/20 мм, а площадь1/400 мм.

Подсчет эритроцитов производится в пяти больших квадратах, разбитых на 16 малых, а лейкоциты подсчитываются на площади всей сетки.

Положительной стороной сетки Предтеченского является то, что большие квадраты, разделенные на малые, четко отграничены один от другого, что позволяет сосредоточиться только на одном большом квадрате. Положительным является и то, что сетка размещена на большой площади (4 мм2).

Рис. Сетка Предтеченского.

Сетка Предтеченского

К недостаткам этой сетки относится то, что приходится подсчитывать лейкоциты на площади всей сетки, как в чистых квадратах, так и в квадратах, разделенных на малые квадраты и прямоугольники, что несколько затрудняет работу. Принцип Предтеченского в построении сетки в 1910 г. был использован Горяевым, который увеличил размер сетки до 9 мм2.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых, 100 на прямоугольники и 100 остаются чистыми.

Каждая из 15 вертикальных и горизонтальных полос сетки Горяева имеет ширину равную 4/20 мм, причем каждая третья полоса, в свою очередь, разделена на четыре узкие полоски шириной в 1/20 пересечением которых образуются маленькие квадратики с площадью в 1/400 мм2. Они группируются по 16, образуя 25 таких групп.

Рис. Сетка Горяева.

 Сетка Горяева

Для подсчета эритроцитов используются большие квадраты, разделенные на 16 маленьких. Эритроциты подсчитываются в пяти таких квадратах, расположенных по диагонали. При анемии количество квадратов при подсчете должно быть увеличено. Чем больше количество больших квадратов, тем ближе к истине будет результат подсчета эритроцитов.

Подсчет лейкоцитов можно проводить в больших чистых квадратах, которые полностью помещаются в поле зрения микроскопа.

При высоком содержании лейкоцитов Горяев рекомендует считать их в группах по три квадрата в 1/25 мм или даже по отдельным квадратам, в последнем случае выгоднее пользоваться теми же квадратами, что и для счета эритроцитов.

Положительной стороной сетки Горяева является отчетливость рисунка, а отсюда легкость и удобство ориентировки при подсчете, резкая отграниченность больших квадратов, разделенных на 16 малых, и большая площадь сетки по сравнению с сеткой Предтеченского. В последнее время камера с сеткой Горяева в Советском Союзе получила широкое распространение.

Из сеток зарубежных авторов наибольшее распространение получили сетки Тома, Бюркера и Тюрка. Первые две являются оригинальными, в то время как последняя представляет сочетание сетки Тома и сетки Бюркера, наложенных одна на другую.

Сетка Тома нанесена в виде большого квадрата, разделенного тройными линиями на 16 средних, квадратов. Каждый из 16, в свою очередь, простыми линиями делится на 16 маленьких квадратиков. Всего таких маленьких квадратиков в сетке 400. Вся сетка по площади равна 1 мм2. Каждая сторона сетки разделена на 20 равных частей. Боковая сторона малого квадрата сетки имеет 1/20*1/20=1/400 мм2. Так как высота в камере равна 1/10 мм, то объем крови в 1 малом квадрате определяется 1/4000 мм3.

 

Рис. Сетка Тома.

 Сетка Тома

Недостатком сетки следует считать то, что квадраты отграничены только тройными линиями, что не дает возможности сосредоточиться на одном большом квадрате, затрудняя тем самым подсчет. Кроме того, площадь этой сетки мала. Сетка Бюркера в этом отношении стоит несколько особняком. Малые квадраты не собраны в группы, а равномерно распределены по всей сетке. Сетка Бюркера равна 9 мм2. Она состоит из 144 больших квадратов по 12 в каждом ряду. Между большими квадратами располагаются малые квадраты по 13 в каждом ряду. Высота камеры 1/10 мм, площадь большого квадрата равна 1/25 мм2 и малого 1/400 мм2. Сетка Бюркера удобна для подсчета лейкоцитов и менее пригодна для подсчета эритроцитов.