Техника приготовления мазков

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 0.00 (0 Голоса)

Мазки готовятся на предметных стеклах. Ввиду того что от качества стекла зависит и качество мазка, необходимо хорошо промывать его и обезжиривать.

Рис.  Техника приготовления мазка.

Техника приготовления мазка

Стекло нужно хорошо промыть в проточной воде, а стекла, бывшие в употреблении, прокипятить в соде или еще лучше, по нашим наблюдениям,— в зольном щелоке. Прокипяченные в зольном щелоке стекла затем хорошо промывают в проточной воде, вытирают чистой сухой тряпочкой и помещают в смеси спирта с эфиром (в равных частях). Перед работой стекла вынимают с помощью пинцета и насухо вытирают чистым полотенцем. Лучшими стеклами являются приготовленные из фотопластинок, так как они не имеют пузырьков и поверхность их ровная и чистая.

В случае нужды можно использовать и старые стекла, бывшие в употреблении. После просмотра и браковки негодных стекол их подвергают тщательной обработке и очистке и после этого хранят в смеси спирта с эфиром.

Первую каплю крови удаляют ваткой, а из второй капли изготовляется мазок. Кровь необходимо использовать возможно быстрее, пока она не претерпела изменений И не потеряла своих фи-зических свойств. Быстронаступающее свертывание крови делает приготовление мазка совершенно невозможным.

Мазок крови нужно делать возможно быстрее и увереннее. При этом условии мазки получаются ровными, однородными и не имеют прерывистых линий (гармошка). При приготовлении мазка предметное стекло зажимается между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке находится шлифованное покровное стекло. Капля крови снимается прикосновением поверхности предметного стекла. У беспокойных животных каплю крови можно снять углом покровного стекла, а затем перенести ее на предметное стекло. Для получения мазков хорошего качества необходимо брать небольшие капли крови.

Прислонив край покровного стекла к капле крови, которая находится на предметном стекле, дают возможность распределиться ей между двумя стеклами. Если стекла чистые и сухие, кровь, в силу капиллярности, распределяется почти моментально. Угол между покровным и предметным стеклом не должен превышать 45—50°. Покровное стекло фиксируется между пальцами правой руки так, чтобы кончик одного или обеих пальцев касался края предметного стекла. В этих случаях мазки получаются с ровными краями. Передвигая покровное стекло по предметному спокойно и не очень быстро, приготовляют мазок. Кровь при движении покровного стекла движется(тянется) за стеклом, а не впереди его, и не подвергается травмированию. Такие мазки называют «вытяжными», что дает довольно точное определение процесса их изготовления.

Приготовленный мазок необходимо сейчас же высушить. Летом это можно сделать, положив его в перевернутом виде на спичку. Переворачивание стекла мазком вниз необходимо делать потому, что летом мазки очень часто портятся мухами. При работе в сыром и холодном помещении мазки можно высушивать на руке, а затем убирать в боковой карман, прикрыв его предварительно чистым стеклом с целью сохранения мазка от повреждения.

Если изготовление мазков производится на морозе 10—15°, то для предотвращения гемолиза, когда они внесены в помещение, их нужно сразу же опустить в кювету с метиловым спиртом и в таком виде нести в теплое помещение.

После фиксации в спирте в течение 5—10 минут мазки окрашиваются обычным методом. Обработанные таким образом мазки ничем не отличаются от сделанных в сухом и теплом помещении и могут быть использованы для самых тонких гематологических исследований.

Просушивание мазков на пламени горелки не рекомендуется, так как форменные элементы крови деформируются и мазки становятся непригодными для исследования. Когда мазок высох, на нем пишется порядковый номер, кличка животного или номер, а также дата приготовления мазка.

Для окраски и исследования отбираются лучшие мазки. Хороший мазок должен отвечать следующим требованиям.

1. Он должен быть уже и короче стекла, т. е. должен иметь свободные края по длине и зазубренный край по ширине в конце мазка.

2. Края мазка должны быть ровными.

3. Мазок должен быть тонким, гомогенным, без просветов и прерываю щих линий, с нежной поверхностью и без следов гемолиза.

Правильно и неправильно приготовленные мазки

Рис.  Правильно и неправильно приготовленные мазки: 1 — мазок на плохо обезжиренном стекле; 2 —слишком короткий мазок; 3 — слишком длинный неравномерный мазок; 4—слишком толстый мазок; 5—Правильный мазок, тонкий, равномерный и достаточно длинный.

При дальнейшем хранении препаратов необходимо оберегать их от насекомых, влаги, действия кислот и щелочей, дыма и различных газов. Плохо сохраняемые мазки становятся иногда совершенно непригодными для исследования, несмотря на качественное приготовление их вначале.

Фиксация мазков. Фиксация мазков преследует цель закрепить клетки крови в таком виде, чтобы форма и внутренняя структура их не изменялась. Большинство артефактов, обнаруживаемых при исследовании мазка крови, зависит от плохой фиксации. Лучшим фиксатором мазков является абсолютный метиловый спирт.

Спирт можно наслаивать непосредственно на мазок высоким слоем. Препарат в этом случае должен лежать горизонтально. Можно также опускать препарат в спирт, налитый в кюветы. В этом случае весь препарат погружается в спирт. Чтобы предотвратить улетучивание спирта, кювета закрывается крышкой или пробкой.

Фиксация метиловым спиртом производится в течение 3—5 минут. Спирт можно использовать для фиксации препаратов вторично, если он не загрязнен. Способ фиксации в кюветах удобен тем, что позволяет фиксировать одновременно четыре препарата.

Кроме метилового спирта, могут использоваться и другие фиксаторы:

1) абсолютный этиловый спирт........................................ ....... 20 минут

2) метиловый спирт + ацетон............................................ .......... 5 »

3) алкоголь + эфир............................................................. 10 »

4) ацетон......................................................................... .......... 5 »

5) осиева кислота (1%-ный водный раствор)] . . . 1/2—1 час

Неооходимо учитывать, что денатурированный спирт и 96° спирт дают очень много артефактов.

Кюветы для фиксации мазков

Рис. 90. Кюветы для фиксации мазков: А — узкая; Б—широкая.

Специальной фиксации мазков не делают только в тех случаях, когда фиксирующие вещества входят в состав красок, например, при окраске по Май-Грюнвальду и Лейшману.

Фиксированные препараты сохраняются в течение продолжительного времени.