ИЗГОТОВЛЕНИЕ НЕРВНО-МЫШЕЧНОГО ПРЕПАРАТА
Физиологию мышц изучают на изолированном нервно-мышечном препарате, который состоит из седалищного нерва и икроножной мышцы лягушки. Лягушку заворачивают в марлю или тряпку так, чтобы свободной осталась только голова. Один конец больших остроконечных ножниц вводят в ротовую полость и одним движением отрезают лягушке голову позади глаз. Тонким зондом или ровной проволокой разрушают спинной мозг. Хорошо промывают водой лягушку и руки. Задние лапки лягушки заворачивают. в полотенце и, держа их левой рукой, опускают лягушку головой вниз.
Правой рукой берут остроконечные ножницы, прокалывают брюшную стенку и отрезают всю переднюю часть туловища, свисает, вместе с внутренностями. Затем правой рукой захватывают остаток позвоночника, а левой - край кожи спины и быстрым движением снимают кожу с обеих задних лапок.
Снятие кожи с лапок лягушки:
А - снятие кожи; Б - обнаженные задние лапки лягушки.
Положив препарат на пробковую пластинку, поднимают пинцетом копчиковую кость и отрезают ее острыми ножницами. Препарат (обе лапки) помещают в чистую ванночку и удаляют остальные внутренности, сохраняя при этом целостность нервов и мышц. Заливают препарат физиологическим раствором для холоднокровных (0,65%-ный раствор поваренной соли) или раствором Рингера. них слизь, которая попала с кожи лягушки.
Подводят один конец ножниц под остатки позвоночника, второй (верхний) направляют точно по срединной линии позвоночника и разделяют препарат на две симметричные половины. Чтобы изготовить изолированный нервно-мышечный препарат лягушки, надо удалить сначала подвздошную кость и освободить седалищный нерв от кровеносных сосудов и тканей, покрывающих его на пути к бедру. Оставляют одну лапку в растворе (про запас), вторую кладут на спинной бок, захватывают мышцу бедра двумя пинцетами или пальцами и раздвигают мышцы до бедренной кости, где лежит седалищный нерв в виде толстой шелковой нити.
Раздвигая пинцетом мышечную и соединительную ткани, освобождают нерв на всем протяжении, как можно дальше вверх к туловищу и вниз к колену. Когда препарируют нерв, нельзя прикасаться к нему металлическими предметами, а лучше применять стеклянные крючки или палочки.
Возле коленного сустава перерезают все мышцы бедра, обнажают бедренную кость и освобождают ее головку из тазобедренного сустава. Бедренную кость используют для фиксации препарата в кимографе при записи сокращения мышцы. Затем отпрепаровывают икроножную мышцу. Для этого подрезают ахиллово сухожилие и, подтянув его вверх, освобождают икроножную мышцу от окружающих ее тканей.
Удаляют голень, перерезав ее нижний конец, и получают готовый нервно-мышечный препарат, состоящий из икроножной мышцы, седалищного нерва и бедренной кости.
При изготовлении препарата надо следить за его влажностью, периодически смачивать физиологическим раствором.
Нервно-мышечный препарат лягушки: 1- часть позвонка;
2- бедренная кость;
3- икроножная мышца; 4- седалищный нерв.
Нервно-мышечный препарат лягушки длительное время сохраняет жизнедеятельность, если ему не дают высыхать. Лучше всего проводить опыты во влажной камере, а при ее отсутствии применять теплый физиологический раствор.
ДЕМОНСТРАЦИЯ СОКРАЩЕНИЯ МЫШЦЫ
Берут икроножную мышцу лягушки, смоченную в физиологическом растворе. Нижний конец ее укрепляют в зажиме мышечного столика, а к верхнему привязывают нить с грузиком (гирькой 10-20Г).
Мышечный столик с мышцей.
Нить перебрасывают через винтовой блок мышечного столика. Ленту шкалы устанавливают на нулевом делении. Электроды подводят к мышце и наносят электрическое раздражение путем замыкания электрической цепи ключом. В ответ на раздражение мышца сокращается и стрелка мышечного столика отклоняется вправо. Нужно записать, на сколько делений отклоняется стрелка мышечного столика при сокращении мышцы и с каким весом поднимает его грузик. Раздражать мышцу можно и кристалликами поваренной соли, смоченными водой. Чтобы ответная реакция наступила быстрее, надо препаровальной иглой разорвать соединительнотканную оболочку (фасцию) мышцы и кристаллики соли приложить на обнаженные мышечные волокна. Отметьте и запишите величину отклонения стрелки шкалы мышечного столика при химическом раздражении.
ЗАПИСЬ СОКРАЩЕНИЯ МЫШЦЫ
Одиночные сокращения мышцы можно записать, пользуясь установкой, состоящей из штатива и смонтированной на нем стрелки. Препарат икроножной мышцы без нерва одним концом закрепляют в верхнем зажиме штатива, а за второй зацепляют крючок с нитью, соединенной со стрелкой. Электроды прибора подводят плотно к мышце и ключом замыкают и размыкают электрическую цепь. В ответ на раздражение мышца будет. Сокращаться и поднимать вверх стрелку. При расслаблении мышцы стрелка будет опускаться вниз.
Затем стрелку прибора подводят к барабану кимографа и пускают его в ход на большой скорости (при малом метелке).
На мышцу наносят электрическое раздражение, замыкая цепь ключом или включая электроды индукционной катушки без прерывателя, чтобы иметь одиночные удары индукционного тока.
В цепь включают фиксатор времени, который регистрирует момент и продолжительность нанесения раздражителя. На ленте барабана кимографа получают кривую одиночного сокращения мышцы - кимограмму.
На кимограмме одиночного сокращения видно, что мышца начинает сокращаться через 0,01Сек после нанесения раздражения, т.е. после скрытого или латентного периода. Сокращение мышцы продолжается 0,04 сек, после чего наступает расслабление продолжительностью 0,05сек.
Чтобы получить кривую тетанического сокращения, надо нанести ряд раздражений, идущих одно за другим со скоростью не менее, как 30-40 раздражений в секунду. Количество нанесения раздражений постепенно увеличивают. Сначала наносят раздражения частотой 15 в секунду. Наблюдают кривую неполного или зубчатого тетануса. Затем увеличивают частоту раздражений до 30-40 в секунду и снова получают кривую полного или совершенного тетануса.